目的:觀察低氧處理后JEG-3細胞中HLA-G的m RNA和蛋白水平表達情況及JEG-3細胞的生物學行為;并在體外下調(diào)JEG-3細胞中HLA-G表達后,觀察低氧對JEG-3細胞生物學行為的影響;探討HLA-G參與低氧條件下妊娠期高血壓疾病發(fā)生的分子機制。方法:(1)用q PCR及Western Blot法檢測低氧處理不同時間后(H12h、H24h、H48h、H72h)JEG-3細胞中HLA-G的m RNA及蛋白水平的表達。(2)利用si RNA技術(shù)體外下調(diào)JEG-3細胞中HLA-G表達,檢測低氧處理后JEG-3細胞中HLA-G的m RNA及蛋白水平表達。(3)MTT法及Transwell法檢測各組細胞增殖活性和侵襲能力。結(jié)果:(1)低氧處理48h和72h后,JEG-3細胞中HLA-G的mRNA及蛋白表達水平較常氧對照組下降,且低氧72h后下降更為明顯,差異均有統(tǒng)計學意義(P0.05);與常氧對照組相比,JEG-3細胞經(jīng)低氧處理后生長緩慢;MTT結(jié)果顯示,低氧12和24h后,細胞增殖活性無明顯改變,而低氧48h及72h后細胞增殖活性降低,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);Transwell實驗結(jié)果顯示,與常氧對照組相比,低氧12、24和48h后,細胞侵襲能力無明顯改變,而72h后細胞侵襲能力減弱,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。(2)在常氧和低氧下,JEG-3細胞中下調(diào)HLA-G的表達后,與陰性對照組相比,轉(zhuǎn)染組細胞中HLA-G的m RNA及蛋白表達水平均明顯降低,與常氧轉(zhuǎn)染組相比,低氧轉(zhuǎn)染組中HLA-G的m RNA及蛋白表達水平也降低,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);且與陰性對照組相比,轉(zhuǎn)染組細胞增殖及侵襲能力均下降,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);與常氧轉(zhuǎn)染組相比,低氧轉(zhuǎn)染組細胞中細胞增殖及侵襲能力同樣下降,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。結(jié)論:(1)JEG-3細胞經(jīng)低氧處理后增殖活性及侵襲能力下降可能與細胞中HLA-G表達下降有關(guān)。(2)低氧環(huán)境下HLA-G表達下降可能通過影響滋養(yǎng)細胞增殖活性及侵襲能力參與妊娠期高血壓疾病發(fā)生。
【學位單位】：青海大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：R714.2
【部分圖文】：

12圖 3.1 HLA-G 的溶解曲線圖h、H24h、H48h、H72h 組 JEG-3 細胞中 HLA-GmRNA果顯示H12h組與H24h組細胞中HLA-G mRNA表達），低氧處理48h及72h后細胞中HLA-G 的mRNA.05），H72h組較C組HLA-G的 mRNA水平顯著下

圖3.2 低氧處理不同時間后JEG-3細胞中HLA-G的蛋白表達注：A.Western blot檢測常氧及低氧條件下JEG-3細胞HLA-G蛋白表達的原始條帶；B.蛋白條帶的分析結(jié)果；*表示與C組比較差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），#表示與C組比較P＜0.01。3.2.2 細胞經(jīng) siRNA 轉(zhuǎn)染后 HLA-G 蛋白相對表達量Si1、Si2、Si3片段轉(zhuǎn)染JEG-3細胞后HLA-G蛋白表達較Blank control組均下降（P<0.05）（如圖3.3），表達抑制率分別為（39.037±0.2625）％、（61.814±2.214）％、（60.847±1.798）％。Si2片段抑制HLA-G在蛋白水平表達效果最好，與qPCR結(jié)果一致，后續(xù)實驗用Si2片段進行轉(zhuǎn)染。

15圖3.2 低氧處理不同時間后JEG-3細胞中HLA-G的蛋白表達注：A.Western blot檢測常氧及低氧條件下JEG-3細胞HLA-G蛋白表達的原始條帶；B.蛋白條帶的分析結(jié)果；*表示與C組比較差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），#表示與C組比較P＜0.01。3.2.2 細胞經(jīng) siRNA 轉(zhuǎn)染后 HLA-G 蛋白相對表達量Si1、Si2、Si3片段轉(zhuǎn)染JEG-3細胞后HLA-G蛋白表達較Blank control組均下降（P<0.05）（如圖3.3），表達抑制率分別為（39.037±0.2625）％、（61.814±2.214）％、（60.847±1.798）％。Si2片段抑制HLA-G在蛋白水平表達效果最好，與qPCR結(jié)果一致，后續(xù)實驗用Si2片段進行轉(zhuǎn)染。圖3.3 Western blot檢測siRNA轉(zhuǎn)染JEG-3細胞后HLA-G蛋白表
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本文編號：2852845