本文關(guān)鍵詞：小鼠超數(shù)排卵后胚胎質(zhì)量評(píng)價(jià)，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:以小鼠為實(shí)驗(yàn)對(duì)象,探討小鼠通過(guò)不同激素劑量超排處理及不同間隔時(shí)間重復(fù)超排處理后其胚胎質(zhì)量是否受到影響,以及septin2蛋白是否影響胚胎質(zhì)量的初步研究。方法:實(shí)驗(yàn)一:1.選取8周齡小鼠120只,隨機(jī)分成4組,依次為自然發(fā)情組(0IU)、5IU組、7.5IU組、10IU組,每組30只,自然發(fā)情組不注射激素,其它各組分別注射PMSG(5IU/只)+h CG(5IU/只)、PMSG(7.5IU/只)+h CG(7.5IU/只)、PMSG(10IU/只)+h CG(10IU/只)。2.小鼠超排后與雄性小鼠合籠,次日晨將見(jiàn)栓的雌鼠處死取胚,撿取1-細(xì)胞期胚胎并計(jì)數(shù),同時(shí)通過(guò)鏡檢計(jì)數(shù)胚胎畸形率。將發(fā)育正常的1-細(xì)胞期胚胎置37℃,5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)到囊胚,計(jì)數(shù)2-細(xì)胞胚胎數(shù)、4-細(xì)胞胚胎數(shù)、8-細(xì)胞胚胎數(shù)、桑葚胚數(shù)及囊胚數(shù),并計(jì)算各時(shí)期胚胎百分率。3.收集培養(yǎng)液,采用ELISA試劑盒檢測(cè)培養(yǎng)液中IGF-II含量。4.將囊胚用H33258染色后,共聚焦顯微鏡觀察實(shí)驗(yàn)二:選取8周齡小鼠40只,隨機(jī)分成4組,依次為0組(超排后與雄性小鼠合籠,第二天晨將見(jiàn)栓小鼠取胚),1組(于第一次超排處理后間隔5天,即1個(gè)性周期后,再次誘導(dǎo)超排),2組(于第一次超排后間隔2個(gè)性周期,即10天后再次誘導(dǎo)超排),3組(于第一次超排后間隔3個(gè)性周期,即15天后再次誘導(dǎo)超排),每組10只。每次超排注射PMSG(7.5IU/只)+h CG(7.5IU/只)。其余步驟同實(shí)驗(yàn)一。實(shí)驗(yàn)三:1.選取8周齡雌性小鼠30只,采用注射PMSG(7.5IU/只)+h CG(7.5IU/只)方法誘導(dǎo)超排,與10周齡雄性小鼠合籠見(jiàn)栓后,解剖后取1-細(xì)胞期胚胎,挑選出形態(tài)正常的胚胎400個(gè),分成實(shí)驗(yàn)1組和對(duì)照1組兩組,每組200個(gè)。實(shí)驗(yàn)1組培養(yǎng)在FCF培養(yǎng)液中,對(duì)照1組培養(yǎng)在DMSO培養(yǎng)液中,37℃,5%CO2培養(yǎng)至囊胚,統(tǒng)計(jì)囊胚個(gè)數(shù),并將囊胚進(jìn)行α-tubulin免疫熒光染色。2.除400個(gè)以外的胚胎,也平均分成實(shí)驗(yàn)2組與對(duì)照2組,分別培養(yǎng)在上述兩種培養(yǎng)液中,至所需階段,用于septin2蛋白免疫熒光染色。結(jié)果:實(shí)驗(yàn)一1.與自然發(fā)情組相比,5IU組、7.5IU組、10IU組1-細(xì)胞期胚胎顯著增多(P0.01),7.5IU組平均胚胎數(shù)最多,并顯著多于5IU組(P0.05);畸形率10IU組最高,顯著高于0IU組及5IU組(P0.05);2-細(xì)胞胚胎發(fā)育率都在95%以上,4-細(xì)胞胎胚胎發(fā)育率都下降到90%以下,各組間差異不顯著;8細(xì)胞胚胎發(fā)育率10IU組最低,顯著低于5IU組(P0.05);桑葚胚發(fā)育率,與5IU組相比,7.5IU組及10IU組顯著減少(P0.05);囊胚發(fā)育率依次為0IU5IU7.5IU10IU,10IU組顯著低于其它各組(P0.05)。2.ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,各組培養(yǎng)液中IGF-II含量依次為0IU5IU7.5IU10IU,10IU組顯著低于其它各組(P0.05)。3.H33258染色后發(fā)現(xiàn),10IU組卵裂球個(gè)數(shù)稍有減少。實(shí)驗(yàn)二1.重復(fù)超排間隔時(shí)間越短,胚胎畸形率越高,間隔一個(gè)性周期組畸形率顯著高于間隔三個(gè)性周期組和一次超排組,而可用胚胎數(shù)越少,隨著間隔時(shí)間的延長(zhǎng),畸形率變小,可用胚胎數(shù)增加,當(dāng)間隔三個(gè)性周期時(shí),基本恢復(fù)到一次超排水平。各組間2-細(xì)胞胚胎率、4-細(xì)胞胚胎率、8-細(xì)胞胚胎率以及桑葚胚率無(wú)顯著性差異,但是具有隨著間隔時(shí)間延長(zhǎng),各階段胚胎卵裂率增高的趨勢(shì),到間隔三個(gè)性周期后,基本恢復(fù)到一次超排水平,而對(duì)囊胚率來(lái)說(shuō),間隔一個(gè)性周期顯著低于一次超排和間隔3個(gè)性周期組(P0.05)。2.ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,各組培養(yǎng)液中IGF-II含量依次為0組3組2組1組,含量顯著低于0組和3組(P0.05)。3..H33258染色后發(fā)現(xiàn),1組和2組卵裂球個(gè)數(shù)有所減少。實(shí)驗(yàn)三1.FCF處理后胚胎囊胚率顯著下降(P0.05);2.共聚焦顯微鏡可以清楚地觀察到septin2在對(duì)照2組各階段胚胎主要表達(dá)在2-細(xì)胞期及以后的各期胚胎卵裂球中,且集中在卵裂球的核上,熒光信號(hào)強(qiáng);在實(shí)驗(yàn)2組2-細(xì)胞期卵裂球的核上,及4-細(xì)胞期、8-細(xì)胞期胚胎中顆�；穆蚜亚蛑幸灿形⑷醣磉_(dá),到桑葚胚以后幾乎無(wú)表達(dá),且4-細(xì)胞、8-細(xì)胞胚胎有顆�；F(xiàn)象。3.與對(duì)照組相比,實(shí)驗(yàn)組囊胚微管排列不規(guī)則,紡錘體形態(tài)異常,染色體排列紊亂上。結(jié)論:實(shí)驗(yàn)一1.PMSG/HCG可以增加小鼠可用胚胎個(gè)數(shù);2.PMSG/HCG對(duì)小鼠超排具有一定的閾值,劑量過(guò)高及過(guò)低都不能達(dá)到理想效果;3.高劑量PMSG/HCG可影響胚胎質(zhì)量,降低胚胎發(fā)育率;實(shí)驗(yàn)二1.重復(fù)超排間隔時(shí)間越短,對(duì)超排效果及胚胎質(zhì)量越不利;2.重復(fù)超排間隔時(shí)間越短,發(fā)生卵巢囊腫的概率會(huì)有所增加;3.重復(fù)超排間隔時(shí)間達(dá)三個(gè)性周期以上時(shí),可基本恢復(fù)到一次超排水平。實(shí)驗(yàn)三1.Septin2蛋白在小鼠早期胚胎2-細(xì)胞期到囊胚各時(shí)期均有表達(dá),定位于卵裂球的核上;2.FCF抑制劑Septin2蛋白表達(dá)可降低;3.敲低Septin2蛋白表達(dá),可致胚胎發(fā)育異常,胞質(zhì)分裂不均,卵裂球大小不一,且數(shù)量減少,染色體排列雜亂,以及導(dǎo)致胚胎“顆�，F(xiàn)象”產(chǎn)生;4.敲低Septin2蛋白表達(dá),可致囊胚中微管分布紊亂,卵裂球數(shù)目減少,紡錘體形變及染色體排列異常。
【關(guān)鍵詞】：超數(shù)排卵 重復(fù)超排 胚胎質(zhì)量 septin2
【學(xué)位授予單位】：河北大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R714.8
【目錄】：

• 摘要4-7
• Abstract7-14
• 第1章 綜述14-30
• 參考文獻(xiàn)24-30
• 第2章 實(shí)驗(yàn)研究30-56
• 實(shí)驗(yàn)一 激素劑量對(duì)小鼠胚胎質(zhì)量的影響30-40
• 1 材料與方法30-31
• 2 實(shí)驗(yàn)方案31-32
• 3 結(jié)果32-37
• 4 討論37-38
• 5 結(jié)論38-40
• 實(shí)驗(yàn)二 重復(fù)超排間隔時(shí)間對(duì)小鼠胚胎質(zhì)量的影響40-47
• 1 材料與方法40
• 2 實(shí)驗(yàn)方案40-41
• 3 結(jié)果41-45
• 4 討論45-46
• 5 結(jié)論46-47
• 實(shí)驗(yàn)三 敲低Septin2蛋白對(duì)胚胎質(zhì)量影響的初步探究47-56
• 1 材料與方法47
• 2 實(shí)驗(yàn)方案47-49
• 3 結(jié)果49-54
• 4 討論54
• 5 結(jié)論54-56
• 參考文獻(xiàn)56-58
• 致謝58-59
• 攻讀碩士期間取得的學(xué)術(shù)成果59

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本文編號(hào)：289837