目的:深入研究黑色素瘤相關(guān)抗原A3(melanoma-associated antigen-A3,MAGE-A3)基因在宮頸癌組織、宮頸癌細(xì)胞株Hela、SiHa、C-33 A及正常宮頸細(xì)胞株End1/E6E7中的表達(dá)情況,探討腫瘤特異性抗原MAGE-A3作為宮頸癌免疫治療特異性靶位的可能性,并為進(jìn)行機(jī)制性研究提供模型和奠定基礎(chǔ)。方法:選取河北大學(xué)附屬醫(yī)院婦科2015年1月至2017年1月間首診并行婦科手術(shù)患者的宮頸組織。收集存檔蠟塊標(biāo)本,其中正常宮頸組織20例,宮頸癌組織40例。所有病例均需經(jīng)病理診斷證實(shí),所有患者均排除患其他惡性腫瘤疾病或急慢性疾病。同時(shí)培養(yǎng)宮頸癌細(xì)胞株HeLa、SiHa、C-33 A及作為正常對(duì)照的細(xì)胞株End1/E6E7。應(yīng)用免疫組織化學(xué)SP法檢測(cè)MAGE-A3在40例宮頸癌組織和20例正常宮頸組織中的表達(dá)。采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(RT-qPCR)法檢測(cè)MAGE-A3 mRNA在三種不同宮頸癌細(xì)胞株及正常宮頸細(xì)胞株中的表達(dá)情況。應(yīng)用蛋白免疫印跡法(Western Blot)檢測(cè)MAGE-A3蛋白在三種不同宮頸癌細(xì)胞株(HeLa、SiHa和C-33 A)及正常宮頸細(xì)胞株(End1/E6E7)中的表達(dá)水平。結(jié)果:1.免疫組化法顯示:MAGE-A3主要表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)中,呈淺黃色至棕褐色。MAGE-A3在正常宮頸組織和宮頸癌組織中陽(yáng)性表達(dá)率分別為0%(0/20)和70%(28/40)。在20例正常宮頸組織中MAGE-A3均呈陰性表達(dá),在40例宮頸癌組織中28例呈陽(yáng)性表達(dá),12例呈陰性表達(dá)。宮頸癌組表達(dá)高于正常宮頸組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ~2=26.25,P0.05)。2.實(shí)時(shí)熒光定量PCR法顯示:以GAPDH mRNA為內(nèi)參照標(biāo)準(zhǔn),檢測(cè)基因MAGE-A3的mRNA水平結(jié)果顯示,End1/E6E7、HeLa、SiHa、C-33 A的相對(duì)定量值分別為0.124±0.003、0.973±0.004、0.902±0.030與0.943±0.017。MAGE-A3 mRNA的相對(duì)表達(dá)量在宮頸癌細(xì)胞組中明顯高于正常宮頸細(xì)胞組,經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析發(fā)現(xiàn),宮頸癌細(xì)胞組與正常宮頸細(xì)胞組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),而三種宮頸癌細(xì)胞之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。3.Western bloting蛋白印跡顯示:檢測(cè)宮頸細(xì)胞中MAGE-A3蛋白表達(dá)水平結(jié)果顯示,MAGE-A3蛋白在三株宮頸癌細(xì)胞和正常宮頸細(xì)胞中的表達(dá)與mRNA相似,End1/E6E7、HeLa、SiHa、C-33 A的相對(duì)灰度值分別為0.094±0.029、1.005±0.056、0.975±0.026與0.984±0.032,宮頸癌細(xì)胞組中的MAGE-A3蛋白的相對(duì)表達(dá)量均明顯高于正常宮頸細(xì)胞,經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析發(fā)現(xiàn),宮頸癌細(xì)胞組與正常宮頸細(xì)胞組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),而三種宮頸癌細(xì)胞之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論:MAGE-A3在宮頸癌組織和宮頸癌細(xì)胞中高表達(dá),提示在宮頸癌的發(fā)生發(fā)展中MAGE-A3可能具有重要作用。可見,MAGE-A3有可能成為宮頸癌免疫治療的理想靶點(diǎn),也能幫助宮頸疾病的早期診斷。未來(lái),利用其制備多基因聯(lián)合修飾的腫瘤基因工程疫苗,精確地診斷、判斷預(yù)后,并且在腫瘤疾病中做功能性靶向治療等值得期待。所以,研究MAGE-A3基因?qū)M(jìn)一步了解宮頸癌細(xì)胞的生物學(xué)行為及判斷預(yù)后有很重要的臨床應(yīng)用價(jià)值。
【學(xué)位單位】：河北大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R737.33
【部分圖文】：

織化學(xué) SP 法檢測(cè)宮頸組織中 MAGE-A3 的表性表達(dá)主要于細(xì)胞質(zhì)中，呈淺黃色至棕褐色（圖 1、圖組織中陽(yáng)性表達(dá)率分別為 0%（0/20）和 70%（28/40）E-A3 均呈陰性表達(dá)，在 40 例宮頸癌組織中 28 例呈陽(yáng)性宮頸癌組表達(dá)高于正常宮頸組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（2χ表 3-1 宮頸組織中 MAGE-A3 蛋白表達(dá)的陽(yáng)性比例類別 例數(shù) MAGE-A3 蛋白的表達(dá) 陽(yáng)性率陰性 陽(yáng)性常宮頸 20 20 0 0%頸癌 40 12 28 70%

圖 3-2 宮頸癌組織中 MAGE-A3 蛋白的表達(dá)，SP ×20R 檢測(cè)宮頸細(xì)胞中 MAGE-A3 mRNA 的表達(dá) mRNA 為內(nèi)參照標(biāo)準(zhǔn)，RT-PCR 檢測(cè)基因 MAGE-A3 的進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果顯示，End1/E6E7、HeLa、SiHe quantificaton，RQ）分別為 0.124±0.003、0.973±0.004 3）。MAGE-A3 mRNA 的相對(duì)表達(dá)量在宮頸癌細(xì)胞組統(tǒng)計(jì)學(xué)分析發(fā)現(xiàn)，宮頸癌細(xì)胞組與正常宮頸細(xì)胞組間差三種宮頸癌細(xì)胞之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

第三章 結(jié)果白印跡法檢測(cè)宮頸細(xì)胞中 MAGE-A3 法檢測(cè)宮頸細(xì)胞中 MAGE-A3 蛋白表達(dá)水平結(jié)頸癌細(xì)胞和正常宮頸細(xì)胞中的表達(dá)與 mRNA 相、C-33 A 的相對(duì)灰度值分別為 0.094±0.029、12（圖 5），宮頸癌細(xì)胞組中的 MAGE-A3 蛋白，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析發(fā)現(xiàn)，宮頸癌細(xì)胞組與正常宮，而三種宮頸癌細(xì)胞之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。HeLa SiHa C-33A End1/E6E7
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本文編號(hào)：2840372