【摘要】：目的本研究第一部分探討山東漢族人群中鈉離子依賴性維生素C轉(zhuǎn)運(yùn)體2(SVCT2)基因rs6133175位點(diǎn)和rs1279683位點(diǎn)的單核苷酸多態(tài)性與子癇前期(Preeclampsia,PE)遺傳易感性的相關(guān)性,以此來(lái)確定該病的易感基因,為子癇前期的臨床預(yù)測(cè)提供遺傳學(xué)依據(jù);第二部分調(diào)查子癇前期(preeclampsia,PE)患者的疾病史、生活和飲食習(xí)慣情況,以及膳食營(yíng)養(yǎng)素?cái)z入水平和膳食多樣化程度,為指導(dǎo)患者合理膳食,改變不良習(xí)慣提供依據(jù)。方法采用病例對(duì)照研究方法,選取2015年1月至2017年6月山東各地醫(yī)院產(chǎn)科同期分娩的1029例子癇前期孕婦作為病例組,1037例健康足月分娩的孕婦作為對(duì)照組,抽取外周血提取DNA,運(yùn)用Taqman探針熒光定量PCR技術(shù)對(duì)DNA進(jìn)行擴(kuò)增,然后對(duì)SVCT2基因rs6133175位點(diǎn)和rs1279683位點(diǎn)進(jìn)行基因型頻率及等位基因頻率的分析比較。采用橫斷面調(diào)查方法,隨機(jī)抽取2016年9月至2017年4月在棗莊市婦幼保健院就診且確診為子癇前期的200名孕婦作為調(diào)查對(duì)象,自行設(shè)計(jì)調(diào)查問(wèn)卷對(duì)子癇前期患者的基本情況、疾病史及家族史、體力活動(dòng)情況、生活及飲食習(xí)慣等進(jìn)行調(diào)查;選用24h膳食回顧方法調(diào)查子癇前期患者24小時(shí)內(nèi)的食物攝入情況。營(yíng)養(yǎng)素?cái)z入充足比(nutrient adequacy ratio,NAR)用來(lái)評(píng)價(jià)子癇前期患者各類營(yíng)養(yǎng)素?cái)z入是否充足,膳食多樣化評(píng)分(dietary diversity score,DDS)用來(lái)評(píng)估子癇前期患者攝入食物種類是否多樣化。結(jié)果1.SVCT2基因rs6133175位點(diǎn)的基因型頻率在病例組和對(duì)照組之間存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(χ2=8.08,P=0.02)。將rs6133175位點(diǎn)的病例組與對(duì)照組分成(AG+GG)亞組和AA亞組后,發(fā)現(xiàn)這兩個(gè)亞組的基因型頻率在病例組和對(duì)照組之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(χ2=0.01,P=0.01,OR=0.71,95%CI=0.55 0.92)。輕度/重度PE和早發(fā)型/晚發(fā)型PE分別與對(duì)照組進(jìn)行比較,發(fā)現(xiàn)該位點(diǎn)多態(tài)性可能與重度子癇前期以及早發(fā)型子癇前期發(fā)病均有關(guān)聯(lián)(重度PE vs對(duì)照:χ2=10.97,P=0.004;早發(fā)型PE vs對(duì)照:χ2=11.82,P=0.003)。然而,SVCT2基因rs1279683位點(diǎn)的基因型分布與等位基因頻率在病例組和對(duì)照組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(基因型:χ2=1.52,P=0.47;等位基因:χ2=0.64,P=0.44,OR=1.05,95%CI=0.93 1.2)。2.在年齡方面,年齡≥31歲者占63%;BMI水平,24≤BMI28(超重)的患者占37%,BMI≥28(肥胖)的患者占10%。在疾病史方面,合并慢性高血壓者占12%,有糖尿病病史者占9%,合并高血脂者占3.5%。在體力活動(dòng)方面,幾乎不鍛煉者占57%,輕度體力活動(dòng)者占24%,適度體力活動(dòng)者占19%。飲食習(xí)慣上,17.5%的患者嗜油炸食物,30%的患者常吃偏咸的食物,18.5%的患者喜好甜食;三餐不規(guī)律者占了11%。從供能營(yíng)養(yǎng)素比例分配來(lái)看,蛋白質(zhì)、脂肪、碳水化合物實(shí)際供能比分別為9.8%、31.6%、58.6%;其中蛋白質(zhì)供能偏低的患者有116名(58%),脂肪供能占總產(chǎn)量比過(guò)高者有46名(23%)。在營(yíng)養(yǎng)素?cái)z入水平方面,膳食中蛋白質(zhì)、維生素C、鈣及鋅的攝入量不足,NAR分別是0.78、0.65、0.52、065;維生素E攝入量過(guò)高,NAR為1.31。膳食多樣化分析發(fā)現(xiàn),子癇前期患者的DDS評(píng)分均值為6.2分,眾數(shù)為6;魚(yú)蝦類、奶類及其制品、大豆及堅(jiān)果類的消費(fèi)率偏低,分別為46.0%、52.5%、47.0%。結(jié)論1.本研究數(shù)據(jù)表明山東漢族女性SVCT2基因rs6133175位點(diǎn)多態(tài)性可能與子癇前期遺傳易感性有關(guān)聯(lián);而該基因另一位點(diǎn)rs1279683位點(diǎn)多態(tài)性可能與子癇前期遺傳易感性無(wú)關(guān)聯(lián)。2.子癇前期患者孕前超重或肥胖問(wèn)題普遍存在;部分子癇前期患者孕前患有慢性高血壓疾病、糖尿病、高血脂等慢性疾病;體力活動(dòng)偏少,存在不良飲食習(xí)慣;三大產(chǎn)能營(yíng)養(yǎng)素?cái)z入不均衡,蛋白質(zhì)攝入偏少,脂肪攝入偏多,碳水化合物攝入量較適宜;部分營(yíng)養(yǎng)素?cái)z入量偏低,如蛋白質(zhì)、維生素C、鈣、鋅等;飲食多樣化程度不高,魚(yú)蝦、奶類、豆類及堅(jiān)果類食用率偏低。
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R714.244
【圖文】：

圖 1.1 Taqman 探針熒光定量 PCR 原理圖TaqMan 探針的 5’處有一個(gè)報(bào)告熒光基團(tuán)（reporter dye，簡(jiǎn)稱 R 基團(tuán)），3’處有一個(gè)淬滅熒光基團(tuán)（quencher，簡(jiǎn)稱 Q 基團(tuán)），Q 集團(tuán)與 R 集團(tuán)位于探針兩端，完整的探針中 R 集團(tuán)發(fā)出的熒光信號(hào)會(huì)被 Q 基團(tuán)所吸收，呈現(xiàn)熒光（-）信號(hào)；PCR 擴(kuò)增時(shí)，探針會(huì)與 DNA 模板結(jié)合，當(dāng)正向引物與探針相遇時(shí)，Taq 聚合酶（Taq polymerase）的5’-3’的外切酶活性會(huì)把探針溶解，R 集團(tuán)與探針?lè)蛛x，使它和猝滅集團(tuán)分開(kāi)，這時(shí)就會(huì)產(chǎn)生熒光，這樣就實(shí)現(xiàn)了每合成一條 DNA 鏈就就會(huì)捕獲到一個(gè)熒光信號(hào)，經(jīng)過(guò) PCR的多個(gè)循環(huán)之后，熒光檢測(cè)系統(tǒng)就會(huì)得到一條呈  S ‖增長(zhǎng)的熒光信號(hào)增長(zhǎng)曲線。本實(shí)驗(yàn)在 PCR 反應(yīng)體系中加入兩種不同熒光標(biāo)記的探針，在 PCR 擴(kuò)增之后通過(guò)終點(diǎn)讀板檢測(cè)熒光信號(hào)有無(wú)就可以判斷樣本的基因型。3.2 標(biāo)本采集納入研究隊(duì)列的孕婦在入院后，常規(guī)禁食12 h后，次日清晨采集外周肘靜脈血2 mL（EDTA 抗凝），進(jìn)行充分地顛倒混勻，吸取 200 μL 全血至 1.5 mL EP 管中，置于 4℃冰箱保存，盡快進(jìn)行 DNA 的提取，并將剩余的全血置于 2 mL EP 管內(nèi)，于-80℃冰箱

CAGTCTGGGATATGGAAATTTC-3’ ； rs1279683 位點(diǎn)的上游引物序列是：GTTCTTGGACCGCTAAGCA-3’, 下 游 引 物 序 列 是 CCATGTGAGGTCAGACAGACA。.2 PCR 反應(yīng)體系和反應(yīng)條件實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 的總反應(yīng)體系共 25 μL，包括：2×Taqman Genotyping M 12.5 μL、20×SNP Genotyping Assay 1.25 μL、高壓滅菌去離子水 10.25μL 以及A 樣本 1.0 μL。PCR 擴(kuò)增反應(yīng)由 C1000TM熱循環(huán)儀進(jìn)行，反應(yīng)條件是：①95℃預(yù)變性 3 分鐘變性 15 秒；③ 60℃退火 1 分鐘，共 45 個(gè)循環(huán)。.3 SNP 基因分型應(yīng)用美國(guó)Bio-Rad 公司的 CXF96 TM Manager 軟件檢測(cè) VIC 跟 FAM 標(biāo)記的探號(hào)，進(jìn)而對(duì) rs6133175 和 rs1279683 兩位點(diǎn)的樣本基因型進(jìn)行區(qū)分。現(xiàn)以 rs613，其三種基因型如下圖所示：

FAM標(biāo)記的堿基被擴(kuò)增，基因型讀為GG（純合性）

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2758184