卵母細胞激活在受精和胚胎發(fā)育過程中起到關(guān)鍵作用,其中鈣離子振蕩在卵母細胞激活中起到重要作用。小鼠卵母細胞激活后的鈣離子振蕩可持續(xù)時間長達數(shù)小時。鈣振蕩是卵母細胞從減數(shù)分裂轉(zhuǎn)化為有絲分裂過程中的重要事件,能直接影響到原核的形成、胚胎發(fā)育和胚胎植入。近年來,很多研究結(jié)果表明:鈣離子振蕩調(diào)控著卵母細胞激活的效率和胚胎的后續(xù)發(fā)育。但目前關(guān)于卵齡、激活液的pH值、卵母細胞的成熟方式和卵母細胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激狀態(tài)對孤雌激活后鈣離子振蕩影響的研究還不明確。研究目的:比較不同處理方式對小鼠卵母細胞孤雌激活后鈣離子振蕩模式的影響。研究方法:本研究中,我們用不同的處理方法處理卵母細胞后使用氯化鍶激活卵母細胞,并用活細胞工作站記錄卵母細胞被激活后的瞬時鈣離子濃度變化;用qRT-PCR檢測了卵母細胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激標志物水平。研究內(nèi)容:分別收集注射hCG(human chorionic gonadotrophin,人絨毛膜促性腺激素)13h、15h、17h、19h和21h后的卵母細胞,研究不同卵齡對孤雌激活后鈣離子振蕩的影響;研究激活液不同pH值(pH6.4,pH6.6,pH6.8,pH7.0,pH7.2,pH7.4和pH7.6)對卵母細胞孤雌激活鈣離子振蕩的影響;另外,比較體外培養(yǎng)17h的裸卵和卵丘-卵母細胞復(fù)合物與體內(nèi)成熟卵母細胞(注射hCG 17h后收集卵母細胞)孤雌激活后鈣離子振蕩方式;最后,我們分別用2.5-50 μ/ml的衣霉素誘導(dǎo)卵母細胞發(fā)生內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激,研究內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激對卵母細胞孤雌激活鈣離子振蕩的影響。研究結(jié)果:實驗結(jié)果提示注射hCG 17h后收集的卵母細胞孤雌激活后鈣離子振蕩頻率最快,鈣離子振蕩周期最短。激活液的pH值為6.8至7.6時不影響鈣離子振蕩模式,但pH6.6組和pH6.4組鈣離子振蕩的頻率顯著低于pH 7.2組,而振蕩周期顯著高于pH7.2組。此外,體外成熟的卵母細胞與體內(nèi)成熟卵母細胞相比,其孤雌激活鈣離子振蕩的頻率和峰值顯著降低。體外成熟卵丘-卵母細胞復(fù)合物組孤雌激活后鈣離子振蕩的頻率和峰值顯著高于裸卵組,鈣離子振蕩的周期顯著低于體外成熟裸卵組。然而,在體外成熟的卵丘-卵母細胞復(fù)合物卵母細胞孤雌激活后鈣離子振蕩的頻率和峰值水平均低于體內(nèi)成熟的卵母細胞。最后,我們用2.5-50 μg/ml衣霉素誘導(dǎo)卵母細胞的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激,結(jié)果發(fā)現(xiàn)衣霉素誘導(dǎo)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激影響鈣離子振蕩模式,表現(xiàn)為鈣離子振蕩周期顯著延長和頻率顯著降低。結(jié)論:實驗結(jié)果提示不同卵齡,激活液的pH值和卵母細胞成熟方式是影響孤雌激活鈣離子振蕩的關(guān)鍵因素。同時內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激損害了小鼠卵母細胞孤雌激活后的鈣振蕩模式。
【學(xué)位單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R714

【參考文獻】

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本文編號：2810364