【摘要】：目的:探討綿羊肌源性干細(xì)胞(MDSC)與陰道平滑肌細(xì)胞(VSMC)共培養(yǎng)分化為平滑肌的可行性。方法:利用Transwell細(xì)胞龕室建立MDSC/VSMC共培養(yǎng)體外模型,共培養(yǎng)2d、4d、6d,收集MDSC。Western blot法檢測(cè)干細(xì)胞標(biāo)記物Desmin及平滑肌細(xì)胞標(biāo)記物a-SMA的表達(dá)情況。結(jié)果:利用Transwell細(xì)胞龕室成功構(gòu)建MDSC/VSMC共培養(yǎng)體外模型。免疫熒光法及Western blot法檢測(cè)發(fā)現(xiàn),隨著共培養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng),共培養(yǎng)組MDSC干細(xì)胞標(biāo)記物Desmin表達(dá)逐漸下降,但培養(yǎng)6d仍有表達(dá),平滑肌細(xì)胞標(biāo)記物aSMA逐漸增多。結(jié)論:Transwell細(xì)胞龕室成功構(gòu)建綿羊MDSC/VSMC共培養(yǎng)體外模型,達(dá)到了真正意義上分開(kāi)兩種細(xì)胞的同時(shí),兼顧了細(xì)胞間相互影響的共培養(yǎng)環(huán)境,在體外證實(shí)了綿羊MDSC分化為平滑肌細(xì)胞的可行性。
【圖文】：

翁?閻鸞ソ詠?VSMC。見(jiàn)圖1。2．2Westernblot法檢測(cè)綿羊MDSC與VSMC共培養(yǎng)誘導(dǎo)分化后MDSC中細(xì)胞標(biāo)記物表達(dá)情況共培養(yǎng)6d時(shí)，干細(xì)胞標(biāo)記物Desmin在共培養(yǎng)組MDSC中仍有表達(dá)，但表達(dá)量隨著時(shí)間延長(zhǎng)而下降，與MD-SC單獨(dú)培養(yǎng)組比較，表達(dá)量顯著下降(P＜0．05)。隨著MDSC干細(xì)胞標(biāo)記物表達(dá)下降的同時(shí)，平滑肌細(xì)胞抗體a-SMA表達(dá)量逐漸上升;但共培養(yǎng)6d時(shí)，a-SMA表達(dá)量仍低于VSMC單獨(dú)培養(yǎng)組(P＜0．05)。表明通過(guò)與VSMC共培養(yǎng)，MDSC一部分可逐漸被誘導(dǎo)分化為平滑肌細(xì)胞，同時(shí)仍有少部分MDSC保持著干細(xì)胞標(biāo)記物的表達(dá)。見(jiàn)圖2。圖1Transwell細(xì)胞龕室體外模擬MDSC與VSMC共培養(yǎng)(×10)A、B:分別為對(duì)照組MDSC1、4d;C、D:共培養(yǎng)組MDSC1、4d;E:VSMC單獨(dú)培養(yǎng)4d圖2Westernblot法檢測(cè)Desmin和a-SMA表達(dá)對(duì)照組MDSC:MDSC單獨(dú)培養(yǎng)組培養(yǎng)6d;對(duì)照組VSMC:VSMC單獨(dú)培養(yǎng)組培養(yǎng)6d3討論共培養(yǎng)是目前細(xì)胞生物學(xué)領(lǐng)域常用的一項(xiàng)技術(shù)［4－5］。既往研究［6，3］利用HoechsG3342染料對(duì)MDSC細(xì)胞核進(jìn)行標(biāo)記，再與陰莖海綿體平滑肌細(xì)胞共培養(yǎng)2d，檢測(cè)MDSC表達(dá)平滑肌細(xì)胞標(biāo)記物a-SMA表達(dá)情況。但此法存在一些局限性:(1)Ho-echsG3342染料對(duì)MDSC細(xì)胞核染色時(shí)間有限，僅能了解共培養(yǎng)2d的情況，無(wú)法進(jìn)行更長(zhǎng)時(shí)間的觀察;(2)MDSC與平滑肌細(xì)胞發(fā)生細(xì)胞融合(即MDSC的細(xì)胞核進(jìn)入平滑肌細(xì)胞中)，也可出現(xiàn)核染色陽(yáng)性。此時(shí)，MDSC并未分化為平滑肌細(xì)胞，但由于細(xì)胞核在平滑肌細(xì)胞中，因此該細(xì)胞也表現(xiàn)出核染色陽(yáng)性且可檢測(cè)到a-SMA表達(dá)，導(dǎo)致假陽(yáng)性;(3)該法難以分離共培養(yǎng)后的MDSC，故無(wú)法確切了解MDSC誘導(dǎo)分化為平滑肌細(xì)胞的情況。因此，a-SMA是否均為MDSC誘導(dǎo)分化后新表達(dá)出的標(biāo)記物仍待商榷。本研究通過(guò)Transwell細(xì)胞龕室首次建立了綿羊MDSC與VSMC共培養(yǎng)體外模型，模

?上赴?曇俏顳esmin在共培養(yǎng)組MDSC中仍有表達(dá)，但表達(dá)量隨著時(shí)間延長(zhǎng)而下降，與MD-SC單獨(dú)培養(yǎng)組比較，表達(dá)量顯著下降(P＜0．05)。隨著MDSC干細(xì)胞標(biāo)記物表達(dá)下降的同時(shí)，平滑肌細(xì)胞抗體a-SMA表達(dá)量逐漸上升;但共培養(yǎng)6d時(shí)，a-SMA表達(dá)量仍低于VSMC單獨(dú)培養(yǎng)組(P＜0．05)。表明通過(guò)與VSMC共培養(yǎng)，MDSC一部分可逐漸被誘導(dǎo)分化為平滑肌細(xì)胞，同時(shí)仍有少部分MDSC保持著干細(xì)胞標(biāo)記物的表達(dá)。見(jiàn)圖2。圖1Transwell細(xì)胞龕室體外模擬MDSC與VSMC共培養(yǎng)(×10)A、B:分別為對(duì)照組MDSC1、4d;C、D:共培養(yǎng)組MDSC1、4d;E:VSMC單獨(dú)培養(yǎng)4d圖2Westernblot法檢測(cè)Desmin和a-SMA表達(dá)對(duì)照組MDSC:MDSC單獨(dú)培養(yǎng)組培養(yǎng)6d;對(duì)照組VSMC:VSMC單獨(dú)培養(yǎng)組培養(yǎng)6d3討論共培養(yǎng)是目前細(xì)胞生物學(xué)領(lǐng)域常用的一項(xiàng)技術(shù)［4－5］。既往研究［6，3］利用HoechsG3342染料對(duì)MDSC細(xì)胞核進(jìn)行標(biāo)記，再與陰莖海綿體平滑肌細(xì)胞共培養(yǎng)2d，檢測(cè)MDSC表達(dá)平滑肌細(xì)胞標(biāo)記物a-SMA表達(dá)情況。但此法存在一些局限性:(1)Ho-echsG3342染料對(duì)MDSC細(xì)胞核染色時(shí)間有限，僅能了解共培養(yǎng)2d的情況，無(wú)法進(jìn)行更長(zhǎng)時(shí)間的觀察;(2)MDSC與平滑肌細(xì)胞發(fā)生細(xì)胞融合(即MDSC的細(xì)胞核進(jìn)入平滑肌細(xì)胞中)，也可出現(xiàn)核染色陽(yáng)性。此時(shí)，MDSC并未分化為平滑肌細(xì)胞，但由于細(xì)胞核在平滑肌細(xì)胞中，因此該細(xì)胞也表現(xiàn)出核染色陽(yáng)性且可檢測(cè)到a-SMA表達(dá)，導(dǎo)致假陽(yáng)性;(3)該法難以分離共培養(yǎng)后的MDSC，故無(wú)法確切了解MDSC誘導(dǎo)分化為平滑肌細(xì)胞的情況。因此，a-SMA是否均為MDSC誘導(dǎo)分化后新表達(dá)出的標(biāo)記物仍待商榷。本研究通過(guò)Transwell細(xì)胞龕室首次建立了綿羊MDSC與VSMC共培養(yǎng)體外模型，模擬MDSC在VSMC環(huán)境下的擴(kuò)增和分化情況。Transwell細(xì)胞龕室通過(guò)多孔膜，下層培養(yǎng)液中的成分可影響到上室內(nèi)的細(xì)胞，從而可研?
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8 戴俊;動(dòng)態(tài)壓應(yīng)力與共培養(yǎng)微環(huán)境對(duì)脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞增殖及向髓核樣細(xì)胞分化的影響[D];華中科技大學(xué);2012年

9 周平;鼠胚與人早孕蛻膜單層細(xì)胞的共培養(yǎng)[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2003年

10 李林;利用雙菌共培養(yǎng)模式發(fā)酵廉價(jià)生物質(zhì)生產(chǎn)丁醇的研究[D];華南理工大學(xué);2013年

本文編號(hào)：2891784