目的:RACK1是一種游離于細(xì)胞中的支架蛋白,參與細(xì)胞中多種生化反應(yīng),影響細(xì)胞的生物學(xué)功能。課題組前期相關(guān)研究證實(shí),在宮頸癌組織中RACK1蛋白的表達(dá)升高,且在正常組織、宮頸上皮內(nèi)瘤變I、II、III級(jí)及宮頸癌組織中呈正相關(guān),故本實(shí)驗(yàn)擬在通過(guò)體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)初步研究體外RACK1的表達(dá)上調(diào)后對(duì)于SiHa細(xì)胞增殖、凋亡能力的影響,為進(jìn)一步探討RACK1在宮頸癌疾病發(fā)生發(fā)展及其預(yù)后中的相關(guān)作用機(jī)制奠定一定的基礎(chǔ)。方法:選取上海細(xì)胞庫(kù)提供的人SiHa細(xì)胞株進(jìn)行傳代培養(yǎng),通過(guò)脂質(zhì)體法將RACK1過(guò)表達(dá)質(zhì)粒及空白質(zhì)粒分組進(jìn)行轉(zhuǎn)染,并利用RT-qPCR測(cè)定各組細(xì)胞轉(zhuǎn)染后RACK1蛋白的mRNA的相對(duì)表達(dá)量,利用Western-Blot法測(cè)定各組細(xì)胞中RACK1蛋白的相對(duì)表達(dá)量,獲得穩(wěn)定高表達(dá)RACK1的SiHa細(xì)胞株,然后采用CCK-8法,利用酶標(biāo)儀連續(xù)測(cè)量轉(zhuǎn)染后各組細(xì)胞的吸光度,以此來(lái)比較各組細(xì)胞增殖情況;最后采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞的凋亡變化情況。利用SPSS16.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)資料的分析處理。結(jié)果:1.RACK1過(guò)表達(dá)質(zhì)粒組測(cè)得的mRNA的相對(duì)表達(dá)量為1.25±0.59,分別與空白質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組(0.71±0.12)、未轉(zhuǎn)染組(0.66±0.07)相比,含量明顯升高(P0.05);2.過(guò)表達(dá)質(zhì)粒組RACK1蛋白的相對(duì)含量(0.94±0.08)高于其他2組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);但空白質(zhì)粒組(0.74±0.07)與未處理組(0.72±0.09)的RACK1的相對(duì)含量之間無(wú)顯著性差異;3.RACK1的過(guò)表達(dá)可以促進(jìn)宮頸癌SiHa細(xì)胞的生長(zhǎng)增殖,通過(guò)CCK-8法連續(xù)測(cè)量各組細(xì)胞吸光度,并對(duì)其比較,可見(jiàn)過(guò)表達(dá)質(zhì)粒組細(xì)胞生長(zhǎng)增殖速度明顯高于其他兩組(P0.05);4.RACK1的過(guò)表達(dá)可以抑制宮頸癌SiHa細(xì)胞的凋亡。通過(guò)流式細(xì)胞儀對(duì)轉(zhuǎn)染后各組細(xì)胞凋亡率測(cè)定。過(guò)表達(dá)質(zhì)粒組細(xì)胞凋亡率(5.70±1.47)低于空白質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組(15.73±1.28)及未轉(zhuǎn)染組(17.37±3.01)(P0.05)。結(jié)論:1.在體外成功構(gòu)建RACK1過(guò)表達(dá)的宮頸癌Si Ha細(xì)胞株;2.RACK1蛋白的過(guò)表達(dá)在體外可促進(jìn)宮頸癌Si Ha細(xì)胞的增殖,抑制細(xì)胞凋亡,提示其對(duì)宮頸癌疾病發(fā)生發(fā)展有一定的促進(jìn)作用。
【學(xué)位單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R737.33
【部分圖文】：

轉(zhuǎn)染后各組細(xì)胞中 RACK1 的 mRNA 表達(dá)轉(zhuǎn)染后 3 組中 RACK1 蛋白 mRNA 表達(dá)的差異采用單因素方差結(jié)果顯示（圖 2-1）：轉(zhuǎn)染后 RACK1 過(guò)表達(dá)組中 RACK1 蛋白其他 2 組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＜0.05。但空白質(zhì)粒數(shù)值與未意義（表 2-1）。表 2-1 轉(zhuǎn)染后各組別中 RACK1 蛋白 mRNA 的表達(dá)（ 組別 mRNA 相對(duì)表達(dá)量 F 值 未轉(zhuǎn)染細(xì)胞組 0.66±0.07 415.025 空白質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組 0.71±0.12RACK1 過(guò)表達(dá)質(zhì)粒組 1.25±0.59aba與未轉(zhuǎn)染細(xì)胞組相比,P＜0.05；b與空白質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組相比,P＜0.05。

因素方差分析（SNK）法對(duì) 3 組整體的差異進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，結(jié)果的相對(duì)含量的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。組內(nèi)差異采用單D 法）進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，結(jié)果顯示：過(guò)表達(dá)質(zhì)粒組 RACK1 蛋白的相組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；但空白質(zhì)粒組與未處理組的之間無(wú)顯著性差異。（表 2-2、圖 2-2）表 2-2 轉(zhuǎn)染后各組別中 RACK1 蛋白的相對(duì)表達(dá)量（ ±S）組別 RACK1 蛋白表達(dá)量 F 值 P 值轉(zhuǎn)染細(xì)胞組 0.72±0.09 62.848 0.00白質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組 0.74±0.07K1 過(guò)表達(dá)質(zhì)粒組 0.94±0.08aba與未轉(zhuǎn)染細(xì)胞組相比,P＜0.05；b與空白質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組相比,P＜0.05。Xern-Blot 法測(cè)定各組細(xì)胞的 RACK1 蛋白的相對(duì)表達(dá)量

2）第 1 天 3 組之間細(xì)胞的 OD 值差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；第 2 天 3 組細(xì)胞的增長(zhǎng)的趨勢(shì)，但 RACK1 轉(zhuǎn)染組吸光度增長(zhǎng)快與空白質(zhì)粒及未轉(zhuǎn)染組，差意義，P 均＜0.05。但空白質(zhì)粒數(shù)值與未轉(zhuǎn)染組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3）從第 1 天開(kāi)始到第 5 天結(jié)束，各個(gè)時(shí)間點(diǎn)的細(xì)胞的 OD 值均成增長(zhǎng)的趨勢(shì)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P 均＜0.05。表 2-3 連續(xù) 5 天測(cè)量各組細(xì)胞的生長(zhǎng)（ ±S）day1 day2 day3 day4 day組 0.45±0.03 0.67±0.01 0.89±0.05 1.05±0.01 1.25±粒轉(zhuǎn)染組 0.48±0.37 0.69±0.05 0.94±0.02 1.12±0.07 1.33±1 轉(zhuǎn)染組 0.49±0.06 0.80±0.03 1.39±0.24 2.16±0.11 2.21± 0.303 0.000 0.000 0.000 0.0X

【參考文獻(xiàn)】

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1 王一w

本文編號(hào)：2830255