目的探討Orai1的體外干預(yù)對(duì)宮頸息肉（CP）中炎癥反應(yīng)的作用。方法收集復(fù)旦大學(xué)附屬華山醫(yī)院北院病理科2016年至2019年期間40例CP患者的息肉組織,用器官培養(yǎng)技術(shù)進(jìn)行體外培養(yǎng),然后將2-氨基乙基聯(lián)苯基硼酸酯（2-APB）作為體外干預(yù)手段,以免疫組織化學(xué)染色方法檢測(cè)2-APB干預(yù)前后CP中Orai1蛋白的表達(dá)情況,接著用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）和實(shí)時(shí)定量反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）分別檢測(cè)2-APB干預(yù)前后CP組織中Orai1蛋白及其mRNA的含量,最后再用上述方法檢測(cè)CP組織中白介素（IL）-1β、腫瘤壞死因子（TNF）-α及其mRNA的濃度。結(jié)果免疫組織化學(xué)染色顯示CP標(biāo)本中表達(dá)Orai1蛋白,而且2-APB干預(yù)后該蛋白的染色評(píng)分減少;ELISA法和實(shí)時(shí)定量RT-PCR法檢測(cè)結(jié)果表明,2-APB干預(yù)后CP中Orai1蛋白及其mRNA的含量均較干預(yù)前減少（t值分別為5.76、10.85,均P<0.05）,炎癥介質(zhì)IL-1β、TNF-α及其mRNA的濃度也顯著低于干預(yù)前（t值分別為15.28、6.35、7.10、17.74,均P<0.05）。結(jié)論 Orai1... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)婦幼健康研究. 2020年09期

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IL-1β和TNF-α的ELISA和實(shí)時(shí)定量RT-PCR檢測(cè)

將CP組織以器官培養(yǎng)的方法進(jìn)行體外培養(yǎng)[4]。將獲取的息肉組織在無(wú)菌條件下分割成2～3mm3大小的組織塊,用含有5μg/mL兩性霉素B和300μg/mL青霉素G的磷酸鹽緩沖液清洗,再用含有10%小牛血清和20μg/mL慶大霉素的濃度為98%的達(dá)爾伯克(氏)必需基本培養(yǎng)基(Dulbecco" s minimum essential medium,DMEM)再清洗,隨后加入50μmol/L 2-氨基乙基聯(lián)苯基硼酸酯(2-aminoethoxydiphenyl borate,2-APB)(美國(guó)Sigma-Aldrich)共孵育1h,接著將組織塊置于1cm×1cm大小的濕明膠海綿上,息肉面朝上,另一面朝下,將明膠海綿置于含有3mL培養(yǎng)液的6孔板上,使息肉高于液面,6孔板置入溫度為37°C和含有5%CO2空氣的潮濕孵育箱中,并進(jìn)行轉(zhuǎn)速為15rpm的連續(xù)轉(zhuǎn)動(dòng)24h,最后收集組織塊進(jìn)行下一步研究。見(jiàn)圖1。1.3免疫組織化學(xué)染色

本研究中IHC染色從組織形態(tài)學(xué)分析,發(fā)現(xiàn)Orai1蛋白陽(yáng)性染色定位于鱗狀上皮細(xì)胞膜,干預(yù)前后CP組織中均呈現(xiàn)Orai1蛋白陽(yáng)性染色表現(xiàn),但干預(yù)前染色面積和強(qiáng)度更大,見(jiàn)圖2;以IHC進(jìn)行綜合評(píng)分,干預(yù)前CP染色評(píng)分均在4～9分,干預(yù)后評(píng)分均在1～3分,見(jiàn)表1。表1 Orai1蛋白表達(dá)Table 1 Expression of Orai1 protein 評(píng)分 干預(yù)前(n=40) 干預(yù)后(n=40) 評(píng)分1～3 0/40 40/0 評(píng)分4～9 40/0 0/40

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]宮頸炎患者宮頸癌篩查前后心理狀態(tài)變化及心理干預(yù)研究[J]. 高寶俠,劉潤(rùn)潤(rùn),崔緒琴,謝琪,張忠明.  中國(guó)婦幼健康研究. 2017(11)



本文編號(hào)：2937642