【摘要】：目的:上皮型卵巢癌是女性常見的惡性腫瘤之一。由于缺乏有效的篩查方法,60-90%的患者發(fā)現(xiàn)時已發(fā)展至晚期。卵巢癌的進展與免疫系統(tǒng)密切相關(guān)。腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞作為腫瘤微環(huán)境的重要組成部分,對卵巢癌的進展起著重要作用�，F(xiàn)有的研究發(fā)現(xiàn)活性維生素D可以改變腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞的極化方向。課題組前期研究發(fā)現(xiàn)活性維生素D可以抑制卵巢癌的發(fā)展。為了研究活性維生素D是否可以通過改變腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞的極化,影響卵巢癌的進展,本研究使用活性維生素D處理M1型、M2型腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞,并用它們的上清液(即條件培養(yǎng)基)培養(yǎng)卵巢癌細(xì)胞。通過體內(nèi)、體外實驗觀察活性維生素D刺激巨噬細(xì)胞獲得的條件培養(yǎng)基是否會對卵巢癌細(xì)胞的生物學(xué)特性產(chǎn)生影響。初步探討活性維生素D作用于腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞后影響卵巢腫瘤細(xì)胞特性的可能機制,為活性維生素D用于卵巢癌防治提供可靠的實驗數(shù)據(jù)。方法:(1)通過循證醫(yī)學(xué)的方法證明腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞在卵巢癌病人腫瘤組織中浸潤的密度與患者預(yù)后是否存在相關(guān)性:通過“卵巢癌”、“巨噬細(xì)胞”、“腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞”等關(guān)鍵詞在PubMed與MEDLINE數(shù)據(jù)庫中檢索相關(guān)文獻,收集腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞浸潤密度與患者預(yù)后的風(fēng)險比(Hazard Risk,HR)。通過meta-analysis分析腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞在腫瘤組織中浸潤的陽性率與卵巢癌患者預(yù)后的關(guān)系。計算合并后的HR以及95%置信區(qū)間(Confidence Interval,CI)。(2)活性維生素D通過腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞對卵巢癌細(xì)胞生物學(xué)特性的影響:使用流式細(xì)胞分析儀檢測體外極化的M1型、M2型腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞標(biāo)志物。用活性維生素D刺激M1型、M2型腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞,收集條件培養(yǎng)基,用腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞的條件培養(yǎng)基培養(yǎng)卵巢癌細(xì)胞。使用CCK-8法檢測卵巢癌細(xì)胞的活性;使用平板克隆實驗檢測卵巢癌細(xì)胞增殖能力的變化;使用劃痕與Transwell實驗檢測卵巢癌細(xì)胞遷移能力的變化。將腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞與熒光標(biāo)記的卵巢癌細(xì)胞接種于裸鼠皮下,觀察其致瘤能力的變化,以及小鼠生存期的變化。從體內(nèi)、體外實驗說明活性維生素D是否通過腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞對卵巢癌細(xì)胞生物學(xué)特性產(chǎn)生影響。(3)活性維生素D通過腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞影響卵巢癌細(xì)胞生物學(xué)特性的機制:用ELISA法檢測活性維生素D處理腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞得到的條件培養(yǎng)基,檢測TGF-β1、TNF-α、IL-1β、MMP-9含量變化;收取不同巨噬細(xì)胞蛋白樣品,通過western blot法,檢測活性維生素D處理后巨噬細(xì)胞VDR表達水平的變化;檢測不同條件培養(yǎng)基培養(yǎng)的卵巢癌細(xì)胞中EGFR、β-catenin表達水平的變化,進一步闡明活性維生素D通過腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞對卵巢癌細(xì)胞生物學(xué)特性產(chǎn)生影響的可能機制。結(jié)果:(1)卵巢癌組織中M2型腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞是卵巢癌病人預(yù)后的危險因素最終納入文獻8篇,合并病例961例。結(jié)果顯示腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞陽性率可以引起卵巢癌病人的不良預(yù)后(HR 1.78,95%CI 1.19~2.66)。由于結(jié)果的異質(zhì)性較大,所以我們進行了亞組分析與敏感性分析。亞組分析結(jié)果發(fā)現(xiàn),M2型腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞在腫瘤組織中的陽性率與病人不良預(yù)后呈正相關(guān)。敏感性分析結(jié)果發(fā)現(xiàn),剔除其中一篇文獻后,分析結(jié)果的異質(zhì)性明顯下降。(2)活性維生素D刺激M2型腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞的條件培養(yǎng)基可以降低卵巢癌細(xì)胞的增殖與遷移能力細(xì)胞活性實驗結(jié)果顯示,活性維生素D刺激M1型細(xì)胞得到的條件培養(yǎng)基可以促進SKOV-3細(xì)胞的增殖,而活性維生素D刺激M2型細(xì)胞得到的條件培養(yǎng)基培養(yǎng)的SKOV-3細(xì)胞的活性卻被抑制了。平板克隆實驗結(jié)果顯示,活性維生素D對M1型巨噬細(xì)胞培養(yǎng)基刺激的卵巢癌細(xì)胞增殖能力無影響(p0.05)。但是,活性維生素D可以通過影響M2型巨噬細(xì)胞的培養(yǎng)基降低卵巢癌細(xì)胞的增值能力(p0.05)。劃痕實驗結(jié)果顯示,用活性維生素D刺激M1型巨噬細(xì)胞得到的條件培養(yǎng)基可以促進卵巢癌細(xì)胞遷移能力,并且遷移能力隨時間延長而增加,在48小時時達到最大值(p0.05)。而用活性維生素D刺激M2型巨噬細(xì)胞得到的條件培養(yǎng)基在不同時間均抑制卵巢癌細(xì)胞的遷移能力(p0.05)。裸鼠成瘤實驗結(jié)果顯示,活性維生素D刺激的巨噬細(xì)胞與卵巢癌細(xì)胞共同接種裸鼠皮下、且每周肌肉注射維生素D_3,生存率較對照組顯著提高。以上體內(nèi)、體外實驗結(jié)果說明,活性維生素D可以通過改變M2型腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞的培養(yǎng)基,降低卵巢癌細(xì)胞的增殖與遷移能力(3)活性維生素D通過與腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞的VDR結(jié)合,間接地影響了卵巢癌細(xì)胞蛋白表達Western blot結(jié)果顯示活性維生素D可以調(diào)節(jié)M2型巨噬細(xì)胞VDR的表達,進而降低巨噬細(xì)胞TGF-β1、MMP-9、TNF-α,增加IL-1β的分泌。同時,活性維生素D刺激M2型巨噬細(xì)胞的條件培養(yǎng)基可以抑制卵巢癌細(xì)胞β-catenin的表達量,最終抑制卵巢癌細(xì)胞的增殖與遷移能力。說明活性維生素D的條件培養(yǎng)基抑制卵巢癌細(xì)胞的增殖與遷移,與增加M2型巨噬細(xì)胞VDR表達、減少TGF-β1、MMP-9、TNF-α,增加IL-1β的表達有關(guān)。以上實驗結(jié)果說明,活性維生素D可以通過調(diào)節(jié)M2型腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞的蛋白分泌,改變卵巢癌細(xì)胞的生物學(xué)特性。結(jié)論:(1)腫瘤組織M2型腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞陽性率是卵巢癌病人預(yù)后的危險因素;(2)活性維生素D處理M2型腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞后,可以降低卵巢癌細(xì)胞的增殖與遷移能力;并提高裸鼠的生存時間;(3)活性維生素D通過與腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞VDR結(jié)合,降低TGF-β1、TNF-α、MMP-9的表達,促進IL-1β的表達,間接地影響了卵巢癌細(xì)胞β-catenin的表達,抑制了卵巢癌細(xì)胞的生物學(xué)特性。
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R737.31
【圖文】：

腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞與卵巢癌病人預(yù)后的meta-analysis森林圖

圖 1.2 M2 型腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞與卵巢癌病人預(yù)后的亞組分析森林圖2.5 敏感性分析為了尋找導(dǎo)致 meta 主分析異質(zhì)性的文獻，我們又進行了敏感性分析，即將

圖 2.1 PMA 對 THP-1 細(xì)胞形態(tài)以及標(biāo)志物的影響THP-1 細(xì)胞經(jīng) PMA 刺激，A: 細(xì)胞形態(tài)直觀圖，細(xì)胞貼壁生長，形態(tài)接近“卵圓形”；B: PMA 刺激后，巨噬細(xì)胞標(biāo)志物 CD68 表達上升。為了觀察維生素 D 是否影響 M1 型和 M2 型巨噬細(xì)胞表面標(biāo)志物的表達情況，

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本文編號：2761371