【摘要】：目的:通過建立孕晚期睡眠剝奪(MSD)動物模型,取其子代作為研究對象,觀察孕晚期睡眠剝奪對子代的學習記憶和認知功能的影響,并進一步檢測孕晚期睡眠剝奪對子代大鼠海馬部位AMPAR表達和CA3-CA1通路突觸可塑性的影響。最后通過腹腔注射抑制AMPAR內(nèi)吞的合成多肽Tat-Glu A23y,觀察其子代認知功能和海馬突觸可塑性的影響。這一研究旨在為孕期睡眠剝奪帶來的子代認知功能障礙性疾病的治療,及臨床開發(fā)相關(guān)新藥提供理論依據(jù)。方法:將成年Sprague-Dawley孕鼠(gestational day15-21),隨機分為兩組,分別為正常對照組和妊娠晚期睡眠剝奪組,通過使用輕輕觸摸法對妊娠晚期睡眠剝奪組孕鼠進行為期7天(gestational day 15-21),每天6h的睡眠剝奪(gestational day 15-21),待子代出生,成長至35日齡(PND35),將對照組與睡眠剝奪組再分別隨機分為三個亞組,進行為期一周,每天一次藥物注射,分別是:Control組(生理鹽水處理),Control+Glu A23y組(Tat-Glu A23y多肽處理),Control+scr-Glu A23y組(scrambled Tat-Glu A23y多肽處理),MSD組(孕晚期睡眠剝奪生理鹽水處理),MSD+Glu A23y組(孕晚期睡眠剝奪Tat-Glu A23y多肽處理)和MSD+scr-Glu A23y組(孕晚期睡眠剝奪scrambled Tat-Glu A23y多肽處理)。在PND42-56,通過western檢測海馬突觸蛋白中AMPAR的表達變化;通過在體電生理檢測海馬CA3-CA1通路LTP和LTD的變化;通過行為學檢測子代大鼠焦慮樣行為、抑郁樣行為和空間學習記憶能力。結(jié)果:Western blot結(jié)果:與對照組相比,MSD組的AMPAR Glu A2亞基在突觸后膜上的表達明顯減少,Tat-Glu A23y多肽處理使其表達回到正常水平。睡眠剝奪對Glu A1和Glu A3亞基的表達,沒有影響。在體電生理結(jié)果:MSD組的海馬LTP幅度較對照組明顯降低,LTD的幅度明顯增加;Tat-Glu A23y多肽處理可使LTP和LTD回到對照水平。行為學結(jié)果:在高架十字迷宮實驗中,MSD組大鼠進入開放臂的時間和次數(shù)明顯少于對照組,而MSD+Glu A23y組進入開放臂的時間和次數(shù)與對照組相比無明顯差異。在強迫游泳實驗中,MSD組大鼠的不動潛伏期較對照組相比減少,掙扎時間較對照組相比也減少。而MSD+Glu A23y組的不動潛伏期與掙扎時間與對照組相比均無明顯差異。在巴恩斯迷宮實驗學習期間,MSD組大鼠找到目標洞口所花時間明顯長于對照組,而MSD+Glu A23y組較對照組無明顯差異;在記憶提取中,MSD組大鼠找到目標洞口的正確率明顯低于對照組,而MSD+Glu A23y組較對照組無明顯差異。結(jié)論:孕晚期睡眠剝奪導(dǎo)致子代海馬突觸部位AMPAR的Glu A2亞基表達減少,從而損傷海馬LTP,易化海馬LTD,導(dǎo)致情感和認知功能障礙;抑制AMPAR內(nèi)吞的Tat-Glu A23y多肽可緩解孕晚期睡眠剝奪對子代突觸和認知功能的損傷。
【學位授予單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R715.3
【圖文】：

圖 1 Western blot 實驗結(jié)果：A-C 海馬突觸蛋白，D-E 海馬總蛋白Fig.1 The results of Western blot:A-C Hippocampal synaptic protein,D-E Hippocampaltotal protein2.2 孕期睡眠剝奪抑制 AMPAR 內(nèi)吞損傷子代大鼠海馬 LTP，易化 LTD。在過去的研究中我們發(fā)現(xiàn)，孕期不同階段的睡眠剝奪對子代大鼠的海馬 CA1區(qū)的 LTP，其中孕晚期睡眠剝奪造成的損傷最為明顯，因此接下來我們檢測了孕期睡眠剝奪對子代大鼠的突觸可塑性的影響。其結(jié)果如圖，我們發(fā)現(xiàn)，孕晚期睡眠剝奪組的子代大鼠 CA1 區(qū) LTP 與 Control 組(Control 組:n= 6,133.4±4.0% p< 0.01vs.基線;MSD 組:n= 6,107.3±5.8%,p>0.05vs.基線,p<0.01vs.Control 組;Fig2A 和 B)相比明顯有所損傷。已有的很多文獻報到 LFS 典型的方法，1Hz 的 900 個串刺激在成年大鼠不會誘導(dǎo)出 LTD，與這些結(jié)果一致，LFS 在 Control 組沒有誘導(dǎo)出 LTD，

圖 2 在體電生理實驗結(jié)果：孕期睡眠剝奪損傷子代海馬 CA1 區(qū) LTP 并易化 LTDFig.2 MSD impairs LTP and facilitates LTD in the hippocampal CA1 area of the offspring2.3 抑制 AMPAR 內(nèi)吞可改善睡眠剝奪引起的子代學習記憶功能損傷已經(jīng)有很多文獻報到海馬突觸可塑性包括LTP和LTD在學習記憶功能發(fā)揮著重要作用，接著我們想確認在孕期睡眠剝奪所產(chǎn)子代中，損傷的 LTP 和異化的 LTD是否可以引起孕期睡眠剝奪的子代大鼠行為學上的改變，同時應(yīng)用 GluA23y是否可以阻止這種損傷帶來的學習記憶功能下降。我們用巴恩斯迷宮實驗檢測大鼠的學習記憶功能，如圖所示，在孕晚期睡眠剝奪所產(chǎn)子代中其所花的尋找目標洞口的時間明顯長于對照組 (Fig3A;MSD 組:n = 18,訓(xùn)練第一天 4 個 trial 時間分別為146.5±12.1 s,132.1±16.2s,113.8±15.8 ， 59.0±14.6s; 第 二 天 4 個 trial 時 間 分 別56.5±14.6s,38.0±9.7s,32.4±8.9s，28.8±5.8s,p<0.05vs.Control 組; Control 組:n= 17,訓(xùn)

24圖 3 Barnes 迷宮實驗結(jié)果：A 大鼠平均逃避潛伏期 B 找到目標洞口的正確率Fig.3 The results of Barnes maze test:A Escape latency B Correct ratio抑制 AMPAR 內(nèi)吞可改善睡眠剝奪引起的子代焦慮和抑郁行為我們以前的研究中發(fā)現(xiàn)，孕期睡眠剝奪可以增加子代大鼠的焦慮和抑郁

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本文編號：2778007