【摘要】：背景和目的:卵巢癌是女性盆腔生殖器官三大惡性腫瘤之一,其發(fā)病率僅次于宮頸癌、子宮內(nèi)膜癌而位居第三位,近年來卵巢惡性腫瘤的發(fā)病率一直持上升的趨勢,每年以1%0的速度增長。由于卵巢位于盆腔的深處,缺少特異性的早期檢測指標和診斷手段,因此可能導致在發(fā)現(xiàn)卵巢癌時,其臨床分期已較晚或已發(fā)生轉(zhuǎn)移,所以卵巢癌的治療效果欠佳,預后比較差。近年來隨著腫瘤細胞減滅術(shù)和化療水平的不斷提高,卵巢癌患者的死亡率也逐漸有所改善,但因為卵巢癌患者被發(fā)現(xiàn)多以致晚期而又可能得不到及時有效的治療,其晚期卵巢癌患者的5年生存率不足30%,目前其死亡率高居婦科三大惡性腫瘤之榜首。卵巢癌發(fā)生及發(fā)展是一個多途徑、多階段、多機制的較為復雜的過程。雖然既往已有很多研究試圖來闡述卵巢癌致病因素,但卵巢癌生物學行為的分子機制仍不明確。越來越多的證據(jù)已表明:抑癌基因失活或原癌基因激活以及它們之間的相互作用失去平衡是卵巢癌發(fā)生發(fā)展的分子基礎(chǔ)。因此,研究和探索卵巢癌的發(fā)病機制,進一步明確卵巢癌分子生物細胞學的惡性行為,尋找更為有效的監(jiān)測卵巢癌分子生物學指標,研究與卵巢癌相關(guān)的重要基因及其介導的信號分子機制通路將是當前卵巢癌臨床治療所面臨和亟待解決的嚴峻課題。異位病毒整合位點1(ectopic viral integration site-1,Evil)基因是一個逆轉(zhuǎn)錄基因位點,其編碼的蛋白是帶有鋅指結(jié)構(gòu)的轉(zhuǎn)錄因子,定位于染色體3q26,他的基因長度是60000bp,其中外顯子16個,是SET/PR轉(zhuǎn)錄因子家族中的一員。Evil基因作為一個逆轉(zhuǎn)錄因子,通過特定的GACMGATA序列與目標基因的DNA相結(jié)合,從而發(fā)揮它對其下游基因表達的抑制或促進功能。最早發(fā)現(xiàn)Evil基因是一種與惡性髓系腫瘤關(guān)的致癌性轉(zhuǎn)錄因子,在哺乳動物生長發(fā)育過程中起著非常重要的作用。雖然過去大量研究已證實Evil基因與血液腫瘤的發(fā)生發(fā)展關(guān)系密切,隨著對Evil基因研究的深入,Evil基因在其他實體腫瘤領(lǐng)域內(nèi)的作用不斷被發(fā)現(xiàn)。新近研究表明,其在實體惡性腫瘤的浸潤和轉(zhuǎn)移中亦起著重要作用,例如,在乳腺癌、結(jié)腸癌、胰腺癌等腫瘤中發(fā)現(xiàn)Evil高表達,并且和患者的預后呈負相關(guān)。目前,國內(nèi)外尚無Evil與卵巢癌生物學行為及化療敏感性的研究報道。Evil在卵巢癌中的表達情況如何,是否參與卵巢癌的發(fā)生和發(fā)展,是否參與卵巢癌的化療耐藥等問題亟待解決。因此,本課題擬研究Evil在卵巢癌中的表達情況,研究調(diào)控其表達對卵巢癌細胞增殖、凋亡、侵襲、轉(zhuǎn)移、血管生成能力及化療藥物敏感性的影響,初步探討Evil對卵巢癌細胞生物學行為和化療敏感性影響的分子機制,以期為卵巢癌患者基因治療提供新的生物學靶目標。本研究分為以下三個部分:第一部分:Evil在卵巢癌中的表達及其意義;第二部分:抑制Evil表達對卵巢癌細胞增殖、凋亡及侵襲能力的影響及其分子機制的初步探討;第三部分:抑制Evil表達對卵巢癌細胞化療藥物敏感性的影響。第一部分:Evil在卵巢癌中的表達及其意義目的:通過檢測Evil在卵巢癌中的表達水平,結(jié)合患者臨床病例資料,分析其表達與卵巢癌患者臨床病理參數(shù)間的關(guān)系。方法:1.采用免疫組化和免疫熒光技術(shù)檢測上皮性卵巢癌組織、良性腫瘤組織,正常卵巢組織中Evil蛋白的表達。2.采用原位雜交技術(shù)檢測上皮性卵巢癌組織、良性腫瘤組織,正常卵巢組織中Evil mRNA的表達。3.采用Western blot檢測不同卵巢細胞內(nèi)Evil蛋白的表達。4.分析Evil表達與卵巢癌患者臨床病理參數(shù)間的關(guān)系。結(jié)果:1.在正常卵巢上皮組織內(nèi),Evil蛋白中無表達,其主要表達于在良性卵巢腫瘤和上皮性卵巢癌組織的細胞核上,Evil基因免疫組化陽性表達的結(jié)果是呈棕黃色顆粒,免疫熒光陽性表達的結(jié)果是呈綠色熒光顆粒。Evil蛋白在正常卵巢上皮組織中的陽性表達率為0%(0/20),著色強度0級;在良性卵巢組織中的陽性表達率為18%(4/22),著色強度1級;在上皮性卵巢癌中的陽性表達率為55%(30/55),著色強度為3級。與正常卵巢上皮組織、良性卵巢腫瘤組織相比,Evil蛋白的陽性表達率在上皮性卵巢癌組織內(nèi)明顯較高,存在顯著區(qū)別P0.05。Evil蛋白在Ⅰ～Ⅳ期上皮性卵巢癌標本組織中相對表達的陽性率分別21.41%,48.65%,65%和91.42%,各組之間比較均具有統(tǒng)計學差異(x 2=6.024,P0.05)。卵巢癌分期越晚,Evil蛋白表達的陽性率越高。2.在正常卵巢上皮組織中Evil mRNA無表達,Evil主要存在于在良性卵巢腫瘤和上皮性卵巢癌組織內(nèi)的細胞核中,陽性表達呈棕黃色顆粒。Evil mRNA在正常卵巢上皮組織中的陽性表達率為0%(0/20),著色強度0級;在良性卵巢組織中的陽性表達率為14%(3/22),著色強度1級;在上皮性卵巢癌中的陽性表達率為47%(26/55),著色強度為2級。相比正常卵巢上皮組織,良性卵巢腫瘤和上皮性卵巢癌組織Evil mRNA的陽性表達率與其著色程度明顯較高,且區(qū)別顯著,P0.05。3.Western blot結(jié)果顯示,與正常人卵巢細胞HOSEpiC相比,卵巢癌細胞OVACAR3,SKOV3,A2780,ES2,Caov3 和 COC1,Evil 蛋白的相對表達量分別為:0.32±0.01,0.53± 0.02,0.49 ±0.01,0.51 ±0.01,0.31 ±0.01 和 0.32±0.02,卵巢癌細胞的Evil蛋白表達量與正常卵巢細胞相比,具有統(tǒng)計學差異。4.卵巢上皮癌組織中Evil蛋白和mRNA的異常表達與患者年齡、病理類型之間的差異無統(tǒng)計學意義(P0.05),但其表達與臨床分期、組織分化、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)(P0.05)。臨床分期越晚、組織分化越差和伴隨淋巴結(jié)遠處轉(zhuǎn)移,卵巢癌組織Evil蛋白的異常表達就越明顯。小結(jié):1、與正常卵巢組織和良性卵巢腫瘤組織相比,Evil蛋白和mRNA在上皮性卵巢癌組織中高表達,其主要表達于在胞核上。2、與正常卵巢上皮細胞HOSEpiC相比,Evil蛋白在卵巢癌細胞內(nèi)呈現(xiàn)高表達。3、上皮性卵巢癌患者中Evil蛋白的表達與臨床分期、組織分化及是否存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān),臨床分期越晚、組織分化越差和伴隨淋巴結(jié)遠處轉(zhuǎn)移,卵巢癌組織Evil蛋白的異常表達就越明顯。第二部分:抑制Evil表達對卵巢癌細胞增殖、凋亡及侵襲能力的影響及其分子機制的初步探討目的:探討抑制Evil表達對卵巢癌細胞增殖、凋亡、侵襲、轉(zhuǎn)移及血管生成能力的影響,初步探討Evil參與卵巢癌細胞生物學行為的分子機制。方法:1.應用GV159慢病毒載體,在OVCAR3、SKOV3細胞中構(gòu)建干擾Evil表達的穩(wěn)定細胞株,熒光定量PCR方法驗證穩(wěn)定細胞株是否構(gòu)建成功。2.運用CCK-8增殖實驗檢測干擾Evil表達后對卵巢癌細胞增殖能力的影響。3.運用平板克隆形成實驗檢測干擾Evil后表達對卵巢癌細胞克隆形成能力的影響;4.采用Western blot實驗檢測與增殖相關(guān)的調(diào)控因子cyclin Dl,CDK4的變化情況;5.運用Transwell小室遷移實驗檢測干擾Evil表達后對卵巢癌細胞遷移能力的影響;6.運用Matrigel膠侵襲實驗檢測干擾Evil表達后對卵巢癌細胞侵襲能力的影響;7.運用小管形成實驗檢測干擾Evil表達后對卵巢癌細胞新生血管形成能力的影響;8.采用Western blot實驗檢測與卵巢癌細胞的侵襲相關(guān)因子AKT、GSK3 β、Snail的變化9.運用Annexin-V/PI流式細胞儀檢測干擾Evil表達對卵巢癌細胞凋亡能力的影響;采用Western blot實驗檢測干擾Evil表達對卵巢癌細胞的相關(guān)凋亡蛋白的影響10.建立卵巢癌裸鼠移植瘤模型,檢測干擾Evil表達后對裸鼠移植瘤增殖的影響;運用免疫組織化學方法檢測移植瘤組織中MVD密度情況,分析體內(nèi)調(diào)控Evil表達對卵巢癌細胞增殖和侵襲能力的影響。結(jié)果:1.為進一步研究Evil對卵巢癌細胞系生物學行為的影響,根據(jù)Evil在卵巢癌細胞系中的表達水平,我們用Evil呈現(xiàn)高表達的OVCAR3、SKOV3細胞構(gòu)建干擾Evil表達慢病毒的穩(wěn)定細胞株。表達載體以綠色熒光蛋白EGFP作為標記,應用實時熒光定量PCR方法驗證穩(wěn)定株是否構(gòu)建成功。實驗結(jié)果顯示,OVCAR3細胞中,與轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒載體的對照組細胞(OVCAR3-anti-NC)細胞相比較,轉(zhuǎn)染干擾Evil表達慢病毒質(zhì)粒載體的實驗組細胞(OVCAR3-anti-Evil)中Evil mRNA水平顯著下調(diào),差異有統(tǒng)計學意義;SKOV3細胞中,與轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒載體的對照組細胞(SKOV3-anti-NC)細胞相比較,轉(zhuǎn)染干擾Evil表達慢病毒質(zhì)粒載體的實驗組細胞(SKOV3-anti-Evil)中Evil mRNA水平顯著下調(diào),差異有統(tǒng)計學意義。本研究結(jié)果顯示,干擾Evil表達卵巢癌穩(wěn)定細胞株構(gòu)建成功。2.我們采用CCK-8法檢測干擾Evil表達對卵巢癌細胞增殖能力的影響。在SKOV3、OVCAR3細胞干擾Evil表達并設(shè)置空白對照Blank組和陰性對照NC組,在轉(zhuǎn)染后1d,2d,3d,4d,5d和6d測定細胞生存活力。CCK-8增殖實驗結(jié)果顯示,轉(zhuǎn)染anti-Evil的細胞在2天開始增殖活性顯著低于空白Blank組細胞和陰性NC轉(zhuǎn)染細胞(p0.01),3d,4d,5d和6d其活性降低程度更為顯著(p0.001)。3.采用平板克隆形成實驗檢測干擾Evil表達對卵巢癌細胞克隆形成能力的影響。平板克隆形成實驗結(jié)果顯示,與OVCAR3-Blank組相比,OVCAR3-anti-NC組細胞的克隆形成能力無統(tǒng)計學差異(141.37±2.449%vs 135.19±1.539%,P 0.05);與 OVCAR3-Blank、OVCAR3-anti-NC 組對照細胞相比較,干擾 Evil表達慢病毒后,OVCAR3-anti-Evil組細胞的克隆形成能力(32.41±1.579%)顯著抑制,差異有統(tǒng)計學意義(P0.001)。與SKOV3-Blank組相比,SKOV3-anti-NC組細胞的克隆形成能力無統(tǒng)計學差異(126.45±1.454%vs 117.09±2.872%,P0.05);與SKOV3-Blank、SKOV3-anti-NC組對照細胞相比較,干擾Evil表達慢病毒后,SKOV3-anti-Evil組細胞的克隆形成能力(49.21±2.953%)顯著抑制,差異有統(tǒng)計學意義(P0.001)。4.采用Western blot實驗檢測與增殖相關(guān)的調(diào)控因子cyclin Dl,CDK4的變化情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn):在OVCAR3和SKOV3細胞株中,敲除Evil表達之后,降低了磷酸化AKT即P-AKT的表達,同時降低了 cyclinD1和CDK4蛋白的表達水平。5.采用Transwell小室遷移實驗檢測干擾Evil表達對卵巢癌細胞遷移能力的影響;采用Matrigel膠侵襲實驗檢測干擾Evil表達對卵巢癌細胞侵襲能力的影響。Transwell小室遷移實驗結(jié)果顯示,無血清培養(yǎng)24小時后OVCAR3-Blank、OVCAR3-anti-NC、OVCAR3-anti-Evil、SKOV3-Blank、SKOV3-anti-NC、SKOV3-anti-Evil組細胞由上室面穿出至下室面的細胞數(shù)分別為84.25±0.164、81.91±0.334、20.43±0.413、86.95±0.381、81.24±0.328、35.53±0.129。與 OVCAR3-anti-NC組細胞相比較,干擾Evil表達的OVCAR3-anti-Evil組細胞遷移能力顯著降低,差異有統(tǒng)計學意義(P=0.016)；與SKOV3-anti-NC組細胞相比較,干擾Evil表達的SKOV3-anti-Evil組細胞遷移能力顯著降低,差異有統(tǒng)計學意義(P=0.0015)。6.Matrigel膠侵襲實驗結(jié)果顯示,無血清培養(yǎng)48小時后OVCAR3-Blank、OVCAR3-anti-NC、OVCAR3-anti-Evil、SKOV3-Blank、SKOV3-anti-NC、SKOV3-anti-Evil組細胞由上室面穿出至下室面的細胞數(shù)分別為76.23±0.436、73.36±0.131、23.41 ±0.428、89.04±0.549、84.49±0.249、19.22±0.252,與 OVCAR3-anti-NC組細胞相比較,干擾Evil表達的OVCAR3-anti-Evil組細胞侵襲能力顯著降低,差異有統(tǒng)計學意義(P=0.013)。與SKOV3-anti-NC組細胞相比較,SKOV3-anti-Evil組細胞的侵襲能力顯著降低,差異有統(tǒng)計學意義(P=0.00018)。7.Evil通過AKT/GSK3β/Snail促進卵巢癌細胞的侵襲。上述實驗已驗證,Evil可以提高p-AKT蛋白的水平,進而促進AKT的活化。此次Westernblot實驗證實:在OVCAR3和SKOV3細胞株中,敲除Evil表達之后,p-AKT蛋白的水平下降,p-AKT下游的的p-GSK3β表達也下降,而總的GSK3β則無明顯變化。同時,Smail蛋白的表達水平也出現(xiàn)了下調(diào),與EMT相關(guān)的E-cadherin蛋白表達水平升高,Vimentin蛋白表達下降。8.我們采用小管形成實驗檢測干擾Evil表達對卵巢癌細胞新生血管形成能力的影響。收集 OVCAR3-Blank、OVCAR3-anti-NC、OVCAR3-anti-Evil、SKOV3-Blank、SKOV3-anti-NC、SKOV3-anti-Evil 組細胞的培養(yǎng)上清,消化 HUVEC 細胞后,各實驗組細胞培養(yǎng)上清重懸HUVEC細胞,培養(yǎng)24小時后觀察HUVEC細胞小管管腔形成情況。實驗結(jié)果顯示,無論是在OVCAR3細胞還是SKOV3細胞里,Blank組與anti-NC組HUVEC細胞的小管管腔形成能力相比,兩組之間無統(tǒng)計學差異(P0.05);與 OVCAR3-Blank(40.86±0.261)、OVCAR3-anti-NC(38.57±0.250)組相比較,干擾 Evil 表達的 OVCAR3-anti-Evil(20.73±0.230)組HUVEC細胞的小管管腔形成能力顯著抑制,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);與 SKOV3-Blank(32.02±0.251)、SKOV3-anti-NC(29.12±0.460)組相比較,干擾Evil表達的SKOV3-anti-Evil(13.27±0.158)組HUVEC細胞小管管腔形成能力受到抑制更為顯著,兩組間相比較,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。9.AnnexinV/PI 染色法實驗結(jié)果顯示,OVCAR3-Blank、OVCAR3-anti-NC、OVCAR3-anti-Evil 組細胞的凋亡率分別為(6.18±0.022)%、(6.32±0.035)%和(15.59±0.048)%,OVCAR3-Blank 和 OVCAR3-anti-NC 組細胞相比較,細胞的凋亡率無明顯差異(P0.05)。干擾Evil表達OVCAR3-anti-Evil組細胞的凋亡率與其兩組對照組相比明顯升高,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);SKOV3-Blank、SKOV3-anti-NC、SKOV3-anti-Evil 組細胞的凋亡率分別為(7.08±0.041)%、(7.30±0.055)%和(15.58±0.068)%,SKOV3-Blank 和 SKOV3-anti-NC 組細胞相比較細胞的凋亡率無明顯差異(P0.05)。干擾Evil表達SKOV3-anti-Evil組細胞的凋亡率與其兩組對照組相比明顯升高,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。Western blot實驗證實:在OVCAR3和SKOV3細胞株中,敲除Evil表達之后,Bc12蛋白表達下調(diào),cleaved-Caspas3蛋白表達上調(diào)。提示下調(diào)Evil表達促進了卵巢癌細胞的凋亡。本實驗結(jié)果進一步說明Evil抑制腫瘤細胞的凋亡,進而誘導卵巢癌細胞的增殖能力。10.我們采用BALB/C-nu雌性裸鼠建立卵巢癌細胞裸鼠皮下移植瘤實驗模型,進行干擾Evil表達對卵巢癌增殖、侵襲影響的體內(nèi)實驗研究。裸鼠皮下移植瘤實驗結(jié)果顯示,干擾Evil表達的OVCAR3-anti-Evil組裸鼠的腫瘤體積顯著小于OVCAR3-Blank、OVCAR3-anti-NC兩個對照組的裸鼠,隨飼養(yǎng)天數(shù)增加,裸鼠移植瘤體積差異逐漸增大,實驗組分別與兩個對照組進行組間比較,差異均有統(tǒng)計學意義(P0.05)。裸鼠移植瘤組織免疫組化檢測腫瘤微血管密度,結(jié)果顯示,裸鼠移植瘤組織中CD34內(nèi)皮細胞標記染色呈棕黃色,定位于血管內(nèi)皮細胞的胞膜,與OVCAR3-anti-NC組裸鼠相比較,干擾Evil表達OVCAR3-anti-Evil組裸鼠腫瘤組織中MVD平均值顯著降低,兩組間相比較,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。本研究體內(nèi)實驗結(jié)果顯示,干擾Evil表達可減少腫瘤組織血管生成,促進組織凋亡壞死發(fā)生,抑制腫瘤的增殖和侵襲。小結(jié):1.體外及體內(nèi)實驗證實干擾Evil表達可抑制卵巢癌細胞的增殖、侵襲及轉(zhuǎn)移,促進細胞的凋亡。2.Evil在卵巢癌細胞中的生物學效應可能是通過對PI3K-AKT信號通路的活化來實現(xiàn)的。第三部分:抑制Evil表達對卵巢癌細胞化療藥物敏感性的影響目的:探討干擾Evil表達對卵巢癌化療藥物敏感性有無影響及其對耐藥機制的初步探討。方法:1.應用GV159慢病毒載體,在OVCAR3、SKOV3細胞中構(gòu)建干擾Evil表達的穩(wěn)定細胞株2.通過 CCK-8 法檢測 OVCAR3-Blank、OVCAR3-anti-NC、OVCAR3-anti-Evil 三組細胞株及 SKOV3-Blank、SKOV3-ainti-NC、SKOV3-anti-Evil 三組細胞株生長抑制率并計算IC50。3.軟瓊脂培養(yǎng)克隆試驗檢測干擾Evil表達后卵巢癌細胞在DDP中的克隆抑制率。4.利用Western blot檢測Evil表達下調(diào)后不同細胞株多藥耐藥蛋白P-gp和MRP1的表達變化。5.利用Western blot檢測抑制Evil表達后不同細胞株DNA損傷修復酶MGMT、MMR的改變。結(jié)果:1.通過CCK-8法檢測腫瘤細胞株生長抑制率并計算IC50,我們發(fā)現(xiàn)在OVCAR3和SKOV3細胞株單獨使用DDP的耐藥指數(shù)是28.73±0.75μg/ml和27.92±1.07μg/ml,同時OVCAR3和SKOV3空載體組與DDP聯(lián)合作用的耐藥指數(shù)分別是 27.49±0.52μg/ml 和 26.32±0.63μg/ml,然而 OVCAR3 和 SKOV3 細胞的干擾Evil表達組與DDP聯(lián)合作用的耐藥指數(shù)分別是13.67±1.08μg/ml和15.86±1.31μg/ml,這表明在卵巢癌細胞株OVCAR3和SKOV3中抑制Evil表達之后,卵巢癌細胞對DDP的敏感性明顯升高,耐藥性明顯降低(P0.05)。2.分別取生長狀態(tài)尚可的 OVCAR3-Blank、OVCAR3-anti-NC、OVCAR3-anti-Evil 三組細胞株及 SKOV3-Blank、SKOV3-anti-NC、SKOV3-anti-Evil 三組細胞株培養(yǎng)克隆。實驗結(jié)果如圖所示,與Blank對照組及NC空白組相比,Evil干擾組的SKOV3和OVCAR3細胞在DDP中的克隆抑制率明顯增高(P0.05),說明干擾Evil表達加上DDP可以明顯降低卵巢癌細胞的克隆能力,進一步證實了 Evil表達下調(diào)的卵巢癌細胞對DDP藥物敏感性顯著增高。3.為進一步探討Evil表達對卵巢癌細胞耐藥性影響的機制,我們利用Western blot檢測Evil表達下調(diào)后不同細胞株多藥耐藥蛋白P-gp和MRP1的表達變化。結(jié)果如圖所示,我們發(fā)現(xiàn)抑制Evil后,SKOV3和OVCAR3細胞株中P-gp和MRP1的表達明顯下降(P0.05),由此我們考慮Evil可能是通過調(diào)節(jié)多藥耐藥蛋白來影響卵巢癌順鉑耐藥性的。4.上一步實驗發(fā)現(xiàn)Evil表達對卵巢癌細胞DDP敏感性的影響并不是通過多藥耐藥蛋白來調(diào)控的,在這部分我們繼續(xù)用Western blot檢測抑制Evil表達后不同細胞株DNA損傷修復酶MGMT、MMR的改變,以探求可能調(diào)控的另外一種機制。結(jié)果如圖所示,我們發(fā)現(xiàn)Evil表達下調(diào)后,SKOV3和OVCAR3細胞株中MGMT、MMR的蛋白均顯著下降,我們推測Evil可能是通過影響DNA損傷修復酶的變化來調(diào)節(jié)卵巢癌細胞DDP耐藥性。小結(jié):1.干擾Evil表達可以提高卵巢癌細胞對DDP的敏感性。2.Evil可能是通過多藥耐藥蛋白及DNA損傷修復酶的作用機制來影響卵巢癌細胞化療藥物敏感性。結(jié)論:1.Evil異常表達與卵巢癌發(fā)生發(fā)展關(guān)系密切,可能參與了卵巢癌的惡性轉(zhuǎn)化;2.Evil可能通過對PI3K-AKT信號通路的活化進而促進卵巢癌細胞的增殖、侵襲及遷移,抑制細胞的凋亡；3.Evil可能在多藥耐藥蛋白及DNA損傷修復酶共同作用下參與了卵巢癌細胞化療耐藥,干擾Evil表達可有效逆轉(zhuǎn)卵巢癌順鉑耐藥;4.Evil基因有作為卵巢癌基因治療靶點的潛在價值。
【學位授予單位】：鄭州大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R737.31
【圖文】：

圖１．３邋Ｅｖｉｌ蛋白在不同卵巢組織的免疫組化結(jié)果的陽性率逡逑４．２邋Ｅｖｉｌ蛋白在不同期別的上皮性卵巢癌組織中的表達逡逑Ｅｖｉｌ蛋白在丨？丨Ｖ期上皮性卵巢癌標本組織中相對表達的陽性率分別是逡逑２１．４１％，４８．６５％，邋６５％和９１．４２％，各組之間比較均具有統(tǒng)計學差異（ｘ２＝６．０２４，逡逑ＩＩ逡逑

逡逑ＦＣ０．０５）。卵巢癌分期越晚，Ｅｖｉｌ蛋白表達的陽性率越高（圖１．４）。逡逑１００－１邐丁逡逑＂ｋｉｌｌ逡逑Ｉ期邋ＩＩ期邋ｍ朗邋ｉｖ期逡逑圖１．４邋Ｅｖｉｌ蛋白在上皮性卵巢癌組織（不同期別）的陽性率逡逑４．３在不同卵巢癌組織中Ｅｖｉｌ邋ｍＲＮＡ的表達逡逑在正常卵巢上皮組織中Ｅｖｉｌ邋ｍＲＮＡ無表達，Ｅｖｉｌ主要存在于在良性卵巢逡逑腫瘤和上皮性卵巢癌組織內(nèi)的細胞核中，陽性表達呈棕黃色顆粒。Ｅｖｉｌ邋ｍＲＮＡ逡逑在正常卵巢上皮組織中的陽性表達率為０％邋（０／２０），著色強度０級；在良性卵逡逑巢組織中的陽性表達率為１４％邋（３／２２），著色強度１級；在上皮性卵巢癌中的陽逡逑性表達率為４７％邋（２６／５５），著色強度為２級。相比正常卵巢上皮組織和良性卵逡逑巢腫瘤，上皮性卵巢癌組織Ｅｖｉｌ邋ｍＲＮＡ的陽性表達率與其著色程度明顯較高，逡逑且區(qū)別顯著，Ｐ＜0．0５邋（圖１．５）。逡逑１２逡逑

＾邋＜／逡逑奪０邐，邐ｏｆ逡逑圖１．５邋Ｅｖｉｌ邋ｎｉＲＮＡ在各卵巢組織的原位雜交結(jié)果逡逑４．４邋Ｗｅｓｔｅｒｎ邋ｂｌｏｔ檢測不同卵巢細胞內(nèi)Ｅｖｉｌ蛋白的表達結(jié)果逡逑Ｗｅｓｔｅｒｎ邋ｂｌｏｔ結(jié)果顯示，與正常卵巢細胞ＨＯＳＥｐｉＣ相比，卵巢癌細胞逡逑ＯＶＡＣＡＲ３，邋ＳＫＯＶ３，邋Ａ２７８０，邋ＥＳ２，邋Ｃａｏｖ３邋和邋ＣＯＣ１，邋Ｅｖｉｌ邋蛋白的相對表達量逡逑分別為：０．３２±０．０１，０．５３±０．０２，０．４９士０．０１，邋０．５１邋±０．０１，０．３１邋土０？０丨和邋０．３２逡逑±０．０２，卵巢癌細胞的Ｅｖｉｌ蛋白表達量與正常卵巢細胞相比，具有統(tǒng)計學差異逡逑（圖邋１．６）。逡逑１３逡逑

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4 ;發(fā)現(xiàn)休眠卵巢癌細胞存活機制[J];生命世界;2009年02期

5 ;美發(fā)現(xiàn)休眠卵巢癌細胞存活機制[J];醫(yī)學研究雜志;2009年04期

6 張晶晶;王波;;卵巢癌細胞與腹膜間皮細胞相互作用對卵巢癌細胞運動及侵襲的影響[J];實用婦產(chǎn)科雜志;2006年04期

7 余志英,周霞平,杜靜,張金超,羅軍,柯瑋琳;紫杉醇誘導卵巢癌細胞凋亡及基因調(diào)控的研究[J];華中科技大學學報(醫(yī)學版);2005年03期

8 仲任,黃瑞濱,宋善俊;組織因子途徑抑制物2對卵巢癌細胞遷徙和浸潤能力的影響(英文)[J];The Chinese-German Journal of Clinical Oncology;2005年01期

9 余志英,杜靜,張金超,李麗文,初虹,柯瑋琳;紫杉醇對卵巢癌細胞端粒酶活性影響的研究[J];實用腫瘤學雜志;2005年02期

10 張頤,尚海,董武,趙楊,孫黎光;絲裂原活化蛋白激酶激酶1抑制劑PD98059對卵巢癌細胞生長的影響[J];中華婦產(chǎn)科雜志;2004年06期

相關(guān)會議論文 前10條

1 王文霞;孔北華;李鵬;曲迅;;蛋白酶體抑制劑對卵巢癌細胞的作用機制[A];第八次全國婦產(chǎn)科學學術(shù)會議論文匯編[C];2004年

2 張向?qū)?李曉翠;馬道新;;67kDaLN-R反義寡核酸對卵巢癌細胞生物學行為影響[A];第八次全國婦產(chǎn)科學學術(shù)會議論文匯編[C];2004年

3 唐東平;陳心秋;唐凱;張潔清;賀海平;;11種化療藥物對卵巢癌細胞的抑制作用及其有核細胞細胞毒性研究[A];第四屆中國腫瘤學術(shù)大會暨第五屆海峽兩岸腫瘤學術(shù)會議論文集[C];2006年

4 吳卉娟;翁丹卉;邢輝;宋曉紅;盧運萍;王世宣;馬丁;;PTEN抑癌基因逆轉(zhuǎn)卵巢癌細胞的多藥耐藥及相關(guān)機制[A];中華醫(yī)學會第一屆全球華人婦產(chǎn)科學術(shù)大會暨第三次全國婦產(chǎn)科中青年醫(yī)師學術(shù)會議論文匯編[C];2007年

5 許沈華;牟瀚舟;顧琳慧;朱赤紅;劉祥麟;;高轉(zhuǎn)移卵巢癌細胞差異表達基因在染色體定位及其功能[A];浙江省生理科學會2006年學術(shù)年會論文匯編[C];2006年

6 趙志偉;吳江;姜光瑤;呂鑫;郭鵬;;剪應力誘導卵巢癌細胞上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化的研究[A];第十一屆全國生物力學學術(shù)會議暨第十三屆全國生物流變學學術(shù)會議會議論文摘要匯編[C];2015年

7 劉娟娟;林蓓;趙越;李飛飛;郝瑩瑩;張帆;朱連成;張淑蘭;;巖藻糖基化抗原對卵巢癌細胞生物學行為的影響[A];東北三省第四屆婦產(chǎn)科學術(shù)會議論文匯編[C];2008年

8 袁令芹;盛修貴;;谷氨酰胺對卵巢癌細胞增殖作用影響的研究[A];第八屆中國腫瘤學術(shù)大會暨第十三屆海峽兩岸腫瘤學術(shù)會議論文匯編[C];2014年

9 胡曉霞;李力;黎丹戎;張瑋;唐步堅;;MMP-9反義寡核苷酸對卵巢癌細胞體外侵襲粘附的抑制作用[A];中華醫(yī)學會第九次全國婦科腫瘤學術(shù)會議論文匯編[C];2006年

10 梁念慈;何太平;覃燕梅;吳科鋒;;抗癌草藥半邊旗有效成分對卵巢癌細胞基因表達的影響[A];第十屆全國生化與分子藥理學術(shù)會議論文摘要匯編[C];2007年

相關(guān)重要報紙文章 前9條

1 邰 舉;韓國醫(yī)學專家發(fā)現(xiàn)精液能夠殺死卵巢癌細胞[N];中國中醫(yī)藥報;2003年

2 邰舉;精液能夠殺死卵巢癌細胞[N];科技日報;2003年

3 靖九江;4-HPR有望用于治療卵巢癌[N];中國醫(yī)藥報;2005年

4 記者 任海軍;卵巢癌為何常常復活？生死命懸一基因[N];新華每日電訊;2009年

5 任海軍;美找到卵巢癌易復發(fā)原因[N];大眾衛(wèi)生報;2009年

6 本報記者 王燕寧邋通訊員 陳亞新 屈騫;惡性腫瘤到底能不能預防？[N];科技日報;2008年

7 曉明;美研究發(fā)現(xiàn)應對耐藥新方法[N];中國醫(yī)藥報;2008年

8 胡德榮;發(fā)現(xiàn)卵巢癌生長新機制[N];健康報;2006年

9 黎生;攝入姜和胡椒粉可防癌抗癌[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2007年

相關(guān)博士學位論文 前10條

1 孟瑩;MARCH1促進上皮性卵巢癌惡性生物學行為及其機制的研究[D];重慶醫(yī)科大學;2018年

2 潘海波;茶黃素的UPLC分析及其對人卵巢癌細胞抑制作用和機制的研究[D];浙江大學;2018年

3 李霞;Evi1表達對卵巢癌細胞生物學行為及化療敏感性影響的初步研究[D];鄭州大學;2018年

4 袁犁;miR-124通過靶向PDCD6抑制卵巢癌細胞及誘導凋亡機制的研究[D];重慶醫(yī)科大學;2016年

5 劉嬌陽;Claudin-6對卵巢癌細胞SKOV3生物學行為影響的研究[D];南方醫(yī)科大學;2018年

6 金愛紅;抑制miR-23a表達增強卵巢癌細胞順鉑敏感性的分子機制研究[D];安徽醫(yī)科大學;2016年

7 余雪琛;SOS1/EPS8/ABI1在卵巢癌細胞轉(zhuǎn)移起始中的作用及其靶向短肽抑制劑抗轉(zhuǎn)移活性的研究[D];武漢大學;2015年

8 王燕;糖皮質(zhì)激素對卵巢癌細胞遷移和侵襲的影響及其機制研究[D];第二軍醫(yī)大學;2016年

9 龍啟芳;腫瘤干細胞靶向殺傷病毒表達系統(tǒng)對卵巢癌細胞生物學性狀影響的研究[D];南京醫(yī)科大學;2017年

10 王思;營養(yǎng)饑餓增加卵巢癌細胞對BH3模擬物凋亡敏感性及機制研究[D];吉林大學;2017年

相關(guān)碩士學位論文 前10條

1 黃翔;白花地膽草單體EM-12通過激活內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激介導的內(nèi)源性凋亡通路誘導卵巢癌細胞凋亡[D];暨南大學;2018年

2 周亞;NID1增強卵巢癌細胞干細胞特性和耐藥性的研究[D];重慶醫(yī)科大學;2018年

3 郭春芳;RhoA與卵巢癌耐藥的相關(guān)性研究[D];中國醫(yī)科大學;2018年

4 楊欣;miR-372抑制卵巢癌細胞EMT、侵襲遷徙及可能機制[D];中國醫(yī)科大學;2018年

5 趙洪芹;喜樹堿結(jié)構(gòu)類似物FL118對人卵巢癌的抑制作用及機制研究[D];青島大學;2018年

6 劉馨;HA、CD44信號途徑中Nanog基因和STAT3對卵巢癌細胞生長的影響[D];青島大學;2018年

7 侯小滿;NOTCH1調(diào)控腫瘤干細胞相關(guān)基因表達影響卵巢癌細胞增殖和侵襲的研究[D];山東大學;2018年

8 張靜靜;B7-H3分子通過Jak2-Stat3通路調(diào)控卵巢癌細胞生物行為及其機制的研究[D];山東大學;2018年

9 劉芬芬;人表皮生長因子受體2與β-catenin/TCF7L2信號相互作用促進卵巢癌細胞轉(zhuǎn)移[D];安徽醫(yī)科大學;2018年

10 阮昕;乳源免疫調(diào)節(jié)肽通過泛素—蛋白酶體途徑抑制卵巢癌耐藥性及其機制研究[D];安徽醫(yī)科大學;2018年

本文編號：2784544