本文關鍵詞：XAV939對卵巢癌SKOV3細胞的生長抑制及順鉑增敏作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景與目的卵巢癌,以卵巢上皮性癌(Epithelial ovarian cancer,EOC)為主,是女性婦科腫瘤相關死亡的主要原因,也是婦科最致命的惡性腫瘤。據(jù)統(tǒng)計,1999-2010年間我國卵巢癌的總體粗死亡率為7.91/10萬,年齡校正總死亡率為5.35/10萬[1]。由于缺乏用于早期診斷的特異性指標及該病發(fā)病的隱匿性,大部分卵巢上皮性癌患者因癥狀出現(xiàn)而就診時已處于臨床晚期,而傳統(tǒng)的化療方案則因癌細胞化療藥物抗性的產生難以達到治療效果,使得該病的治療遇到了前所未有的挑戰(zhàn)[2]。因此,更好地研究與卵巢癌發(fā)生發(fā)展及耐藥性獲得相關的分子機制,從而找到早期診斷靈敏度高的特異性指標和針對性強且副作用小的分子靶向治療藥物已迫在眉睫。最近一些國內外學者均發(fā)現(xiàn),目前在腫瘤治療方面研究相當火熱的Wnt/β-catenin通路的活化可能參與了卵巢癌的發(fā)生發(fā)展及其化療藥物的耐受[3;4]。研究證明在卵巢上皮性癌中存在一些表達上調的Wnt/β-catenin通路成員蛋白,例如細胞外信號蛋白Wnt-1、通路核心蛋白β-catenin及下游靶基因轉錄蛋白c-myc、cyclinD1,其中β-catenin參與了卵巢癌細胞的異常增殖和轉移。因此,如果找到可以抑制該通路中任意環(huán)節(jié)的靶向性藥物,我們便有望解決化療藥物毒副作用大和腫瘤耐藥這兩大世界性難題,為每一位腫瘤患者帶來希望。端粒酶作為端粒長度的“守衛(wèi)員”,早在上世紀末就被證明在許多惡性腫瘤中表達上調,其中也包括婦科死亡率最高的卵巢癌,murakami等[5]通過對卵巢良性、交界性及惡性腫瘤組織的分析發(fā)現(xiàn),92%的組織中端粒酶呈現(xiàn)高表達,且腫瘤分化程度與酶的活性呈現(xiàn)負相關。目前,有不少學者正在嘗試將端粒酶的特異性抑制劑應用于腫瘤的治療中,主要集中于肝癌、鼻咽癌、胃癌及卵巢癌等方面,也取得了一定的成效,但并沒有為腫瘤的獲得性藥物耐受問題帶來幫助。端錨聚合酶(tankyrase)是一種多功能蛋白酶,其一方面利用糖基化功能抑制tankyrase1/2的活性,為端粒酶提供作用位點并維持染色體末端穩(wěn)定性;另一方面則可增加錨蛋白的穩(wěn)定性,進而加速β-catenin降解,介導wnt/β-catenin通路的正向運行。xav939是huang,s.m等[6]學者于2009年基于抑制β-catenin轉錄而篩選出的wnt/β-catenin通路特異性小分子抑制劑,他們利用定量化學蛋白質組學方法發(fā)現(xiàn),其發(fā)揮作用主要依賴于介導錨蛋白穩(wěn)定性的增加,促進該通路的“開關蛋白”β-catenin的降解,進而對腫瘤達到治療效果。本次研究將端錨聚合酶抑制劑xav939作用于人卵巢腺癌順鉑原發(fā)耐藥細胞株(skov3細胞株),并檢測細胞用藥后的增殖、凋亡情況及細胞核質內tankyrase、cyclind1和β-catenin的表達情況,以期為卵巢癌小分子靶向治療藥物的研發(fā)和耐藥的逆轉提供新的方向。材料與方法人卵巢癌skov3細胞體外復蘇并培養(yǎng)至對數(shù)期,將這些細胞分為端錨聚合酶抑制劑(xav939)組、順鉑組、兩者聯(lián)合組及對照組,以mtt法分別檢測不同藥物濃度作用下各組細胞的增殖及抑制情況;再以流式細胞技術檢測不同濃度的xav939對skov3細胞的凋亡及細胞周期的影響;然后以westernblot法檢測skov3細胞中tankyrase、cyclind1及β-catenin的表達情況,并以不同濃度的xav939作用于skov3細胞48小時后再次檢測三種蛋白表達量的變化。實驗所得計量數(shù)據(jù)以spss20.0軟件進行分析,檢驗水準定為α=0.05。結果1、XAV939及DDP對SKOV3細胞的生長抑制作用:XAV939與DDP在體外對卵巢癌SKOV3細胞均有一定的抑制作用,且抑制作用的強弱與藥物作用濃度及作用時間呈現(xiàn)正相關,即存在濃度和時間的依賴現(xiàn)象(P0.05)。2、XAV939對SKOV3細胞的順鉑增敏作用:以0.8μM的XAV939分別聯(lián)合DDP各濃度作用于SKOV3細胞48小時后,小濃度時細胞抑制率高于DDP單藥組,SKOV3細胞對順鉑的敏感性增加(IC50(DDP)=69.059μg/ml IC50(XAV939+DDP)=52.254μg/ml)。3、XAV939對SKOV3細胞細胞周期及凋亡的影響:細胞周期及凋亡檢測顯示,與對照組相比XAV939作用后細胞的凋亡率隨著藥物濃度的增加呈增高趨勢,差異統(tǒng)計學意義顯著(F=512.78,P0.05)。增加XA939作用濃度后,細胞呈現(xiàn)G0/G1期阻滯(P0.05),S期細胞所占百分比下降,且呈現(xiàn)明顯的濃度依賴(P0.05)。4、XAV939對SKOV3細胞中Tankyrase、CyclinD1、β-catenin蛋白表達量的影響:蛋白免疫印跡結果顯示,Tankyrase、cyclinD1、β-catenin在卵巢癌SKOV3細胞中均呈現(xiàn)高表達;當XAV939作用后三者的表達量均明顯下降。結論1.XAV939及DDP單藥于體外對人卵巢癌SKOV3細胞株具有一定細胞毒作用,且具有時間及劑量依賴的特點。2.XAV939與DDP合用時可增加SKOV3細胞對DDP的敏感性,加速細胞的凋亡。3.XAV939可能通過降低Tankyrase和β-catenin蛋白的表達,從而抑制卵巢癌SKOV3細胞的增殖。
【關鍵詞】：卵巢上皮性癌 Tankyrase 化療耐藥 XAV939
【學位授予單位】：鄭州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R737.31
【目錄】：

• 摘要4-7
• Abstract7-12
• 中英縮略詞對照表12-14
• 前言14-17
• 1 材料與方法17-24
• 2 結果24-29
• 3 討論29-34
• 4 結論34-35
• 5 附圖35-36
• 6 參考文獻36-39
• 綜述 端錨聚合酶及Wnt/β-catenin通路與卵巢上皮性癌發(fā)生及化療耐藥的關系39-60
• 參考文獻54-60
• 個人簡歷60-61
• 攻讀碩士學位期間發(fā)表的學術論文61-62
• 致謝62

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本文編號：292360