發(fā)布時(shí)間：2021-01-07 20:45

　　目的本實(shí)驗(yàn)通過(guò)構(gòu)建pPIC9k-his-HPV16E7-IL-28B（Linker）及pPIC9k-IL-7-IL-15（Linker）分泌型重組表達(dá)質(zhì)粒（以下簡(jiǎn)寫(xiě)為pPIC9k-E7-IL28B、pPIC9k-IL7-IL15）,轉(zhuǎn)化畢赤酵母進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá),從而為研究其對(duì)宮頸癌的免疫治療作用提供新的參考思路和依據(jù)奠定基礎(chǔ)。方法1.根據(jù)畢赤酵母密碼子使用頻率表,利用OptimumGene軟件對(duì)基因E7-IL28B進(jìn)行密碼子優(yōu)化;2.運(yùn)用分子克隆技術(shù)分別構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒載體pPIC9k-E7-IL28B及pPIC9k-IL7-IL15;將重組表達(dá)載體pPIC9k-E7-IL28B及pPIC9k-IL7-IL15電轉(zhuǎn)化入P.pastoris GS115中并進(jìn)行多拷貝轉(zhuǎn)子篩選;3.探索甲醇濃度、誘導(dǎo)溫度、誘導(dǎo)時(shí)間、培養(yǎng)基pH值等不同條件下融合蛋白pPIC9k-E7-IL28B及pPIC9k-IL7-IL15的表達(dá)情況,同時(shí)對(duì)這兩種融合蛋白運(yùn)用SDS-PAGE進(jìn)行分析。結(jié)果成功構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒載體pPIC9k-E7-IL28B及pPIC9k-IL7-IL15,并通過(guò)遺傳霉素（G418）篩選到高拷... 

【文章來(lái)源】：甘肅中醫(yī)藥大學(xué)甘肅省

【文章頁(yè)數(shù)】：61 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

密碼子優(yōu)化前后使用統(tǒng)計(jì)圖

68% >30% 組質(zhì)粒載體鑒定B 結(jié)果 pUC57-E7-Linker-IL-28B（這兩種質(zhì)粒為模板、以 2.2后，在 880bp 左右得到與bp 1 2 M

融合質(zhì)粒 HPV16E7-IL28B 與 IL7-IL15 的構(gòu)建及其在畢赤酵母粒載體 pPIC9K-E7-IL28B（優(yōu)化前后）菌液 P 鑒定R 擴(kuò)增后的目的基因及載體用 EcoR I、Not I 進(jìn)物純化（生工膠回收、產(chǎn)物純化試劑盒），之后構(gòu)成重組表達(dá)質(zhì)粒載體。連接產(chǎn)物轉(zhuǎn) E.col（iD數(shù)個(gè)單克隆菌落，挑取部分單克隆在 LB 液體定,結(jié)果如下圖 3-3、圖 3-4。bp M 1 2 bp M 1 25000

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]宮頸癌患者外周血中CD4+CD25+Foxp3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的表達(dá)[J]. 韓雪,李雯,李明錦,朱慧慧,劉會(huì)玲.  甘肅醫(yī)藥. 2016(11)
[2]Pichia pastoris X-33 ΔGT2緩解甘油對(duì)AOX1的阻遏并用于外源蛋白的高效表達(dá)[J]. 張震陽(yáng),楊艷坤,戰(zhàn)春君,李翔,劉秀霞,白仲虎.  中國(guó)生物工程雜志. 2017(01)
[3]嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌角蛋白酶基因在畢赤酵母中的表達(dá)[J]. 李光磊,張娟,方真,隆明星,堵國(guó)成,陳堅(jiān).  生物技術(shù)通報(bào). 2016(08)
[4]DC疫苗聯(lián)合CIK細(xì)胞治療39例中晚期宮頸癌的臨床療效觀察及預(yù)后分析[J]. 江龍委,黃偉謙,姚露,張燕,艾月琴,鄭劼,高艷榮,張闖,趙華,胡建華,賈紹昌,肖梅.  中國(guó)腫瘤生物治療雜志. 2015(06)
[5]共表達(dá)透明顫菌血紅蛋白提高脂肪酶在畢赤酵母中的表達(dá)[J]. 盧俊裕,林影,梁書(shū)利,葉燕銳.  現(xiàn)代食品科技. 2014(06)
[6]表達(dá)乙肝表面抗原結(jié)合蛋白的畢赤酵母工程菌遺傳穩(wěn)定性研究[J]. 李津,范長(zhǎng)勝,朱乃碩.  藥物生物技術(shù). 2014(01)
[7]不同碳源下畢赤酵母GS115蛋白組學(xué)分析[J]. 田小梅,任建洪,房聰.  中國(guó)生物工程雜志. 2012(01)

博士論文
[1]結(jié)核亞單位疫苗免疫方案和IL-7、IL-15對(duì)T細(xì)胞免疫記憶的影響[D]. 白春香.蘭州大學(xué) 2018



本文編號(hào)：2963216