目的:HR-HPV病毒E6E7蛋白是誘發(fā)宮頸癌的主要始動(dòng)因素,但僅HPV感染并不足以致癌,需要其他促癌因素的共同作用。在腫瘤中多存在剪接因子的異常表達(dá),腫瘤的十大典型生物學(xué)行為均涉及基因的異�？勺兗艚印Ｄ敲�,可變剪接是否作為E6E7的“同謀”在宮頸癌變過(guò)程中發(fā)揮作用?考慮到HR-HPV感染及異�？勺兗艚釉谀[瘤發(fā)生中的重要作用,本課題擬探究HR-HPV感染、可變剪接與宮頸癌間的關(guān)系,深化對(duì)HR-HPV致宮頸癌機(jī)制的認(rèn)識(shí)并探究靶向可變剪接以治療宮頸癌的可能。內(nèi)容及方法:1)利用RNAi技術(shù)在HPV16/18陽(yáng)性的宮頸癌細(xì)胞系中干擾E6E7表達(dá)并進(jìn)行全基因表達(dá)譜分析及PCR驗(yàn)證,探究E6E7是否調(diào)控剪接因子的表達(dá)并篩選出變化最顯著者SRSF10。2)利用Oncomine等數(shù)據(jù)庫(kù)分析剪接因子SRSF10在宮頸癌中的表達(dá),并進(jìn)行IHC驗(yàn)證;構(gòu)建shSRSF10宮頸癌穩(wěn)轉(zhuǎn)株,建立裸鼠移植瘤模型,觀察SRSF10在宮頸癌中的功能。3)利用ChIP及雙熒光素酶報(bào)告基因技術(shù)驗(yàn)證轉(zhuǎn)錄因子E2F1與SRSF10啟動(dòng)子區(qū)的結(jié)合;干擾E2F1,利用WB技術(shù)檢測(cè)E2F1對(duì)SRSF10表達(dá)的調(diào)控,明確E6E7上調(diào)SRSF10的具體機(jī)制。4)利用TCGAspliceseq、CLIP-seq數(shù)據(jù)分析SRSF10調(diào)控的可變剪接靶基因;干擾SRSF10,利用PCR、RNA-seq及CLIP技術(shù)驗(yàn)證SRSF10對(duì)靶基因可變剪接的調(diào)控。5)利用雙熒光素酶報(bào)告基因、WB、ChIP及IHC等技術(shù)證明SRSF10介導(dǎo)IL1RAP可變剪接對(duì)IL1β-NF-κB通路及下游免疫檢查點(diǎn)分子CD47的調(diào)控,探究SRSF10調(diào)控IL1RAP可變剪接促進(jìn)宮頸癌進(jìn)展的分子機(jī)制。結(jié)果:1)干擾E6E7后,19個(gè)核心剪接因子表達(dá)下調(diào),其中以剪接因子SRSF10下調(diào)最為顯著。2)SRSF10在宮頸癌中表達(dá)上調(diào)且與HPV感染有關(guān),干擾SRSF10可抑制宮頸癌細(xì)胞的成瘤能力。3)轉(zhuǎn)錄因子E2F1結(jié)合SRSF10啟動(dòng)子區(qū),促進(jìn)SRSF10的轉(zhuǎn)錄激活上調(diào)SRSF10的表達(dá)。4)SRSF10調(diào)控IL1RAP的可變剪接促進(jìn)mIL1RAP的產(chǎn)生。mIL1RAP參與SRSF10的促癌作用。5)SRSF10介導(dǎo)的IL1RAP可變剪接通過(guò)調(diào)控IL1β-NF-κB通路上調(diào)免疫檢查點(diǎn)分子CD47的表達(dá),從而抑制巨噬細(xì)胞對(duì)宮頸癌細(xì)胞的吞噬。結(jié)論:HR-HPV E6E7通過(guò)E2F1促進(jìn)剪接因子SRSF10的轉(zhuǎn)錄激活,上調(diào)其表達(dá)。SRSF10介導(dǎo)IL1RAP可變剪接通過(guò)調(diào)控IL1β-NF-κB通路上調(diào)免疫檢查點(diǎn)分子CD47的表達(dá),抑制巨噬細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞的吞噬,促進(jìn)宮頸癌的形成。
【學(xué)位單位】：上海交通大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R737.33
【部分圖文】：

宮頸癌是最常見(jiàn)的婦科惡性腫瘤之一，占女性惡性腫瘤發(fā)病率及死亡率的第四位（圖1）。宮頸癌每年新增病例 53 萬(wàn)例，其中幾乎 85%發(fā)生于不發(fā)達(dá)國(guó)家及發(fā)展中國(guó)家[2]；每年死亡病例 27萬(wàn)例，不發(fā)達(dá)國(guó)家及發(fā)展中國(guó)家的死亡率是發(fā)達(dá)國(guó)家的 18 倍[3]。中美、南美、加勒比海、南非及南亞地區(qū)為宮頸癌主要高發(fā)區(qū)[4]。在我國(guó)，宮頸癌是女性生殖系統(tǒng)最常見(jiàn)的惡性腫瘤（圖 2），其年齡標(biāo)準(zhǔn)化發(fā)病率（Age-standardized Incidence Rate，ASIR）逐漸升高[6]。據(jù)最新的流行病學(xué)數(shù)據(jù)顯示，城市及 農(nóng) 村 地 區(qū) 的 ASIR 分 別 為10.1/10 萬(wàn)和 10.5/10 萬(wàn)[7]。宮頸癌發(fā)病呈年輕化趨勢(shì)，45-49 歲為宮頸癌的好發(fā)年齡。宮頸癌地域差異明顯

11的趨勢(shì)[6]。據(jù)統(tǒng)計(jì)，2015 年共計(jì) 2.64 萬(wàn)人死于宮頸癌[92.4/10 萬(wàn)和 2.9/10 萬(wàn)[8]。宮頸癌死亡的高峰年齡為 85 西部及東部地區(qū)。因此，中西部地區(qū)和農(nóng)村地區(qū)仍是我圖 2 女性高發(fā)惡性腫瘤(2015,中國(guó))[5]Fig 2 Most common tumors of the females（2015, China）[5]

8re及非編碼長(zhǎng)控制區(qū)（Non-coding long control region, LCR）白被認(rèn)為是宮頸癌的主要致癌蛋白[13]。E6 通過(guò)泛素依賴通過(guò)與 pRb 家族成員（p107 和 p130）相互作用，競(jìng)爭(zhēng) p結(jié)合，使 E2F 釋放，進(jìn)而導(dǎo)致一系列腫瘤相關(guān)基因的轉(zhuǎn)1.3 宮頸癌是多因素、多階段的病理過(guò)程宮頸癌并非 HR-HPV 感染的直接結(jié)果，需要其他促素、多階段共同作用的病理過(guò)程[16]。因此，改善宮頸癌上促進(jìn)宮頸癌的發(fā)生的具體機(jī)制。近期研究表明，慢性炎頸上皮癌變的過(guò)程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用[17-19]。慢性炎癥是腫環(huán)境的炎癥狀態(tài)可破壞機(jī)體免疫系統(tǒng)，阻止免疫系統(tǒng)對(duì)[21圖 3 E6E7 為 HPV 的主要致癌蛋白[14]Fig 3 E6E7 are the major oncoproteins of HPV[14]

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