本文關鍵詞：小鼠超數(shù)排卵后胚胎質量評價，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:以小鼠為實驗對象,探討小鼠通過不同激素劑量超排處理及不同間隔時間重復超排處理后其胚胎質量是否受到影響,以及septin2蛋白是否影響胚胎質量的初步研究。方法:實驗一:1.選取8周齡小鼠120只,隨機分成4組,依次為自然發(fā)情組(0IU)、5IU組、7.5IU組、10IU組,每組30只,自然發(fā)情組不注射激素,其它各組分別注射PMSG(5IU/只)+h CG(5IU/只)、PMSG(7.5IU/只)+h CG(7.5IU/只)、PMSG(10IU/只)+h CG(10IU/只)。2.小鼠超排后與雄性小鼠合籠,次日晨將見栓的雌鼠處死取胚,撿取1-細胞期胚胎并計數(shù),同時通過鏡檢計數(shù)胚胎畸形率。將發(fā)育正常的1-細胞期胚胎置37℃,5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)到囊胚,計數(shù)2-細胞胚胎數(shù)、4-細胞胚胎數(shù)、8-細胞胚胎數(shù)、桑葚胚數(shù)及囊胚數(shù),并計算各時期胚胎百分率。3.收集培養(yǎng)液,采用ELISA試劑盒檢測培養(yǎng)液中IGF-II含量。4.將囊胚用H33258染色后,共聚焦顯微鏡觀察實驗二:選取8周齡小鼠40只,隨機分成4組,依次為0組(超排后與雄性小鼠合籠,第二天晨將見栓小鼠取胚),1組(于第一次超排處理后間隔5天,即1個性周期后,再次誘導超排),2組(于第一次超排后間隔2個性周期,即10天后再次誘導超排),3組(于第一次超排后間隔3個性周期,即15天后再次誘導超排),每組10只。每次超排注射PMSG(7.5IU/只)+h CG(7.5IU/只)。其余步驟同實驗一。實驗三:1.選取8周齡雌性小鼠30只,采用注射PMSG(7.5IU/只)+h CG(7.5IU/只)方法誘導超排,與10周齡雄性小鼠合籠見栓后,解剖后取1-細胞期胚胎,挑選出形態(tài)正常的胚胎400個,分成實驗1組和對照1組兩組,每組200個。實驗1組培養(yǎng)在FCF培養(yǎng)液中,對照1組培養(yǎng)在DMSO培養(yǎng)液中,37℃,5%CO2培養(yǎng)至囊胚,統(tǒng)計囊胚個數(shù),并將囊胚進行α-tubulin免疫熒光染色。2.除400個以外的胚胎,也平均分成實驗2組與對照2組,分別培養(yǎng)在上述兩種培養(yǎng)液中,至所需階段,用于septin2蛋白免疫熒光染色。結果:實驗一1.與自然發(fā)情組相比,5IU組、7.5IU組、10IU組1-細胞期胚胎顯著增多(P0.01),7.5IU組平均胚胎數(shù)最多,并顯著多于5IU組(P0.05);畸形率10IU組最高,顯著高于0IU組及5IU組(P0.05);2-細胞胚胎發(fā)育率都在95%以上,4-細胞胎胚胎發(fā)育率都下降到90%以下,各組間差異不顯著;8細胞胚胎發(fā)育率10IU組最低,顯著低于5IU組(P0.05);桑葚胚發(fā)育率,與5IU組相比,7.5IU組及10IU組顯著減少(P0.05);囊胚發(fā)育率依次為0IU5IU7.5IU10IU,10IU組顯著低于其它各組(P0.05)。2.ELISA實驗結果表明,各組培養(yǎng)液中IGF-II含量依次為0IU5IU7.5IU10IU,10IU組顯著低于其它各組(P0.05)。3.H33258染色后發(fā)現(xiàn),10IU組卵裂球個數(shù)稍有減少。實驗二1.重復超排間隔時間越短,胚胎畸形率越高,間隔一個性周期組畸形率顯著高于間隔三個性周期組和一次超排組,而可用胚胎數(shù)越少,隨著間隔時間的延長,畸形率變小,可用胚胎數(shù)增加,當間隔三個性周期時,基本恢復到一次超排水平。各組間2-細胞胚胎率、4-細胞胚胎率、8-細胞胚胎率以及桑葚胚率無顯著性差異,但是具有隨著間隔時間延長,各階段胚胎卵裂率增高的趨勢,到間隔三個性周期后,基本恢復到一次超排水平,而對囊胚率來說,間隔一個性周期顯著低于一次超排和間隔3個性周期組(P0.05)。2.ELISA實驗結果表明,各組培養(yǎng)液中IGF-II含量依次為0組3組2組1組,含量顯著低于0組和3組(P0.05)。3..H33258染色后發(fā)現(xiàn),1組和2組卵裂球個數(shù)有所減少。實驗三1.FCF處理后胚胎囊胚率顯著下降(P0.05);2.共聚焦顯微鏡可以清楚地觀察到septin2在對照2組各階段胚胎主要表達在2-細胞期及以后的各期胚胎卵裂球中,且集中在卵裂球的核上,熒光信號強;在實驗2組2-細胞期卵裂球的核上,及4-細胞期、8-細胞期胚胎中顆粒化的卵裂球中也有微弱表達,到桑葚胚以后幾乎無表達,且4-細胞、8-細胞胚胎有顆粒化現(xiàn)象。3.與對照組相比,實驗組囊胚微管排列不規(guī)則,紡錘體形態(tài)異常,染色體排列紊亂上。結論:實驗一1.PMSG/HCG可以增加小鼠可用胚胎個數(shù);2.PMSG/HCG對小鼠超排具有一定的閾值,劑量過高及過低都不能達到理想效果;3.高劑量PMSG/HCG可影響胚胎質量,降低胚胎發(fā)育率;實驗二1.重復超排間隔時間越短,對超排效果及胚胎質量越不利;2.重復超排間隔時間越短,發(fā)生卵巢囊腫的概率會有所增加;3.重復超排間隔時間達三個性周期以上時,可基本恢復到一次超排水平。實驗三1.Septin2蛋白在小鼠早期胚胎2-細胞期到囊胚各時期均有表達,定位于卵裂球的核上;2.FCF抑制劑Septin2蛋白表達可降低;3.敲低Septin2蛋白表達,可致胚胎發(fā)育異常,胞質分裂不均,卵裂球大小不一,且數(shù)量減少,染色體排列雜亂,以及導致胚胎“顆粒現(xiàn)象”產生;4.敲低Septin2蛋白表達,可致囊胚中微管分布紊亂,卵裂球數(shù)目減少,紡錘體形變及染色體排列異常。
【關鍵詞】：超數(shù)排卵 重復超排 胚胎質量 septin2
【學位授予單位】：河北大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R714.8
【目錄】：

• 摘要4-7
• Abstract7-14
• 第1章 綜述14-30
• 參考文獻24-30
• 第2章 實驗研究30-56
• 實驗一 激素劑量對小鼠胚胎質量的影響30-40
• 1 材料與方法30-31
• 2 實驗方案31-32
• 3 結果32-37
• 4 討論37-38
• 5 結論38-40
• 實驗二 重復超排間隔時間對小鼠胚胎質量的影響40-47
• 1 材料與方法40
• 2 實驗方案40-41
• 3 結果41-45
• 4 討論45-46
• 5 結論46-47
• 實驗三 敲低Septin2蛋白對胚胎質量影響的初步探究47-56
• 1 材料與方法47
• 2 實驗方案47-49
• 3 結果49-54
• 4 討論54
• 5 結論54-56
• 參考文獻56-58
• 致謝58-59
• 攻讀碩士期間取得的學術成果59

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