研究背景及目的鄰苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(di-(2-ethylhexyl)phthalate,DEHP)是目前被廣泛應(yīng)用于工業(yè)生產(chǎn)和日常消費(fèi)品中的鄰苯二甲酸酯類(lèi)化合物,是典型的環(huán)境內(nèi)分泌干擾物,人體可通過(guò)多種途徑和來(lái)源暴露于DEHP。大量研究顯示,DEHP具有潛在的發(fā)育毒性,包括胚胎發(fā)育毒性及神經(jīng)發(fā)育毒性。本研究主要探討孕期DEHP暴露是否能引起胎鼠宮內(nèi)生長(zhǎng)受限,這種不良妊娠結(jié)局是否存在敏感期和性別差異以及不同孕期DEHP暴露對(duì)子代空間學(xué)習(xí)記憶能力的影響。方法本研究共分為以下三個(gè)部分:第一部分:ICR孕鼠隨機(jī)分為3組,分別為對(duì)照組(單純玉米油組)、50 mg/kg DEHP組、200 mg/kg DEHP組,按體重的1%于妊娠第0天(Gestational day 0,GD0)對(duì)孕鼠進(jìn)行灌胃處理至GD17,每天記錄孕鼠的體重和飼料消耗量。于GD18上午剖殺孕鼠,記錄子宮連胎重、死胎數(shù)、活胎數(shù)以及吸收胎數(shù),稱(chēng)量活胎體重和頭臀長(zhǎng),并通過(guò)肛殖距辨認(rèn)胎鼠性別,若肛殖距不能確定胎鼠性別,可通過(guò)解剖觀察其內(nèi)生殖器來(lái)判斷。第二部分:ICR孕鼠隨機(jī)分為6組,處理組給予200 mg/kg DEHP灌胃處理,處理時(shí)間分別為孕早期(GD0-GD6)、孕中期(GD7-GD12)、孕晚期(GD13-GD17),并設(shè)置相應(yīng)的對(duì)照組,對(duì)照組給予玉米油灌胃處理,每天記錄孕鼠的體重和飼料消耗量。孕鼠于GD18上午剖殺,及時(shí)記錄子宮連胎重、胎盤(pán)重、胎盤(pán)直徑、胎鼠體重和頭臀長(zhǎng),并通過(guò)肛殖距辨認(rèn)胎鼠性別,若肛殖距不能確定胎鼠性別,可通過(guò)解剖觀察其內(nèi)生殖器來(lái)判斷,同時(shí)也要記錄死胎數(shù)、活胎數(shù)以及吸收胎數(shù)等。對(duì)胎盤(pán)病理切片進(jìn)行免疫組織化學(xué)檢測(cè)和HE染色,分別觀察Ki67陽(yáng)性細(xì)胞的表達(dá)與分布情況及胎盤(pán)迷路層的血竇面積比。第三部分:ICR孕鼠隨機(jī)分為4組,處理組給予200 mg/kg DEHP灌胃處理,處理時(shí)間分別為孕中期(GD7-GD12)、孕晚期(GD13-GD17),設(shè)置相應(yīng)的對(duì)照組,給予玉米油灌胃處理。孕鼠分娩后,組內(nèi)調(diào)整每窩仔鼠只數(shù),10只/窩,雌雄各半。仔鼠在3周齡時(shí)斷乳并將雌雄仔鼠分開(kāi)飼養(yǎng),每天監(jiān)測(cè)仔鼠的體重變化和進(jìn)食情況。在仔鼠8周齡時(shí)(成年期)進(jìn)行Morris水迷宮實(shí)驗(yàn),觀察成年期子代空間學(xué)習(xí)記憶能力的改變。結(jié)果在第一部分的研究中,對(duì)照組、50 mg/kg、200 mg/kg DEHP處理組總胎鼠體重分別為(1.376±0.018)g、(1.271±0.015)g和(1.173±0.026)g,與對(duì)照組相比,處理組胎鼠體重均降低,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=26.826,P0.01);雌性胎鼠體重分別為(1.341±0.020)g、(1.245±0.020)g和(1.108±0.030)g,與對(duì)照組相比,處理組胎鼠體重均降低,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=25.102,P0.01);雄性胎鼠體重分別為(1.410±0.016)g、(1.302±0.010)g和(1.220±0.02)g,與對(duì)照組相比,處理組胎鼠均體重降低,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01);另外,處理組胎鼠的頭臀長(zhǎng)與對(duì)照組相比也有顯著的降低。在第二部分的研究中,孕早期、孕中期、孕晚期暴露組及對(duì)應(yīng)的對(duì)照組胎鼠體重分別為(1.338±0.025)g、(1.312±0.025)g、(1.241±0.023)g和(1.401±0.015)g、(1.401±0.025)g、(1.402±0.025)g,與對(duì)照組相比,孕中、晚期胎鼠體重降低,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01);孕早期、孕中期、孕晚期暴露組及對(duì)應(yīng)的對(duì)照組胎鼠頭臀長(zhǎng)分別為(23.53±0.23)g、(23.27±0.20)g、(23.21±0.21)g和(24.41±0.23)g、(24.42±0.29)g、(24.41±0.22)g,與對(duì)照組相比,孕早、中、晚期胎鼠頭臀長(zhǎng)降低,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。胎盤(pán)重量分別為(0.086±0.003)g、(0.083±0.004)g、(0.086±0.002)g和(0.098±0.005)g、(0.097±0.002)g、(0.097±0.003)g,與對(duì)照組相比,孕中期胎盤(pán)重量降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01);另外,孕中期暴露組的胎盤(pán)迷路層血竇面積比及細(xì)胞增殖均較對(duì)照組降低,而對(duì)孕早、晚期暴露組的胎盤(pán)影響不明顯。在第三部分Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)中,與對(duì)照組相比,孕中期暴露組的成年雌性子代第一天和第三天的潛伏期明顯延長(zhǎng),第四天到第六天恢復(fù)正常;孕中期、孕晚期暴露組的成年雄性子代第三天的潛伏期明顯延長(zhǎng),第四天到第六天恢復(fù)正常;第7天孕晚期暴露組的雄性成年小鼠經(jīng)過(guò)目標(biāo)象限的次數(shù)、平均運(yùn)動(dòng)距離縮短,潛伏期延長(zhǎng)(P0.05)。結(jié)論孕期DEHP暴露可導(dǎo)致胎鼠宮內(nèi)生長(zhǎng)受限,這種損傷在雌雄胎鼠中均有發(fā)生,不具有性別依賴性;胎鼠宮內(nèi)生長(zhǎng)受限的敏感期主要在孕中期和孕晚期;孕晚期DEHP暴露可降低雄性子代的記憶能力。
【學(xué)位單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類(lèi)】：R114;R715.3
【部分圖文】：

圖 1 Morris 水迷宮參考示意圖Fig 1 Morris water maze reference diagram學(xué)改變盤(pán)組織置于 4%多聚甲醛溶液中固定，并按照標(biāo)準(zhǔn)垂直于胎盤(pán)平面將胎盤(pán)蠟塊連續(xù)切成 5μm 的切片inandEosin，H&E）染色，中性樹(shù)脂封片，待樹(shù)脂。每組至少 5 張來(lái)源不同的切片，400× 光鏡下觀每張切片隨機(jī)選擇至少 10 個(gè)不連續(xù)的視野，用 N視野血竇面積比進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，其計(jì)算公式為：胎盤(pán)迷血竇像素總和/整個(gè)視野的總像素。

15P 暴露對(duì)孕鼠飼料消耗和孕期增重的影響。三組孕鼠從 GD0理（0、50、200mg/kg），每天稱(chēng)量孕鼠飼料消耗量和孕鼠體體重；（C）孕鼠增重。所有資料均以平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤的形式表HP exposure during pregnancy on consumption of food and weighonsumption. (B) Change of maternal body weight. (C) Maternal EHP 暴露對(duì)孕鼠妊娠結(jié)局的影響

圖 3 全孕期 DEHP 暴露對(duì)胎鼠體重和頭臀長(zhǎng)的影響。三組孕鼠從 GD0 到 GD17 每天給予 DEHP灌胃處理（0、50、200 mg/kg），GD18 早上剖殺，辨認(rèn)胎鼠性別及稱(chēng)量體重。（A）總胎鼠體重；（B）雄性胎鼠體重；（C）雌性胎鼠體重；（D）總胎鼠頭臀長(zhǎng)；（E）雄性胎鼠頭臀長(zhǎng)；（F）雌性胎鼠頭臀長(zhǎng)。所有資料均以平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤的形式表示（ x ±SEM），N=12-17。Fig 3 Effects of maternal DEHP exposure throughout pregnancy on fetal weight and crown-rumplength. (A-C) Body weight of fetuses; (D-F) Crown-rump length was measured. (N = 12 17). *P <0.05.3.2 DEHP 暴露所致 IUGR 的時(shí)間窗3.2.1 不同孕期 DEHP 暴露對(duì)孕鼠飼料消耗和體重的影響與對(duì)照組相比，DEHP 處理組的孕鼠飼料消耗量均未發(fā)生明顯變化，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見(jiàn)圖 4A；與對(duì)照組相比，DEHP 處理組孕鼠的孕期體重未

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9 田宗蕊;林W

本文編號(hào)：2825060