本文關(guān)鍵詞：葡萄糖通過HBP途徑影響子宮內(nèi)膜細(xì)胞內(nèi)β-catenin穩(wěn)定性的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：子宮內(nèi)膜癌是女性生殖系統(tǒng)三大惡性腫瘤之一[1,2]。2014年美國女性子宮內(nèi)膜癌的新增病例為52,630例,死亡病例為8,590例,在女性常見的惡性腫瘤中占第四位,生殖系統(tǒng)腫瘤中占第一位;在中國地區(qū),子宮內(nèi)膜癌的患病率呈上升趨勢(shì),隨著亞洲人群經(jīng)濟(jì)生活水平改善,飲食文化西方化,子宮內(nèi)膜癌的發(fā)病率逐年上升,出現(xiàn)年輕化趨勢(shì)以及高侵襲性、低分化等特點(diǎn),嚴(yán)重危害女性生命健康。子宮內(nèi)膜癌常見的危險(xiǎn)因素包括肥胖和糖尿病等,異常增高的胰島素、雌激素、胰島素樣生長因子、瘦素以及脂聯(lián)素可能與內(nèi)膜癌的發(fā)生相關(guān)[3-15],但具體機(jī)制不詳。而高血糖作為二者共同特征,已發(fā)現(xiàn)與多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展相關(guān)[16-22],但是血糖升高是否與子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生相關(guān)目前尚不清楚。目的近些年來,研究發(fā)現(xiàn)空腹血糖增高(大于5.6mmol/L)與內(nèi)膜癌的發(fā)生發(fā)展相關(guān)。本課題重點(diǎn)研究葡萄糖通過HBP途徑增加子宮內(nèi)膜細(xì)胞內(nèi)β-catenin穩(wěn)定性的相關(guān)機(jī)制。方法與結(jié)論1.葡萄糖對(duì)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞內(nèi)β-catenin表達(dá)量作用的相關(guān)性研究。將an3ca和hec-1-b細(xì)胞分別在不同糖濃度培養(yǎng)基(0,5.5或25mm)中培養(yǎng),通過western-blot檢測(cè)β-catenin和o-glcna表達(dá)量與糖濃度的關(guān)系。結(jié)果發(fā)現(xiàn)不僅o-glcna水平隨著糖濃度升高表達(dá)量增高,而且β-catenin蛋白表達(dá)量也隨其增高而增高(高糖作用)。2.葡萄糖通過hbp途徑影響子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞內(nèi)β-catenin表達(dá)量的相關(guān)性研究。將an3ca和hec-1-b細(xì)胞在含有hbp通路抑制劑(azaserine和don)的培養(yǎng)基中培養(yǎng),“高糖作用”引起的β-catenin表達(dá)量升高會(huì)被抑制劑所抑制。當(dāng)加入glcnh2(葡萄糖胺)后可以增加β-catenin表達(dá)量。3.hbp通過增加β-catenin的o-glcnacylation引起其表達(dá)量增加。培養(yǎng)基中加入oga(o-glcnac水解酶)抑制劑pugnac后,通過western-blot檢測(cè)β-catenin和o-glcna表達(dá)量。結(jié)果發(fā)現(xiàn)pugnac不僅能夠增加o-glcnac水平同時(shí)也能增加β-catenin表達(dá)量。4.葡萄糖介導(dǎo)的β-catenin增高能夠激活wnt通路。用不同培養(yǎng)基培養(yǎng)內(nèi)膜癌細(xì)胞,通過top/fop檢測(cè)wnt通路活性,發(fā)現(xiàn)隨著糖濃度升高,wnt通路活性增強(qiáng)。這種影響能夠被azaserine和don抑制,被pugnac增強(qiáng)。5.葡萄糖介導(dǎo)的表達(dá)量增高的β-catenin能夠進(jìn)入細(xì)胞核并激活下游靶基因。在不同培養(yǎng)基下培養(yǎng)細(xì)胞后,提取核蛋白通過western-blot檢測(cè)β-catenin表達(dá)量,并通過rt-pcr檢測(cè)wnt通路下游靶基因cyclind1和axin2。結(jié)果顯示高葡萄糖能增加進(jìn)入細(xì)胞核內(nèi)的β-catenin含量,也能使下游靶基因cyclind1和axin2激活增加,這種影響能夠被azaserine和don抑制,被pugnac增強(qiáng)。6.雌性sd大鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組(nc組)、禁食組(fasting組)、高糖高脂組(hshf組)、葡萄糖胺組(glcnh2)和葡萄糖組(glc)。hshf組喂養(yǎng)高糖高脂飼料(普通飼料中加入10%的豬油、20%的蔗糖、2.5%的膽固醇、1%的膽酸鈉),其他組喂養(yǎng)普通飼料(65%碳水化合物,11%脂肪,24%蛋白),自由飲水。nc組和hshf組連續(xù)喂養(yǎng)8周后處死;fasting組禁食水24h后處死;gln組禁食水24h后給予葡萄糖胺2.5g/kg灌胃,3h后處死;glu組禁食水24h后給予葡萄糖5g/kg灌胃,3h后處死。各組大鼠處死后進(jìn)行子宮內(nèi)膜組織相關(guān)指標(biāo)的檢測(cè)。結(jié)果顯示hshf組子宮內(nèi)膜組織內(nèi)β-catenin表達(dá)量明顯高于nc組,o-glcna化水平也顯著升高;GLN組和GLU組子宮內(nèi)膜組織內(nèi)β-catenin表達(dá)量明顯高于FASTING組,O-GlcNAc化水平也增高;GLN組和GLU組之間β-catenin表達(dá)量和O-GlcNAc化水平無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;β-catenin特異性靶基因CyclinD1和Axin2表達(dá)水平HSHF組明顯高于NC組。結(jié)論通過本課題研究,高血糖可以通過HBP途徑作用于子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞內(nèi)β-catenin蛋白,使其糖基化水平增高,穩(wěn)定性增加,細(xì)胞核內(nèi)含量增加,進(jìn)一步激活下游靶基因。同時(shí)SD雌性大鼠隨著血糖水平的升高子宮內(nèi)膜組織內(nèi)的β-catenin蛋白表達(dá)量也升高,增高的β-catenin蛋白能夠進(jìn)一步激活下游特異性靶基因。
【關(guān)鍵詞】：葡萄糖 子宮內(nèi)膜癌 HBP Wnt/β-catenin
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R737.33
【目錄】：

• 縮略語表5-6
• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-12
• 前言12-13
• 文獻(xiàn)回顧13-23
• 第一部分 葡萄糖通過HBP途徑影響子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞內(nèi)Wnt/β-catenin通路23-45
• 1 材料23-26
• 1.1 細(xì)胞培養(yǎng)試劑23
• 1.2 抗體23
• 1.3 試劑盒23-24
• 1.4 其他試劑24
• 1.5 主要儀器設(shè)備和耗材24-25
• 1.6 試劑配制25-26
• 2 方法26-33
• 2.1 細(xì)胞培養(yǎng)26-27
• 2.2 葡萄糖及其他試劑處理子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞27-28
• 2.3 細(xì)胞轉(zhuǎn)染28
• 2.4 Western Blot檢測(cè)蛋白表達(dá)28-32
• 2.5 免疫共沉淀檢測(cè)O-GlcNAc和 β-catenin32-33
• 2.6 Real-time PCR檢測(cè)33
• 2.7 實(shí)驗(yàn)結(jié)果的統(tǒng)計(jì)學(xué)處理33
• 3 結(jié)果33-41
• 3.1 子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞內(nèi) β-catenin的表達(dá)量與葡萄糖濃度相關(guān)33-35
• 3.2 葡萄糖通過HBP調(diào)節(jié)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞內(nèi) β-catenin表達(dá)量35-38
• 3.3 HBP通過升高 β-catenin的O-GlcNAylation水平來增加其表達(dá)量38-39
• 3.4 葡萄糖介導(dǎo)的 β-catenin升高對(duì)Wnt通路的影響39-40
• 3.5 葡萄糖介導(dǎo)的增高的 β-catenin蛋白能夠進(jìn)入細(xì)胞核激活下游靶基因40-41
• 4 討論41-45
• 第二部分 葡萄糖通過HBP途徑增加SD大鼠子宮內(nèi)膜細(xì)胞內(nèi) β-catenin表達(dá)量45-61
• 1 材料45-48
• 1.1 抗體45
• 1.2 試劑盒45
• 1.3 其他主要生化試劑、藥品45-46
• 1.4 主要儀器設(shè)備和耗材46-47
• 1.5 試劑配制47-48
• 2 方法48-53
• 2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組48-49
• 2.2 Western Blot檢測(cè)蛋白表達(dá)49-53
• 2.3 Real-time PCR檢測(cè)53
• 2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果的統(tǒng)計(jì)學(xué)處理53
• 3 結(jié)果53-58
• 3.1 NC組和HSHF組的空腹血糖、β-catenin表達(dá)量及O-GlcNAc水平的比較53-55
• 3.2 β-catenin表達(dá)量及O-GlcNAc水平在FASTING組、GLN組和GLU組中的比較55-57
• 3.3 RT-PCR檢測(cè)NC組和HSHF組中 β-catenin m RNA水平及 β-catenin特異性靶基因表達(dá)水平57-58
• 4 討論58-61
• 小結(jié)61-62
• 參考文獻(xiàn)62-71
• 個(gè)人簡歷和研究成果71-72
• 致謝72

  本文關(guān)鍵詞：葡萄糖通過HBP途徑影響子宮內(nèi)膜細(xì)胞內(nèi)β-catenin穩(wěn)定性的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號(hào)：281914