本文關鍵詞：葡萄糖通過HBP途徑影響子宮內膜細胞內β-catenin穩(wěn)定性的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：子宮內膜癌是女性生殖系統(tǒng)三大惡性腫瘤之一[1,2]。2014年美國女性子宮內膜癌的新增病例為52,630例,死亡病例為8,590例,在女性常見的惡性腫瘤中占第四位,生殖系統(tǒng)腫瘤中占第一位;在中國地區(qū),子宮內膜癌的患病率呈上升趨勢,隨著亞洲人群經濟生活水平改善,飲食文化西方化,子宮內膜癌的發(fā)病率逐年上升,出現(xiàn)年輕化趨勢以及高侵襲性、低分化等特點,嚴重危害女性生命健康。子宮內膜癌常見的危險因素包括肥胖和糖尿病等,異常增高的胰島素、雌激素、胰島素樣生長因子、瘦素以及脂聯(lián)素可能與內膜癌的發(fā)生相關[3-15],但具體機制不詳。而高血糖作為二者共同特征,已發(fā)現(xiàn)與多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展相關[16-22],但是血糖升高是否與子宮內膜癌的發(fā)生相關目前尚不清楚。目的近些年來,研究發(fā)現(xiàn)空腹血糖增高(大于5.6mmol/L)與內膜癌的發(fā)生發(fā)展相關。本課題重點研究葡萄糖通過HBP途徑增加子宮內膜細胞內β-catenin穩(wěn)定性的相關機制。方法與結論1.葡萄糖對子宮內膜癌細胞內β-catenin表達量作用的相關性研究。將an3ca和hec-1-b細胞分別在不同糖濃度培養(yǎng)基(0,5.5或25mm)中培養(yǎng),通過western-blot檢測β-catenin和o-glcna表達量與糖濃度的關系。結果發(fā)現(xiàn)不僅o-glcna水平隨著糖濃度升高表達量增高,而且β-catenin蛋白表達量也隨其增高而增高(高糖作用)。2.葡萄糖通過hbp途徑影響子宮內膜癌細胞內β-catenin表達量的相關性研究。將an3ca和hec-1-b細胞在含有hbp通路抑制劑(azaserine和don)的培養(yǎng)基中培養(yǎng),“高糖作用”引起的β-catenin表達量升高會被抑制劑所抑制。當加入glcnh2(葡萄糖胺)后可以增加β-catenin表達量。3.hbp通過增加β-catenin的o-glcnacylation引起其表達量增加。培養(yǎng)基中加入oga(o-glcnac水解酶)抑制劑pugnac后,通過western-blot檢測β-catenin和o-glcna表達量。結果發(fā)現(xiàn)pugnac不僅能夠增加o-glcnac水平同時也能增加β-catenin表達量。4.葡萄糖介導的β-catenin增高能夠激活wnt通路。用不同培養(yǎng)基培養(yǎng)內膜癌細胞,通過top/fop檢測wnt通路活性,發(fā)現(xiàn)隨著糖濃度升高,wnt通路活性增強。這種影響能夠被azaserine和don抑制,被pugnac增強。5.葡萄糖介導的表達量增高的β-catenin能夠進入細胞核并激活下游靶基因。在不同培養(yǎng)基下培養(yǎng)細胞后,提取核蛋白通過western-blot檢測β-catenin表達量,并通過rt-pcr檢測wnt通路下游靶基因cyclind1和axin2。結果顯示高葡萄糖能增加進入細胞核內的β-catenin含量,也能使下游靶基因cyclind1和axin2激活增加,這種影響能夠被azaserine和don抑制,被pugnac增強。6.雌性sd大鼠隨機分為正常對照組(nc組)、禁食組(fasting組)、高糖高脂組(hshf組)、葡萄糖胺組(glcnh2)和葡萄糖組(glc)。hshf組喂養(yǎng)高糖高脂飼料(普通飼料中加入10%的豬油、20%的蔗糖、2.5%的膽固醇、1%的膽酸鈉),其他組喂養(yǎng)普通飼料(65%碳水化合物,11%脂肪,24%蛋白),自由飲水。nc組和hshf組連續(xù)喂養(yǎng)8周后處死;fasting組禁食水24h后處死;gln組禁食水24h后給予葡萄糖胺2.5g/kg灌胃,3h后處死;glu組禁食水24h后給予葡萄糖5g/kg灌胃,3h后處死。各組大鼠處死后進行子宮內膜組織相關指標的檢測。結果顯示hshf組子宮內膜組織內β-catenin表達量明顯高于nc組,o-glcna化水平也顯著升高;GLN組和GLU組子宮內膜組織內β-catenin表達量明顯高于FASTING組,O-GlcNAc化水平也增高;GLN組和GLU組之間β-catenin表達量和O-GlcNAc化水平無統(tǒng)計學差異;β-catenin特異性靶基因CyclinD1和Axin2表達水平HSHF組明顯高于NC組。結論通過本課題研究,高血糖可以通過HBP途徑作用于子宮內膜癌細胞內β-catenin蛋白,使其糖基化水平增高,穩(wěn)定性增加,細胞核內含量增加,進一步激活下游靶基因。同時SD雌性大鼠隨著血糖水平的升高子宮內膜組織內的β-catenin蛋白表達量也升高,增高的β-catenin蛋白能夠進一步激活下游特異性靶基因。
【關鍵詞】：葡萄糖 子宮內膜癌 HBP Wnt/β-catenin
【學位授予單位】：第四軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R737.33
【目錄】：

• 縮略語表5-6
• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-12
• 前言12-13
• 文獻回顧13-23
• 第一部分 葡萄糖通過HBP途徑影響子宮內膜癌細胞內Wnt/β-catenin通路23-45
• 1 材料23-26
• 1.1 細胞培養(yǎng)試劑23
• 1.2 抗體23
• 1.3 試劑盒23-24
• 1.4 其他試劑24
• 1.5 主要儀器設備和耗材24-25
• 1.6 試劑配制25-26
• 2 方法26-33
• 2.1 細胞培養(yǎng)26-27
• 2.2 葡萄糖及其他試劑處理子宮內膜癌細胞27-28
• 2.3 細胞轉染28
• 2.4 Western Blot檢測蛋白表達28-32
• 2.5 免疫共沉淀檢測O-GlcNAc和 β-catenin32-33
• 2.6 Real-time PCR檢測33
• 2.7 實驗結果的統(tǒng)計學處理33
• 3 結果33-41
• 3.1 子宮內膜癌細胞內 β-catenin的表達量與葡萄糖濃度相關33-35
• 3.2 葡萄糖通過HBP調節(jié)子宮內膜癌細胞內 β-catenin表達量35-38
• 3.3 HBP通過升高 β-catenin的O-GlcNAylation水平來增加其表達量38-39
• 3.4 葡萄糖介導的 β-catenin升高對Wnt通路的影響39-40
• 3.5 葡萄糖介導的增高的 β-catenin蛋白能夠進入細胞核激活下游靶基因40-41
• 4 討論41-45
• 第二部分 葡萄糖通過HBP途徑增加SD大鼠子宮內膜細胞內 β-catenin表達量45-61
• 1 材料45-48
• 1.1 抗體45
• 1.2 試劑盒45
• 1.3 其他主要生化試劑、藥品45-46
• 1.4 主要儀器設備和耗材46-47
• 1.5 試劑配制47-48
• 2 方法48-53
• 2.1 實驗動物及分組48-49
• 2.2 Western Blot檢測蛋白表達49-53
• 2.3 Real-time PCR檢測53
• 2.4 實驗結果的統(tǒng)計學處理53
• 3 結果53-58
• 3.1 NC組和HSHF組的空腹血糖、β-catenin表達量及O-GlcNAc水平的比較53-55
• 3.2 β-catenin表達量及O-GlcNAc水平在FASTING組、GLN組和GLU組中的比較55-57
• 3.3 RT-PCR檢測NC組和HSHF組中 β-catenin m RNA水平及 β-catenin特異性靶基因表達水平57-58
• 4 討論58-61
• 小結61-62
• 參考文獻62-71
• 個人簡歷和研究成果71-72
• 致謝72

  本文關鍵詞：葡萄糖通過HBP途徑影響子宮內膜細胞內β-catenin穩(wěn)定性的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

，

本文編號：281914