絨毛膜癌(choriocarcinoma,CC)簡(jiǎn)稱絨癌,是一種惡性度高且侵襲性強(qiáng)的滋養(yǎng)細(xì)胞腫瘤,大多數(shù)繼發(fā)于正常妊娠或異常妊娠。我國(guó)和東南亞國(guó)家發(fā)病率相對(duì)較高,主要發(fā)生在育齡期的女性,也可見于男性。絨癌的發(fā)生機(jī)制目前尚不明確,易經(jīng)血道轉(zhuǎn)移而病情惡化。但對(duì)化療藥物較為敏感,因此在治療上以化療為主,以手術(shù)和放療等綜合治療為輔助手段。雖然化療是絨癌治療的首選,但是使用劑量必須達(dá)到患者的最大耐受量且需要連續(xù)治療多個(gè)療程才能達(dá)到理想效果,由于同時(shí)接受的毒副作用也相應(yīng)增加,部分患者出現(xiàn)不耐受毒副作用而被迫終止治療,也有患者在治療中出現(xiàn)了耐藥,最終影響了治愈率。因此,研究絨癌的發(fā)生機(jī)制以及尋找高效低毒的化療藥物成為治療絨癌亟待解決的問(wèn)題。二氫楊梅素(dihydromyricetin,DMY),又名蛇葡萄素,是一種二氫黃酮醇化合物,從葡萄科蛇葡萄屬植物藤茶中分離得到,其中又以藤茶的幼嫩莖葉中含量最高。藤茶是我國(guó)一種豐富和可利用的植物資源。研究發(fā)現(xiàn)二氫楊梅素具有抗氧化、抗炎、抑菌、降血糖、降血脂、保肝護(hù)肝、增強(qiáng)人體的免疫力等多種生理活性。近年來(lái)隨著對(duì)二氫楊梅素研究的深入,又發(fā)現(xiàn)其在抗腫瘤,保護(hù)心血管系統(tǒng),保護(hù)皮膚抗老化以及改善代謝疾病等方面的生理活性,特別是其在抗腫瘤方面的作用日益受到人們的重視。轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β(transforming growth factorβ,TGFβ)是一種具有多功能的細(xì)胞因子,在腫瘤中起作用,可影響腫瘤細(xì)胞的增殖、分化、轉(zhuǎn)移、介導(dǎo)細(xì)胞凋亡及腫瘤的發(fā)生。TGFβ-Smads信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路由該通路的配體、受體、Smads蛋白以及調(diào)節(jié)的靶基因組成。通路中任何一部分功能的異常都可能導(dǎo)致轉(zhuǎn)導(dǎo)信號(hào)的紊亂,進(jìn)而影響腫瘤的發(fā)生與發(fā)展。課題組前期體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn):TGFβ-Smads信號(hào)通路與絨癌細(xì)胞的增殖有關(guān);二氫楊梅素具有抑制絨癌細(xì)胞生長(zhǎng)的作用;二氫楊梅素可能通過(guò)TGFβ-Smads信號(hào)通路抑制絨癌細(xì)胞的增殖。為進(jìn)一步研究二氫楊梅素的抗腫瘤效果及其作用機(jī)制,本文從體內(nèi)實(shí)驗(yàn)水平開展了以下研究:第一部分人絨毛膜癌JAR細(xì)胞裸鼠移植瘤模型的建立目的:建立人絨毛膜癌JAR細(xì)胞裸鼠移植瘤模型,研究其生物學(xué)特性。方法:1.培養(yǎng)絨癌JAR細(xì)胞,并制作細(xì)胞懸液。2.12只Balb/c雌性裸鼠隨機(jī)分為對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組,實(shí)驗(yàn)組將含1×10~7個(gè)絨癌JAR細(xì)胞的懸液注射于裸鼠股背處皮下,對(duì)照組于相同部位注射等體積生理鹽水。記錄成瘤率,測(cè)量腫瘤直徑并觀察裸鼠的生存狀態(tài)。3.HE染色方法分別觀察JAR細(xì)胞、移植瘤及主要易轉(zhuǎn)移臟器的組織病理學(xué)變化。4.免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)移植瘤組織中β-HCG蛋白的表達(dá)。5.ELISA方法檢測(cè)β-HCG血清水平。結(jié)果:1.實(shí)驗(yàn)組8只裸鼠全部成瘤,移植瘤的成瘤率為100%。裸鼠帶瘤生存時(shí)間為(24.75±3.41)天。2.HE染色顯示移植瘤組織中的絨癌細(xì)胞與體外培養(yǎng)JAR細(xì)胞組織結(jié)構(gòu)具有相似性。全身主要易轉(zhuǎn)移臟器未發(fā)現(xiàn)到轉(zhuǎn)移情況。3.免疫組織化學(xué)檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn),實(shí)驗(yàn)組移植瘤組織中β-HCG主要在絨癌細(xì)胞的胞質(zhì)中表達(dá)。4.ELISA方法顯示實(shí)驗(yàn)組成瘤裸鼠β-HCG血清水平(7.11±2.47)ng/ml明顯高于對(duì)照組裸鼠(4.57±1.31)ng/ml(P0.05)。結(jié)論:通過(guò)在裸鼠皮下注射絨癌細(xì)胞的懸液方式建立絨癌JAR細(xì)胞裸鼠移植瘤模型,該方法具有易操作、成瘤率高及周期短的特點(diǎn)。第二部分二氫楊梅素通過(guò)TGFβ-Smads信號(hào)通路抑制絨毛膜癌生長(zhǎng)的體內(nèi)研究目的:探討二氫楊梅素(DMY)以及聯(lián)合氨甲喋呤(MTX)對(duì)裸鼠人絨毛膜癌移植瘤生長(zhǎng)的影響,觀察二氫楊梅素的毒副反應(yīng),并通過(guò)檢測(cè)二氫楊梅素對(duì)絨癌移植瘤組織中β-HCG、TGFβRⅡ、Smad2、P-smad2、C-myc的表達(dá)水平的影響初步探討其作用機(jī)制。方法:1.培養(yǎng)人絨毛膜癌JAR細(xì)胞,并制作細(xì)胞懸液。2.建立人絨癌裸鼠皮下移植瘤模型成功后,將36只裸鼠隨機(jī)分為6組:對(duì)照組、二氫楊梅素低濃度組(50mg/kg)、二氫楊梅素中濃度組(100mg/kg)、二氫楊梅素高濃度組(150mg/kg)、氨甲喋呤組(0.5mg/kg)、二氫楊梅素(100mg/kg)聯(lián)合氨甲喋呤組(0.5mg/kg)。二氫楊梅素和氨甲喋呤分別采取灌胃和腹腔注射方式給藥。觀察裸鼠的狀態(tài)及移植瘤的一般特性。3.治療14天后處死,測(cè)量裸鼠體重、脾臟重量、腫瘤重量及腫瘤長(zhǎng)短徑,計(jì)算脾臟指數(shù)、腫瘤體積和質(zhì)量抑瘤率。4.血清生化檢測(cè)谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、乳酸脫氫酶(LDH)及肌酸激酶(CK)。5.ELISA法檢測(cè)血清β-HCG水平。6.HE染色觀察各組移植瘤組織的病理變化7免疫組織化學(xué)法檢測(cè)各組移植瘤組織中β-HCG、TGFβRⅡ、Smad2、P-smad2、C-myc的表達(dá)水平。8.Western blot法檢測(cè)各組移植瘤組織中TGFβRⅡ、Smad2、P-smad2、C-myc的蛋白表達(dá)水平。結(jié)果:1.二氫楊梅素能明顯抑制絨癌裸鼠皮下移植瘤的生長(zhǎng),且呈劑量依賴性。二氫楊梅素低濃度組、中濃度組和高濃度組的裸鼠移植瘤質(zhì)量抑瘤率分別為18.28%、23.62%和24.31%。氨甲喋呤組能顯著抑制移植瘤生長(zhǎng),質(zhì)量抑瘤率為30.53%,二氫楊梅素聯(lián)合氨甲喋呤組抑瘤率為40.71%(P0.05)。另外病理組織學(xué)檢查結(jié)果也顯示,氨甲喋呤組及聯(lián)合用藥組的移植瘤組織中的細(xì)胞壞死情況較其他組嚴(yán)重,腫瘤細(xì)胞數(shù)量明顯少于其他組。2.二氫楊梅素能顯著降低谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、乳酸脫氫酶(LDH)及肌酸激酶(CK)水平(P0.05),對(duì)肝細(xì)胞及心肌細(xì)胞有一定的保護(hù)作用,并能減輕氨甲喋呤毒副作用引起的肝細(xì)胞及心肌細(xì)胞的損傷。3.免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示,二氫楊梅素組移植瘤中β-HCG、TGFβRⅡ、Smad2、P-smad2、C-myc表達(dá)水平均低于對(duì)照組(P0.05)。4.Western blot結(jié)果顯示,二氫楊梅素聯(lián)合氨甲喋呤能夠降低TGFβRⅡ、Smad2、P-smad2、C-myc蛋白的表達(dá)水平(P0.05)。結(jié)論:1.二氫楊梅素能顯著抑制絨癌移植瘤的生長(zhǎng),聯(lián)合氨甲喋呤具有協(xié)同增效抗腫瘤的作用。2.二氫楊梅素能夠減輕肝細(xì)胞及心肌細(xì)胞的損傷,減輕氨甲喋呤引起的毒副作用。3.二氫楊梅素能夠抑制絨癌移植瘤的生長(zhǎng)機(jī)制可能與調(diào)控TGFβ-Smads信號(hào)通路轉(zhuǎn)導(dǎo),下調(diào)TGFβRⅡ、Smad2、P-smad2、C-myc的表達(dá)有關(guān)。
【學(xué)位單位】：承德醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R737.33
【文章目錄】：
中文摘要
英文摘要
英文縮寫
引言
第一部分 人絨毛膜癌JAR細(xì)胞裸鼠移植瘤模型的建立
    前言
    材料與方法
    結(jié)果
    附圖
    討論
    小結(jié)
    參考文獻(xiàn)
第二部分 二氫楊梅素通過(guò)TGFβ-Smads信號(hào)通路抑制絨毛膜癌生長(zhǎng)的體內(nèi)研究
    前言
    材料與方法
    結(jié)果
    附圖
    附表
    討論
    小結(jié)
    參考文獻(xiàn)
結(jié)論
綜述
    參考文獻(xiàn)
致謝
個(gè)人簡(jiǎn)歷

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本文編號(hào)：2857320