【摘要】：目的評估哺乳動物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)在妊娠期糖尿病(gestational diabetes mellitus,GDM)和正常孕婦血清的表達(dá)差異。并進(jìn)一步研究mTOR及其下游核糖體蛋白S6激酶(ribosomal protein S6kinase,p70S6K)、真核起始因子4E結(jié)合蛋白(eukaryotic initiation factor4E-binding protein 1,p-4EBP1)在妊娠期糖尿病和正常孕婦胎盤及脂肪的表達(dá)水平差異,以探討mTOR是否參與妊娠期糖尿病的發(fā)病進(jìn)程。方法(1)收集2016年6月至2017年10月在中國醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院門診就診孕婦的血清樣本,根據(jù)孕24-32周OGTT檢測結(jié)果分為妊娠期糖尿病組和正常對照組,ELISA檢測血清樣本mTOR蛋白表達(dá)量。(2)收集2017年6月至2018年6月在中國醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院行剖宮產(chǎn)手術(shù)的8例妊娠期糖尿病患者和8例正常孕婦的胎盤組織和腹部皮下脂肪組織樣本,使用qRT-PCR、Western blot檢測mTOR和其下游p70S6K,p-4EBP1的mRNA及蛋白表達(dá)水平,并應(yīng)用免疫組化定位組織中的mTOR蛋白分布。(3)應(yīng)用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)或Mann-Whitney U檢驗(yàn)對兩組患者的一般臨床資料及各項(xiàng)檢驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行分析比較。結(jié)果(1)在血清學(xué)樣本中,妊娠期糖尿病組和正常對照組孕婦平均體重指數(shù)分別為26.85 kg/m~2,22.85kg/m~2,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.003);GDM組空腹血糖,餐后1h血糖、餐后2h血糖、糖化白蛋白顯著高于正常對照組(P0.001),GDM組糖化血紅蛋白顯著升高(P=0.001)。GDM組血清mTOR蛋白表達(dá)量顯著高于正常對照組(P0.05)。(2)在剖宮產(chǎn)樣本中,GDM組孕婦體重指數(shù)及胎兒出生體重顯著高于正常對照組(30.9±4.9 vs 25.9±4.2,P=0.003;3825±419.3vs 3251±290.0,P=0.013);在胎盤組織中,GDM組mTOR及下游p70S6 K和p-4EBP1的mRNA相對表達(dá)水平明顯高于正常對照組(P=0.047,P=0.002,P=0.001)。在皮下脂肪中,與正常對照組相比,GDM組mTOR及p70S6 K、p-4EBP1 mRNA相對表達(dá)量也顯著增高(P=0.031,P=0.001,P=0.013)。GDM組胎盤mTOR及其下游p70S6K和p-4EBP1的蛋白表達(dá)量顯著高于正常對照組(P=0.009,P=0.040,P=0.046);在皮下脂肪中,GDM組mTOR及下游p70S6 K和p-4EBP1蛋白表達(dá)量也明顯高于對照組(P=0.032,P=0.047,P=0.041)。免疫組織化學(xué)染色顯示mTOR在妊娠期糖尿病組和對照組的胎盤組織和腹部皮下脂肪組織中均有定位,且GDM組mTOR蛋白分布總體高于正常對照組。結(jié)論妊娠期糖尿病孕婦的血清mTOR表達(dá)升高,且在妊娠期糖尿病的胎盤及腹部皮下脂肪中mTOR及其下游蛋白p70S6K和p-4EBP1的表達(dá)均有不同程度升高,這些改變提示mTOR和妊娠期糖尿病有相關(guān)性。
【學(xué)位授予單位】：中國醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R714.256
【圖文】：

圖3.4.1 qRT-PCR檢測胎盤組織及腹部皮下脂肪組織mTOR，p70S6K及p-4EBP1的基因表達(dá)。Placenta：胎盤；Fat：脂肪；Control：正常對照；GDM：妊娠期糖尿病；mTOR：哺乳動物雷帕霉素靶蛋白；p70S6K：核糖體蛋白 S6 激酶；p-4EBP1：真核起始因子 4E 結(jié)合蛋白。＊：P<0.05 vs Control, ＊＊：P<0.01 vs Control。3.5 胎盤組織及腹部皮下脂肪 mTOR 及下游蛋白 p70S6 K 和 p-4EBP1的蛋白表達(dá)水平如圖 3.5.1 Western blot 的蛋白檢測結(jié)果顯示，在胎盤組織中，GDM 組 mTOR蛋白表達(dá)量顯著高于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（1.114±0.060 vs 0.436±0.192，P=0.009）；GDM組p70S6 K和p-4EBP1的蛋白表達(dá)量顯著高于對照組（0.776±0.189 vs 0.44±0.049，P=0.04；0.822±0.237 vs 0.423±0.052，P=0.046）。

圖 3.5.1：胎盤組織及腹部皮下脂肪組織 mTOR，p70S6K 及 p-4EBP1 蛋白的表達(dá)。Placenta：胎盤；Fat：脂肪；Control：正常對照；GDM：妊娠期糖尿��；mTOR：哺乳動物雷帕霉素靶蛋白；p70S6K：核糖體蛋白 S6 激酶；p-4EBP1：真核起始因子 4E 結(jié)合蛋白。＊：P <0.05 vs Control，＊＊：P <0.01 vs Control。3.6 免疫組織化學(xué)檢測 mTOR 蛋白在胎盤組織和脂肪組織中的定位如圖 3.6.1 所示：在胎盤組織和腹部皮下脂肪組織中，mTOR 蛋白均有定位，且 GDM 組 mTOR 蛋白分布高于正常對照組，這一結(jié)果與 qRT-PCR 及 Western blot檢測結(jié)果一致。

圖 3.6.1：免疫組織化學(xué)檢測 mTOR 蛋白在胎盤組織及腹部皮下脂肪組織中的定位。Placenta：胎盤；Fat：脂肪；Control：正常對照；GDM：妊娠期糖尿病；mTOR：哺乳動物雷帕霉素靶蛋白。

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本文編號：2766278