研究背景子宮內(nèi)膜樣癌(Endometrial endometrioid carcinoma,EEC)是最常見的惡性婦科腫瘤之一。EEC可以分成不同的子類型并表現(xiàn)出獨(dú)特的病理和不同的生物學(xué)行為。而UPF1是無義介導(dǎo)的mRNA降解途徑(NMD)中的關(guān)鍵蛋白因子,在腫瘤中的作用尚待研究。因此本課題希望對(duì)UPF1在子宮內(nèi)膜樣癌發(fā)病機(jī)制和遷移侵襲的研究,能進(jìn)一步了解子宮內(nèi)膜樣癌的發(fā)病機(jī)制,從而對(duì)臨床治療及診斷提供幫助。目的:1.檢測(cè)EEC組織及癌旁組織和不同來源的EEC細(xì)胞系中UPF1的RNA表達(dá)水平;2.驗(yàn)證UPF1對(duì)EEC細(xì)胞功能的影響;3.裸鼠皮下成瘤驗(yàn)證UPF1對(duì)成瘤能力的影響;4.探討UPF1影響mTOR信號(hào)通路。方法:1.首先采用qRT-PCR檢測(cè)人新鮮EEC組織及癌旁組織和EEC細(xì)胞株中UPF1的RNA表達(dá)水平;2.免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)EEC組織與癌旁組織中UPF1的表達(dá)水平;3.構(gòu)建UPF1過表達(dá)質(zhì)粒,瞬時(shí)轉(zhuǎn)染促進(jìn)EEC細(xì)胞株(RL952、ishikawa)UPF1的表達(dá);設(shè)計(jì)siUPF1抑制EEC細(xì)胞株(RL952、ishikawa)中UPF1的表達(dá);4.生物學(xué)功能實(shí)驗(yàn)檢測(cè):通過瞬時(shí)轉(zhuǎn)染UPF1過表達(dá)質(zhì)粒及siUPF1抑制UPF1表達(dá)后,檢測(cè)EEC細(xì)胞生物學(xué)行為的改變;(1)采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)過表達(dá)UPF1及抑制UPF1表達(dá)siUPF1后細(xì)胞周期及凋亡的情況;(2)采用CCK-8檢測(cè)EEC細(xì)胞生長(zhǎng)曲線的改變;(3)采用細(xì)胞劃痕及Transwell遷移與侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)過表達(dá)UPF1及抑制UPF1表達(dá)對(duì)EEC細(xì)胞遷移與侵襲能力的影響;5.Western blot檢測(cè)改變EEC細(xì)胞株中UPF1表達(dá)后對(duì)mTOR及下游蛋白(p70s6k/p-p70s6k)表達(dá)的影響;6.構(gòu)建細(xì)胞穩(wěn)轉(zhuǎn)株進(jìn)行裸鼠皮下成瘤實(shí)驗(yàn);7.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析結(jié)果:1.qRT-PCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn)UPF1在EEC組織中的RNA表達(dá)水平較癌旁組織中高表達(dá)。2.細(xì)胞功能試驗(yàn)研究表明UPF1可以促進(jìn)EEC細(xì)胞增殖、侵襲遷移的能力,及抑制UPF1表達(dá)可以抑制EEC細(xì)胞的增殖、侵襲及遷移能力。3.抑制UPF1表達(dá)能夠抑制裸鼠皮下成瘤生長(zhǎng)速度;4.Western blot結(jié)果顯示UPF1可以通過上調(diào)mTOR,激活mTOR/p70s6k/p-p70s6k信號(hào)通路,及通過激活mTOR促進(jìn)細(xì)胞增殖能力。結(jié)論:1.UPF1在EEC組織較癌旁組織中高表達(dá);2.UPF1在EEC中作為促癌基因可以促進(jìn)EEC細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲能力,抑制細(xì)胞凋亡率;3.在裸鼠實(shí)驗(yàn)中,抑制UPF1的表達(dá)可以抑制腫瘤的生長(zhǎng);4.UPF1能使mTOR表達(dá)上調(diào)并激活mTOR信號(hào)通路促進(jìn)細(xì)胞增殖能力。
【學(xué)位單位】：廣州醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R737.33
【部分圖文】：

圖 1.1UPF1 在人子宮內(nèi)膜樣腺癌組織（T）與癌旁正常組織（N）中的表達(dá)水平；圖 A、B、C.42 對(duì)組織中癌（T）與癌旁（N）UPF1 的表達(dá)水平，*p＜0.05,**p 和***p＜0.01；圖 D（20倍鏡）.IHC 檢測(cè) UPF1 在 EEC 中的表達(dá)，癌（T）與癌旁（N）對(duì)比，UPF1 在癌中的表達(dá)明顯高于癌旁正常腺體。1.2UPF1 在子宮內(nèi)膜樣腺癌細(xì)胞株中的表達(dá)通過 qRT-PCR 及 western blot 檢測(cè)在不同 EEC 細(xì)胞株中 UPF1 的表達(dá)水平，結(jié)果顯示 UPF1 在 ishikawa 中的表達(dá)最高，在 RL952、HEC-1B 細(xì)胞中的表達(dá)較低；結(jié)果如圖 1.2 所示：

圖 1.1UPF1 在人子宮內(nèi)膜樣腺癌組織（T）與癌旁正常組織（N）中的表達(dá)水平；圖 A、C.42 對(duì)組織中癌（T）與癌旁（N）UPF1 的表達(dá)水平，*p＜0.05,**p 和***p＜0.01；圖 D（倍鏡）.IHC 檢測(cè) UPF1 在 EEC 中的表達(dá)，癌（T）與癌旁（N）對(duì)比，UPF1 在癌中的表明顯高于癌旁正常腺體。1.2UPF1 在子宮內(nèi)膜樣腺癌細(xì)胞株中的表達(dá)通過 qRT-PCR 及 western blot 檢測(cè)在不同 EEC 細(xì)胞株中 UPF1 的表達(dá)水平結(jié)果顯示 UPF1 在 ishikawa 中的表達(dá)最高，在 RL952、HEC-1B 細(xì)胞中的表達(dá)低；結(jié)果如圖 1.2 所示：

廣州醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文 2.UPF1 過表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞后能有效提高 UPF1 的表達(dá)量，siUPF1 能有效抑制UPF1 的表達(dá)通過 qRT-PCR 及 western blot 已經(jīng)驗(yàn)證 UPF1 在 EEC 細(xì)胞株 HEC-1B、JEC、ishikawa、RL952 中的表達(dá)水平。構(gòu)建好 UPF1 過表達(dá)質(zhì)粒，瞬時(shí)轉(zhuǎn)染 ishikawa、RL952 細(xì)胞株檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率，與對(duì)照組 pcDNA3.1 相比，過表達(dá)質(zhì)粒可有效提高UPF1 的表達(dá)量，如圖 2A；三組 siUPF1 抑制 UPF1 的表達(dá)，分別轉(zhuǎn)染 48h 后ishikawa、RL952 細(xì)胞，檢測(cè) siUPF1-1、siUPF1-2 及 siUPF1-3 組的 UPF1 表達(dá)量，與 NC 組相比，三種 siRNA 表達(dá)有差異，選出抑制效果最佳的 siUPF1-1 進(jìn)行后續(xù)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)如圖 2B。A
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本文編號(hào)：2873515