【摘要】：目的:宮頸癌是目前全球廣大女性惡性腫瘤的常見疾病,亞洲發(fā)展中國家發(fā)病率尤其高,嚴(yán)重威脅女性健康。本研究旨在探討GPR4與宮頸癌癌細(xì)胞增殖關(guān)系,期望為治療宮頸癌提出新思路和作用靶。為開發(fā)與尋找新藥提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法:構(gòu)建GPR4shRNA干擾載體質(zhì)粒,同原則構(gòu)建pMSCV vector空載質(zhì)粒。將宮頸癌hela細(xì)胞分為三組,GPR4shRNA干擾載體質(zhì)粒組、pMSCV vector空載質(zhì)粒組、單純宮頸癌hela細(xì)胞組。(1)通過熒光顯微鏡進(jìn)行觀察GPR4shRNA干擾基因轉(zhuǎn)染率。(2)MTT對實(shí)驗(yàn)分組中各組宮頸癌Hela細(xì)胞增殖能力進(jìn)行分析。(3)用流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測實(shí)驗(yàn)分組中各組細(xì)胞的周期和細(xì)胞凋亡并進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。(4)Western blot方法檢測各組GPR4蛋白及VEGF表達(dá)變化。結(jié)果:1、MTT檢測結(jié)果顯示:轉(zhuǎn)染后GPR4shRNA干擾載體質(zhì)粒實(shí)驗(yàn)組吸光度(OD)值均降低,宮頸癌Hela細(xì)胞增殖變緩,與其余兩組對照組數(shù)據(jù)相比,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),而空白對照組和pMSCV vector空質(zhì)粒組數(shù)據(jù)比較則二者差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),表明GPR4基因被去除后,人宮頸癌Hela細(xì)胞株的細(xì)胞增殖減緩被抑制,且各組生長曲線對比,GPR4shRNA干擾載體質(zhì)粒組生長趨勢較對照組明顯變慢。2、流式細(xì)胞儀測定顯示:實(shí)驗(yàn)分組中各組宮頸癌Hela細(xì)胞各期檢測結(jié)果,GPR4shRNA干擾載體轉(zhuǎn)染組G1期細(xì)胞增多比較顯著(P0.05),S期細(xì)胞則減少(P0.05),pMSCV vector空質(zhì)粒對照組、空白對照組的宮頸癌Hela細(xì)胞二者則沒有明顯差異(P0.05)。3、流式細(xì)胞儀檢測:實(shí)驗(yàn)分組中pMSCV vector空質(zhì)粒對照組、空白對照組宮頸癌Hela細(xì)胞凋亡率數(shù)據(jù)分別是(3.13±0.18)%、(2.91±0.23)%,而GPR4shRNA干擾載體轉(zhuǎn)染組Hela細(xì)胞凋亡率則為(10.74±0.38)%,此數(shù)據(jù)結(jié)果和實(shí)驗(yàn)分組中pMCVS vector空質(zhì)粒對照組、空白對照組數(shù)據(jù)對比發(fā)現(xiàn),差異均有顯著性(P0.05)。4、Western blot方法測定:實(shí)驗(yàn)分組中GPR4 shRNA干擾載體轉(zhuǎn)染組宮頸癌Hela細(xì)胞GPR4蛋白及VEGF表達(dá)均減少,與其余兩組對比結(jié)果,GPR4蛋白及VEGF表達(dá)差異均具有顯著性(P0.05)。結(jié)論:1、GPR4 shRNA干擾質(zhì)粒抑制宮頸癌He La細(xì)胞生長。2、GPR4 shRNA干擾質(zhì)�？梢詫�(dǎo)致宮頸癌HeLa細(xì)胞凋亡加速。3、GPR4 shRNA干擾質(zhì)粒可以將宮頸癌HeLa細(xì)胞GPR4及VEGF蛋白表達(dá)明顯降低,且說明GPR4表達(dá)量降低影響到VEGF蛋白表降低。
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R737.33
【圖文】：

各組細(xì)胞的生長曲線

GPR4shRNA質(zhì)粒轉(zhuǎn)染HeLa細(xì)胞結(jié)果

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2762447