目的:1)評(píng)估生長(zhǎng)激素預(yù)處理在卵巢低反應(yīng)患者體外受精中應(yīng)用效果;2)體外研究探討生長(zhǎng)激素對(duì)低反應(yīng)顆粒細(xì)胞及線(xiàn)粒體膜電位影響。方法:本研究分為兩個(gè)部分,第一部分回顧性分析2017年4月到2018年10月在我中心就診的136例患者,均診斷為卵巢低反應(yīng)。按照其使用生長(zhǎng)激素治療的給藥方法和用藥時(shí)機(jī)將研究分組間對(duì)照和自身對(duì)照。其中組間對(duì)照107人,應(yīng)用生長(zhǎng)激素預(yù)處理組(Gn啟動(dòng)前應(yīng)用約4周的GH治療,n=58)與非預(yù)處理組(Gn啟動(dòng)開(kāi)始間斷予以GH治療,n=49),自身對(duì)照29人,移植或取卵失敗后應(yīng)用生長(zhǎng)激素預(yù)處理(Gn啟動(dòng)前連續(xù)應(yīng)用約4周的GH治療);組間對(duì)照比較Gn使用總量、使用天數(shù)、獲卵數(shù)、胚胎數(shù)、優(yōu)質(zhì)胚胎數(shù)、種植率、生化妊娠率及臨床妊娠率,自身對(duì)照比較GH預(yù)處理前后Gn使用總量、使用天數(shù)、獲卵數(shù)、胚胎數(shù)、優(yōu)質(zhì)胚胎數(shù)、種植率、生化妊娠數(shù)及臨床妊娠數(shù)。第二部分,體外研究GH對(duì)低反應(yīng)顆粒細(xì)胞及線(xiàn)粒體膜電位影響。用5mg/L順鉑處理來(lái)塑造低反應(yīng)顆粒細(xì)胞模型;研究對(duì)象分為三組,新鮮組(即培養(yǎng)后的顆粒細(xì)胞)、低反應(yīng)組(用5mg/L順鉑處理24小時(shí)后的顆粒細(xì)胞)、GH處理組(用5mg/L順鉑處理24小時(shí)后的的低反應(yīng)顆粒細(xì)胞再加用生長(zhǎng)激素處理48小時(shí)后);分別先用光學(xué)顯微鏡觀(guān)察顆粒細(xì)胞數(shù)量及形態(tài)變化后用JC-1/PI染色液染色,用共聚焦顯微鏡觀(guān)察顆粒細(xì)胞線(xiàn)粒體形態(tài)變化并組間比較線(xiàn)粒體膜電位的差異。結(jié)果:第一部分:(1)組間對(duì)照中預(yù)處理組Gn的使用總量(2031.03±945.55)和使用天數(shù)(8.93±2.53)明顯少于非預(yù)處理組Gn的使用總量(3578.24±1277.56)和使用天數(shù)(11.63±3.04),其胚胎數(shù)(2.38±1.75)、優(yōu)質(zhì)胚胎數(shù)(1.79±1.41)、移植率(36.14%)、生化妊娠率(55.17%)、臨床妊娠率(48.28%)明顯高于非預(yù)處理組的胚胎數(shù)(1.76±1.01)、優(yōu)質(zhì)胚胎數(shù)(1.14±1.14)、移植率(18.97%)、生化妊娠率(24.49%)、臨床妊娠率(18.37%),差異均有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);但其獲卵數(shù)(4.98±3.10)與非預(yù)處理組的(4.67±1.95)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。(2)自身對(duì)照組應(yīng)用生長(zhǎng)激素預(yù)處理后比較之前不但Gn的使用天數(shù)(-1±2.66)與總量(-317±872.6)減少,而且獲卵數(shù)(2.17±2.07)、胚胎數(shù)(1.41±1.70)、優(yōu)質(zhì)胚胎數(shù)(1.31±1.23)、移植率(0%VS 33.33%)、生化妊娠數(shù)(1 VS 16)、臨床妊娠數(shù)(0 VS 14)均升高,差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。第二部分:首先通過(guò)光學(xué)顯微鏡下觀(guān)察發(fā)現(xiàn)5mg/L順鉑處理后的顆粒細(xì)胞數(shù)量明顯減少伴有形態(tài)改變,而后通過(guò)GH干預(yù)后其數(shù)量又明顯增加伴形態(tài)恢復(fù)。接下來(lái)從二個(gè)方面觀(guān)察GH的作用:㈠顆粒細(xì)胞線(xiàn)粒體形態(tài)方面,GH組線(xiàn)粒體體積雖較新鮮組稍增大,但較低反應(yīng)組明顯縮小,其基質(zhì)密度較低反應(yīng)組明顯升高、界限也較低反應(yīng)組更清晰。㈡顆粒細(xì)胞線(xiàn)粒體膜電位方面,5mg/L順鉑處理后的低反應(yīng)組的顆粒細(xì)胞線(xiàn)粒體膜電位值較新鮮理組的明顯減少,差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);GH處理組的顆粒細(xì)胞線(xiàn)粒體膜電位值較低反應(yīng)組的明顯升高,差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);GH處理組的顆粒細(xì)胞線(xiàn)粒體膜電位值小于新鮮組的顆粒細(xì)胞線(xiàn)粒體膜電位值,但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:1)生長(zhǎng)激素預(yù)處理可明顯提高POR患者體外受精的臨床結(jié)局,并明顯減少Gn的使用總量和天數(shù)。2)GH可改善顆粒細(xì)胞功能,增加低反應(yīng)顆粒細(xì)胞線(xiàn)粒體的膜電位值。
【學(xué)位單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類(lèi)】：R714.8
【部分圖文】：

先光學(xué)顯微鏡下可明顯看出 5mg/L 順鉑處理后的顆粒細(xì)胞數(shù)量上明顯減態(tài)發(fā)生改變；后經(jīng)過(guò)生長(zhǎng)激素干預(yù)處理后發(fā)現(xiàn)其顆粒細(xì)胞數(shù)量明顯增多，也明顯恢復(fù)，與新鮮組差異不大。其次，通過(guò)共聚焦顯微鏡下染色可以看處理后線(xiàn)粒體體積腫脹、基質(zhì)密度低。具體詳見(jiàn)圖 1。新鮮組 5mg/L 順鉑處理 GH 組

圖 2 .新鮮組、低反應(yīng)組及 GH 處理組的顆粒細(xì)胞線(xiàn)粒體熒光染色對(duì)比3.2.2 線(xiàn)粒體膜電位結(jié)果激光共聚焦顯微鏡定性觀(guān)察顯示：與新鮮組相比，低反應(yīng)組紅色熒光(JC-1聚合體)／綠色熒光(JC-1 單體)明顯下降，提示低反應(yīng)組膜電位呈現(xiàn)逐漸下降的趨勢(shì)，聚集體/單體比值差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），說(shuō)明 5mg/L 順鉑制造的顆粒細(xì)胞低反應(yīng)模型很成功。與低反應(yīng)組相比，GH 處理組紅色熒光(JC-1 聚合體)／綠色熒光(JC-1 單體)明顯升高，聚集體/單體比值差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），說(shuō)明 GH 處理組膜電位呈現(xiàn)恢復(fù)的趨勢(shì)。與新鮮組相比，GH 組紅色熒光(JC-1 聚合體)／綠色熒光(JC-1 單體)略降低，聚集體/單體比值差異無(wú)顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），說(shuō)明 GH 處理后線(xiàn)粒體膜電位恢復(fù)良好，GH 對(duì)低反應(yīng)顆粒細(xì)胞治療有效。具體詳見(jiàn)表 4，表 5 及圖 3。

安徽醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文表 4 完全隨機(jī)設(shè)計(jì)方差分析表變異來(lái)源 SS df MS F P處理組間 1.2374 2 0.6187 8.3863 <0.01組內(nèi)（誤差） 1.3279 18 0.0738總 2.5653 20表 5 SNK 法 q 檢驗(yàn)計(jì)算表對(duì)比組 兩均數(shù)之差 差的標(biāo)準(zhǔn)誤 q 值 組數(shù) a P新鮮組與低反應(yīng)組 0.6007 0.1037 5.7903 3 <0.01新鮮組與生長(zhǎng)激素處理組 0.2598 0.0994 2.6132 2 ＞0.05生長(zhǎng)激素處理組與低反應(yīng)組 0.3409 0.1069 3.1898 2 0.01~0.05圖 3.三組之間的差異比較

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