妊娠期糖尿病（Gestational Diabetes Mellitus,GDM）,是指妊娠過程中,由于拮抗胰島素物質(zhì)增加,胰島素分泌受限的孕婦不能代償生理變化而發(fā)生不同程度的糖耐量受損或者血糖升高。GDM是一種最常見的妊娠并發(fā)癥之一,嚴重威脅著孕婦和后代的身體健康。對母親的影響包括:圍產(chǎn)期羊水過多及微血管病變,臟器功能受損,后期發(fā)生Ⅱ型糖尿病、肥胖等代謝綜合征的風險增加;對胎兒的影響包括導致巨大兒、胎兒生長受限、胎兒窘迫、甚至胎死宮內(nèi),后期易發(fā)生代謝紊亂疾病等。目前,關(guān)于GDM發(fā)病機制還未完全闡明。因此,建立穩(wěn)定的妊娠期糖尿病實驗動物模型,聯(lián)合臨床病例,深入研究GDM病理機制,尋找靈敏、可靠的生化指標,對GDM孕婦進行早期的排查和制定有效的干預(yù)及治療措施,并對高危GDM孕婦進行早期干預(yù),具有重要的臨床及保健意義。本論文的研究內(nèi)容如下:（1）建立兩種GDM動物模型進行分子靶點的篩選。首先,在妊娠前的雌性小鼠經(jīng)過長期高脂飼料喂養(yǎng)（High-fat-diet,HFD）,HFD喂養(yǎng)小鼠出現(xiàn)不同程度的代謝紊亂及不同程度生殖功能不全;其次,建立僅在妊娠期進行HFD喂養(yǎng)的動物模型,HFD喂養(yǎng)的孕鼠... 

【文章來源】：中國科學院大學(中國科學院深圳先進技術(shù)研究院)廣東省

【文章頁數(shù)】：132 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第1章 引言
    1.1 研究背景
    1.2 GDM發(fā)病機制的研究
        1.2.1 胰島素抵抗與GDM發(fā)病機制的研究
        1.2.2 胰島β細胞功能不全與GDM發(fā)病機制研究
    1.3 脂肪因子與GDM
    1.4 chemerin及其受體介紹
    1.5 骨骼與糖代謝
    1.6 OPG介紹
        1.6.1 OPG與糖代謝
        1.6.2 OPG與心血管相關(guān)研究
        1.6.3 OPG與妊娠綜合征
    1.7 小結(jié)
第2章 GDM動物模型選擇和分子靶標的篩選
    2.1 實驗材料與方法
        2.1.1 實驗材料
        2.1.2 動物實驗
        2.1.3 腹腔注射葡萄糖耐量實驗步驟
        2.1.4 腹腔注射胰島素耐量實驗步驟
        2.1.5 小鼠動情周期檢測
        2.1.6 ELISA檢測胰島素實驗步驟
        2.1.7 ELISA檢測小鼠血清chemerin實驗步驟
        2.1.8 ELISA檢測小鼠血清OPG實驗步驟
        2.1.9 血清激素和生化指標檢測
        2.1.10 基因microarray分析
        2.1.11 RNA提取及實時熒光定量PCR
        2.1.12 組織石蠟包埋與切片
        2.1.13 免疫組織化學實驗（IHC）
        2.1.14 統(tǒng)計分析
    2.2 實驗結(jié)果
        2.2.1 雌性小鼠生長發(fā)育過程中長期高脂飲食喂養(yǎng)對代謝穩(wěn)態(tài)的影響
        2.2.2 長期高脂飲食喂養(yǎng)對雌性小鼠生理周期影響
        2.2.3 長期高脂飲食喂養(yǎng)引起雌性小鼠白色脂肪組織基因差異性表達
        2.2.4 長期高脂飲食喂養(yǎng)引起雌性小鼠白色脂肪組織中基因富集基因
        2.2.5 妊娠過程HFD喂養(yǎng)對孕鼠代謝穩(wěn)態(tài)的影響
        2.2.6 chemerin/GPR1信號系統(tǒng)研究靶點篩選
        2.2.7 骨保護素（OPG）研究靶點篩選
    2.3 小結(jié)
第3章 GPR1在妊娠期糖尿病發(fā)生發(fā)展和滋養(yǎng)層細胞增殖中作用機制的研究
    3.1 實驗材料與方法
        3.1.1 實驗材料
        3.1.2 臨床樣本收集
        3.1.3 GPR1動物干預(yù)實驗
        3.1.4 腹腔注射葡萄糖耐量試驗（IPGTT）方法
        3.1.5 腹腔注射胰島素耐量試驗（IPITT）方法
        3.1.6 饑餓血糖檢測
        3.1.7 組織形態(tài)學實驗步驟（HE）
        3.1.8 免疫組織化學
        3.1.9 血清甘油三酯（TG）檢測步驟
        3.1.10 細胞培養(yǎng)穩(wěn)準細胞構(gòu)建
        3.1.11 細胞瞬間轉(zhuǎn)染實驗步驟
        3.1.12 蛋白提取及濃度檢測實驗步驟
        3.1.13 Western blotting（蛋白免疫印跡）實驗步驟
        3.1.14 實時熒光定量PCR
        3.1.15 免疫細胞熒光步驟
        3.1.16 胎盤TG檢測
        3.1.17 組織油紅O染色實驗步驟
        3.1.18 細胞脂滴積累實驗
        3.1.19 細胞增殖實驗步驟
        3.1.20 細胞侵襲實驗步驟
        3.1.21 動物荷瘤實驗
        3.1.22 統(tǒng)計
    3.2 結(jié)果
        3.2.1 chemerin及其受體在GDM病人胎盤中表達
        3.2.2 chemerin/GPR1系統(tǒng)在孕鼠中表達上調(diào)
        3.2.3 降低GPR1表達對妊娠小鼠血糖代謝影響
        3.2.4 GPR1對妊娠期胰島功能的影響
        3.2.5 小鼠胎盤中GPR1敲低效率驗證
        3.2.6 GPR1對胎盤中GLUT3表達影響
        3.2.7 GPR1對胎盤中脂質(zhì)代謝影響
        3.2.8 GPR1促進滋養(yǎng)層細胞中GLU3和脂質(zhì)積累
        3.2.9 GPR1通過pAKT/AKT信號通路調(diào)控滋養(yǎng)細胞的糖脂穩(wěn)態(tài)
        3.2.10 GPR1在滋養(yǎng)層細胞中表達水平
        3.2.11 GPR1對pERK/ERK和pAkt/Akt信號通路影響
        3.2.12 GPR1對絨毛膜癌細胞侵襲和增殖功能的影響
        3.2.13 GPR1調(diào)控絨毛膜癌細胞侵襲和增殖功能的機制
        3.2.14 GPR1敲低可以抑制絨毛膜癌腫瘤生長
        3.2.15 一種GPR1特異性結(jié)合肽,LRH7-G3篩選
        3.2.16 LRH7-G3可以抑制絨毛膜癌腫瘤生長
    3.3 小結(jié)
        3.3.1 GPR1能夠影響妊娠期高脂飲食喂養(yǎng)的小鼠的血糖
        3.3.2 代謝相關(guān)的靶點GPR1能夠參與調(diào)控絨癌的發(fā)生
第4章 OPG在妊娠期糖尿病發(fā)生發(fā)展中作用
    4.1 實驗材料與方法
        4.1.1 實驗材料
        4.1.2 慢病毒包裝及檢測實驗
        4.1.3 孕鼠和假孕鼠實驗
        4.1.4 囊胚體外慢病毒感染及移植實驗
        4.1.5 糖代謝檢測
        4.1.6 免疫熒光
        4.1.7 蛋白免疫印跡
        4.1.8 實時熒光定量PCR
        4.1.9 胰島細胞分離實驗步驟
        4.1.10 葡萄刺激胰島素分泌實驗步驟（GSIS）
        4.1.11 胰島素檢測
        4.1.12 血清和組織勻漿OPG檢測
        4.1.13 統(tǒng)計分析
    4.2 結(jié)果
        4.2.1 OPG在GDM病人中表達上調(diào)
        4.2.2 OPG在妊娠期小鼠中表達情況
        4.2.3 小鼠胎盤特異性O(shè)PG過表達
        4.2.4 胎盤特異性O(shè)PG能夠促進HFD誘導GDM小鼠代謝穩(wěn)態(tài)
        4.2.5 胎盤特異性O(shè)PG能夠促進HFD誘導GDM小鼠β細胞增殖
    4.3 小結(jié)
第5章 討論及展望
    5.1 GDM模型的選擇和建立
    5.2 GDM潛在分子靶點研究
    5.3 研究工作的創(chuàng)新性
    5.4 下一步工作計劃
參考文獻
附錄
致謝
作者簡歷及攻讀學位期間發(fā)表的學術(shù)論文與研究成果



本文編號：2971103