【摘要】：目的:宮頸癌在世界范圍內(nèi)有著很高的發(fā)病率和死亡率,是女性中常見(jiàn)的癌癥之一。在我國(guó)的新疆地區(qū),維吾爾族宮頸癌的發(fā)病率和死亡率都高于其他民族,但其發(fā)病機(jī)制還尚不明確。近幾年醫(yī)學(xué)研究發(fā)現(xiàn)基因多態(tài)性及其相關(guān)microRNA及l(fā)ncRNA在惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中起重要的作用。本研究目的:1)探究五個(gè)腫瘤相關(guān)基因(CDK6、CRY2、FAM109A、TCF12和ZNF609)3’-UTR多態(tài)性位點(diǎn)與新疆維吾爾族女性宮頸鱗癌易感性之間的潛在相關(guān)性。同時(shí),明確這些基因在宮頸鱗癌中的表達(dá)情況、以其與候選SNP之間的關(guān)聯(lián);2)探究以上5個(gè)基因相關(guān)的miR-138-5p、miR-7-5p、miR-34a-5p、miR-218-5p及miR-214-5p在宮頸鱗癌中的表達(dá)情況,及其與宮頸鱗癌臨床指標(biāo)、潛在靶基因mRNA的表達(dá)及候選SNPs的相關(guān)性;3)探究LncRNA HOTAIR在宮頸鱗癌中的表達(dá)情況,及其與宮頸鱗癌臨床指標(biāo)及miRNA表達(dá)的相關(guān)性。方法:本研究共招募了研究對(duì)象616人(宮頸鱗癌病例組306人,健康對(duì)照組310人),通過(guò)Agena MassARRAY平臺(tái)對(duì)五個(gè)基因的多態(tài)性位點(diǎn)進(jìn)行了分型。在不同遺傳模型下,采用邏輯回歸分析評(píng)估候選的單核苷酸多態(tài)性與宮頸鱗癌患病風(fēng)險(xiǎn)的相關(guān)性。利用Haploview分析軟件(version4.2)構(gòu)建單倍型,估計(jì)位點(diǎn)連鎖不平衡。利用SHEsis在線軟件平臺(tái)分析多態(tài)性位點(diǎn)的遺傳關(guān)聯(lián)。采用Trizol法提取總RNA,利用qRT-PCR檢測(cè)53例宮頸鱗癌組織樣本和46例對(duì)照人群正常宮頸組織樣本中5個(gè)基因、5個(gè)miRNA和LncRNA HOTAIR的表達(dá)情況。通過(guò)Student t檢驗(yàn)分析基因、miRNA和LncRNA HOTAIR在宮頸鱗癌病例樣本和對(duì)照組織樣本之間的差異及其與宮頸鱗癌臨床指標(biāo)的關(guān)系。采用Spearman相關(guān)性分析用來(lái)評(píng)估m(xù)iRNA表達(dá)與其靶基因表達(dá)的相關(guān)性和LncRNA HOTAIR表達(dá)與miRNA表達(dá)的相關(guān)性。利用單因素方差分析及Student t檢驗(yàn)分析基因型模型、顯性模型及隱性模型下候選SNP位點(diǎn)的多態(tài)性與基因、miRNA表達(dá)的相關(guān)性。結(jié)果:在不同遺傳模型下,CDK6基因多態(tài)位點(diǎn)rs8179和rs42033可能與維吾爾族女性宮頸鱗癌的患病風(fēng)險(xiǎn)的相關(guān)。分層分析顯示TCF12-rs7164298、-rs8035097位點(diǎn)、CDK6-rs8179、-rs42032、-rs42033位點(diǎn)和FAM109A-rs3742004位點(diǎn)顯著影響維吾爾族女性宮頸鱗癌的患病風(fēng)險(xiǎn)。單體型分析顯示FAM109Ars3742004|rs874286|rs10849938-“ACC”與降低宮頸鱗癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)有顯著相關(guān)。基因表達(dá)分析表明,ZNF609基因和CDK6基因的表達(dá)水平在病例組和對(duì)照組間存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,且在宮頸鱗癌組織樣本中表達(dá)下調(diào)。ZNF609、TCF12、FAM109A、CDK6和CRY2的表達(dá)水平與宮頸鱗癌臨床特征包括分期、淋巴脈管間隙浸潤(rùn)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、深層間質(zhì)浸潤(rùn)深度、腫瘤大小及分化程度相關(guān)�；虮磉_(dá)與SNP分型之間的相關(guān)性分析顯示:FAM109A和TCF12基因的表達(dá)與它們的候選SNPs位點(diǎn)多態(tài)性相關(guān)。miRNA表達(dá)結(jié)果顯示,miR-138-5p、miR-218-5p及miR-214-5p在宮頸鱗癌組織樣本中表達(dá)降低,miR-34a-5p在宮頸鱗癌組織樣本中表達(dá)升高。miR-138-5p、miR-34a-5p、miR-218-5p及miR-214-5p的表達(dá)水平與宮頸鱗癌臨床特征包括分期、淋巴脈管間隙浸潤(rùn)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、深層間質(zhì)浸潤(rùn)深度、腫瘤大小及分化程度相關(guān)。相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn),在宮頸鱗癌組織樣本中miR-138-5p及miR-218-5p與其靶基因mRNA的表達(dá)存在相關(guān)性。miRNA表達(dá)與SNP分型之間的相關(guān)性分析顯示:miR-138-5p、miR-34a-5p、miR-218-5p及miR-214-5p的表達(dá)與候選SNP位點(diǎn)多態(tài)性相關(guān)。LncRNA HOTAIR在宮頸鱗癌組織樣本中表達(dá)降低,且與腫瘤臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、深層間質(zhì)浸潤(rùn)深度及分化程度等指標(biāo)相關(guān)。相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn),在宮頸鱗癌組織樣本中,LncRNA HOTAIR的表達(dá)與miR-34a-5p、miR-218-5p及miR-214-5p的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)。結(jié)論:1)研究結(jié)果表明,CDK6、TCF12、FAM109A和ZNF609基因的3’-UTR多態(tài)性與新疆維吾爾族女性宮頸鱗癌的患病風(fēng)險(xiǎn)相關(guān),其中ZNF609基因和CDK6基因的表達(dá)水平在病例組和對(duì)照組間存在顯著差異;2)miR-138-5p、miR-34a-5p、miR-218-5p及miR-214-5p在宮頸鱗癌組織樣本中表達(dá)異常,且其表達(dá)被證實(shí)與宮頸鱗癌臨床指標(biāo)相關(guān),可作為宮頸鱗癌早期診斷的生物標(biāo)志物;3)LncRNA HOTAIR在宮頸鱗癌中表達(dá)異常,且其表達(dá)被發(fā)現(xiàn)與臨床指標(biāo)相關(guān),該分子可能參與宮頸鱗癌的發(fā)生發(fā)展。
【學(xué)位授予單位】：新疆醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R737.33
【圖文】：

第一部分 研究?jī)?nèi)容與方法段約80-120bp，單堿基延伸引物約15-30個(gè)氨基酸。引物信息見(jiàn)表1-1所示，引物工生物工程股份有限公司進(jìn)行合成。具體實(shí)驗(yàn)操作的流程如圖1-2所示。

第一部分 結(jié) 果圖，分別表示野生純合子，雜合子以及突變純合子分型示UEP的分子量的位置，第二條有顏色的虛線表示UEP三條帶顏色的虛線表示為UEP+T堿基的分子量的位置。紅色虛線表示該位置未檢測(cè)到峰。圖1-3中第二條虛線為C堿基，表示基因型是CC型純合子；圖1-4中第二、三條因型是CT雜合子；圖1-5中只有第三條虛線顯示藍(lán)色峰圖。

紅色虛線表示該位置未檢測(cè)到峰。圖1-3中第二條虛線為C堿基，表示基因型是CC型純合子；圖1-4中第二、三條因型是CT雜合子；圖1-5中只有第三條虛線顯示藍(lán)色峰圖。圖1-3 rs8179位點(diǎn)野生純合子分型結(jié)果圖Figure 1-3 Wild homozygosis genotype result of rs8179

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本文編號(hào)：2794502