目的:本研究旨在探討孕酮對(duì)戊型肝炎病毒（HEV）感染細(xì)胞中Ⅰ型IFN信號(hào)通路的機(jī)制的影響,為孕婦感染戊型肝炎的臨床治療和預(yù)防控制提供理論基礎(chǔ)。方法:HEV感染A549細(xì)胞后,熒光定量PCR檢測HEV。細(xì)胞感染模型建立成功后,用不同劑量孕酮（PG）、米非司酮（MF）和干擾素ɑ（IFN-ɑ）單獨(dú)或聯(lián)合處理模型細(xì)胞,以未加藥物處理的模型細(xì)胞和未感染病毒A549細(xì)胞為對(duì)照,采用Western-blotting檢測不同組細(xì)胞JAK-STAT信號(hào)通路中磷酸化蛋白質(zhì)酪氨酸激酶（Jak1）、磷酸化酪氨酸蛋白（Tyk2）、信號(hào)傳導(dǎo)轉(zhuǎn)錄激活因子1（Stat2）、信號(hào)傳導(dǎo)轉(zhuǎn)錄激活因子（Stat2）磷酸化水平及黏病毒抗性蛋白1（MX1）、蛋白激酶（PKR）、2,5寡腺苷酸合成酶1（OAS1）蛋白表達(dá)水平。結(jié)果:1.HEV感染A549細(xì)胞后,提取細(xì)胞內(nèi)RNA,進(jìn)行熒光定量PCR,結(jié)果顯示在溶解溫度Tm=80℃處呈現(xiàn)特異的峰值,沒有引物二聚體和非特異性產(chǎn)物,經(jīng)測序結(jié)果提示模型建立成功。2.模型組磷酸化Jak1蛋白表達(dá)上調(diào)（vs空白對(duì)照組,P<0.001）;IFN-ɑ干預(yù)可引起磷酸化Jak1蛋白表達(dá)下調(diào)（vs... 

【文章來源】：皖南醫(yī)學(xué)院安徽省

【文章頁數(shù)】：76 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

病毒拮抗I型干擾素信號(hào)通路[28]

圖 2 HEV 實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 的溶解曲線.7 免疫印跡法檢測 A549 細(xì)胞 JAK-STAT 通路中各蛋白的表達(dá)水平7.1 藥物干預(yù)觀察各孔細(xì)胞生長狀態(tài)，匯合度達(dá)到50%~60%接種病毒100μl (1.5×107拷貝/ml)

圖 3：戊型肝炎病毒轉(zhuǎn)染 A549 細(xì)胞后形態(tài)學(xué)變化A： HEV 陰性糞便懸液攻毒對(duì)照細(xì)胞；B：攻毒 4h 后細(xì)胞形態(tài)；C：感染一天后后細(xì)胞形態(tài)；D：感染兩天后細(xì)胞形態(tài)；E：感染三天后的細(xì)胞形態(tài)；F：感染四天后的細(xì)胞形態(tài)。2 孕酮、米非司酮干預(yù)后 JAK-STAT 信號(hào)通路中蛋白的表達(dá)

【參考文獻(xiàn)】：
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本文編號(hào)：2993108