研究背景與目的胚胎的成功植入和胎盤(pán)的正常發(fā)育對(duì)正常妊娠至關(guān)重要。胎盤(pán)滋養(yǎng)層細(xì)胞侵入子宮內(nèi)膜,為胚胎發(fā)育所必須的營(yíng)養(yǎng)、激素環(huán)境提供條件。胎盤(pán)發(fā)育需要經(jīng)歷一系列復(fù)雜的細(xì)胞事件,首先從絨毛外滋養(yǎng)層細(xì)胞的形成和分化開(kāi)始。滋養(yǎng)層細(xì)胞干分化成絨毛外滋養(yǎng)層細(xì)胞,它是人類(lèi)胚胎中最先分化、最先發(fā)育的細(xì)胞類(lèi)型之一,為母體-胎兒界面僅有的可與母體免疫系統(tǒng)直接接觸的胎兒細(xì)胞。該細(xì)胞具有多種功能,涉及細(xì)胞增殖、胚胎著床。在胚胎植入過(guò)程中、母體-胎兒免疫耐受的過(guò)程中發(fā)揮重要作用。滋養(yǎng)層細(xì)胞增殖、遷移、侵襲不足和過(guò)度均造成早期胎盤(pán)發(fā)育異常,進(jìn)一步導(dǎo)致胚胎、胎兒死亡,引起流產(chǎn)和其他妊娠相關(guān)疾病。因此滋養(yǎng)層細(xì)胞功能的研究一直受到廣泛關(guān)注。同源框基因在胚胎發(fā)育過(guò)程中具有重要的調(diào)控作用,含同源域因子GATA-3表達(dá)于滋養(yǎng)層細(xì)胞中,妊娠高血壓疾病發(fā)展中,破壞Th1/Th2平衡,與妊娠高血壓疾病的發(fā)展及嚴(yán)重程度密切相關(guān)。絨毛膜癌BeWo細(xì)胞系中,HOXA11低表達(dá)促進(jìn)細(xì)胞滋養(yǎng)層向合體滋養(yǎng)層分化,促進(jìn)了絨毛膜癌的發(fā)生發(fā)展。提示同源框基因?qū)ψ甜B(yǎng)層細(xì)胞發(fā)育具有重要調(diào)控作用。HOXA10在胚胎發(fā)育過(guò)程中若發(fā)生基因突變可引起苗勒管發(fā)育異常,引起雙子宮、子宮縱隔等畸形。而它在胚胎早期發(fā)育階段,即早期胎盤(pán)發(fā)育階段所發(fā)揮的作用尚未有相關(guān)研究。本研究通過(guò)基因芯片技術(shù)發(fā)現(xiàn)HOXA10在早期胎盤(pán)組織中表達(dá)量顯著高于中、晚期胎盤(pán)組織,提示它對(duì)早期胎盤(pán)發(fā)育有重要影響,進(jìn)一步探討了HOXA10對(duì)滋養(yǎng)層細(xì)胞增殖能力調(diào)控的必要性及相關(guān)分子機(jī)制。材料與方法1.以小鼠胎盤(pán)發(fā)育為模型,取小鼠胎盤(pán)發(fā)育的第6.5d,14.5d和19.5d的組織各3例,進(jìn)行mRNA芯片檢測(cè)。差異基因篩選條件為Fold change2.0,P0.05,篩選出與早期胎盤(pán)發(fā)育過(guò)程相關(guān)的同源框基因HOXA10。2.在C57小鼠胎盤(pán)組織、人胎盤(pán)組織中通過(guò)RT-PCR及western blot驗(yàn)證芯片結(jié)果。3.在滋養(yǎng)層細(xì)胞系HTR-8/SVneo中進(jìn)行功能實(shí)驗(yàn),利用小干擾RNA干擾HOXA10表達(dá)后,進(jìn)行增殖功能實(shí)驗(yàn),并檢測(cè)細(xì)胞周期素依賴(lài)性蛋白激酶抑制物p57表達(dá)量變化。4.通過(guò)免疫組化法檢測(cè)葡萄胎絨毛組織、人工流產(chǎn)絨毛組織、自然流產(chǎn)絨毛組織中HOXA10表達(dá)情況。驗(yàn)證HOXA10對(duì)滋養(yǎng)層細(xì)胞增殖力調(diào)控的重要性。研究結(jié)果1.HOXA10在人早期胎盤(pán)組織中的表達(dá)量顯著高于中、晚期胎盤(pán)組織;2.人滋養(yǎng)層細(xì)胞HTR-8中干擾HOXA10表達(dá)后,細(xì)胞增殖能力明顯減弱。細(xì)胞周期素依賴(lài)性蛋白激酶抑制物p57是人早期滋養(yǎng)層細(xì)胞中表達(dá)最高的周期調(diào)節(jié)劑,干擾HOXA10后p57高表達(dá),抑制細(xì)胞周期;流式細(xì)胞儀檢測(cè)各周期細(xì)胞數(shù)結(jié)果:G1期細(xì)胞數(shù)顯著增加,S期細(xì)胞數(shù)明顯減少;CCK8實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)一步驗(yàn)證干擾后細(xì)胞增殖能力明顯減弱(P0.05)。3.人滋養(yǎng)層細(xì)胞中干擾HOXA10表達(dá)后,細(xì)胞凋亡水平無(wú)明顯變化。滋養(yǎng)層細(xì)胞中干擾HOXA10后,通過(guò)流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡水平,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,HOXA10表達(dá)量改變不影響滋養(yǎng)層細(xì)胞凋亡(P0.05)。4.免疫組化法檢測(cè)出人工流產(chǎn)絨毛組織中HOXA10表達(dá)明顯低于完全性葡萄胎組織,顯著高于自然流產(chǎn)絨毛組織。研究結(jié)論1、HOXA10在胎盤(pán)發(fā)育過(guò)程中的表達(dá)具有時(shí)間特異性,主要參與早期胎盤(pán)發(fā)育。2、HOXA10通過(guò)調(diào)控細(xì)胞周期素依賴(lài)性蛋白激酶抑制物p57,影響滋養(yǎng)層細(xì)胞增殖能力,避免過(guò)度增殖和增殖不足,是保證妊娠順利的基礎(chǔ)。
【學(xué)位單位】：中國(guó)人民解放軍海軍軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類(lèi)】：R714
【部分圖文】：

R 檢測(cè)小鼠早、中、晚期胎盤(pán)組織中 mRNA 水平，結(jié)果與人早期胎盤(pán)高表達(dá)，中、晚期呈逐漸下降趨勢(shì)。CR 檢測(cè)早、中、晚期胎盤(pán)組織中 HOXA10mRNA,結(jié)0mRNA 顯著高于中、晚期胎盤(pán)組織，差異具有統(tǒng)計(jì)蛋白表達(dá)量顯著高于中、晚期,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（合，提示 HOXA10 對(duì)早期胎盤(pán)發(fā)育具有重要作用

：RT-PCR 檢測(cè)三組胎盤(pán)組織中 mRNA 水平，早、中、晚呈逐漸降低趨勢(shì)。B、C：We組胎盤(pán)組織中 HOXA10 蛋白表達(dá)，早、中、晚呈逐漸降低趨勢(shì)。第二部分滋養(yǎng)層細(xì)胞功能實(shí)驗(yàn)轉(zhuǎn)染 siRNA 后 HOXA10 在 HTR-8 細(xì)胞中表達(dá)明顯降低在 HTR-8 細(xì)胞系中轉(zhuǎn)染 HOXA10-siRNA24h 后收集細(xì)胞，運(yùn)用 RT-PCR TR-8 細(xì)胞中 HOXA10mRNA 的表達(dá)量。結(jié)果顯示： HOXA10mRNA 明A）。Western-blot 檢測(cè)轉(zhuǎn)染后 HTR-8 細(xì)胞中 HOXA10 蛋白的表達(dá)量，結(jié)10 蛋白水平明顯降低，其中 si-RNA1 組尤為顯著（圖 3B 和圖 3C）。結(jié) 干擾有效，siRNA-1 干擾效率最佳，效率達(dá) 80%，siRNA-2 干擾效率達(dá)

HOXA10 mRNA:轉(zhuǎn)染 HOXA10-siRNA 后，驗(yàn)證轉(zhuǎn)擾效率達(dá) 30%，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(***p＜0.00A-2 組 HOXA10 蛋白水平下降，siRNA-1 組細(xì)胞中

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本文編號(hào)：2811577