【摘要】：目的本研究第一部分探討山東漢族人群中鈉離子依賴性維生素C轉運體2(SVCT2)基因rs6133175位點和rs1279683位點的單核苷酸多態(tài)性與子癇前期(Preeclampsia,PE)遺傳易感性的相關性,以此來確定該病的易感基因,為子癇前期的臨床預測提供遺傳學依據;第二部分調查子癇前期(preeclampsia,PE)患者的疾病史、生活和飲食習慣情況,以及膳食營養(yǎng)素攝入水平和膳食多樣化程度,為指導患者合理膳食,改變不良習慣提供依據。方法采用病例對照研究方法,選取2015年1月至2017年6月山東各地醫(yī)院產科同期分娩的1029例子癇前期孕婦作為病例組,1037例健康足月分娩的孕婦作為對照組,抽取外周血提取DNA,運用Taqman探針熒光定量PCR技術對DNA進行擴增,然后對SVCT2基因rs6133175位點和rs1279683位點進行基因型頻率及等位基因頻率的分析比較。采用橫斷面調查方法,隨機抽取2016年9月至2017年4月在棗莊市婦幼保健院就診且確診為子癇前期的200名孕婦作為調查對象,自行設計調查問卷對子癇前期患者的基本情況、疾病史及家族史、體力活動情況、生活及飲食習慣等進行調查;選用24h膳食回顧方法調查子癇前期患者24小時內的食物攝入情況。營養(yǎng)素攝入充足比(nutrient adequacy ratio,NAR)用來評價子癇前期患者各類營養(yǎng)素攝入是否充足,膳食多樣化評分(dietary diversity score,DDS)用來評估子癇前期患者攝入食物種類是否多樣化。結果1.SVCT2基因rs6133175位點的基因型頻率在病例組和對照組之間存在統(tǒng)計學差異(χ2=8.08,P=0.02)。將rs6133175位點的病例組與對照組分成(AG+GG)亞組和AA亞組后,發(fā)現這兩個亞組的基因型頻率在病例組和對照組之間有統(tǒng)計學差異(χ2=0.01,P=0.01,OR=0.71,95%CI=0.55 0.92)。輕度/重度PE和早發(fā)型/晚發(fā)型PE分別與對照組進行比較,發(fā)現該位點多態(tài)性可能與重度子癇前期以及早發(fā)型子癇前期發(fā)病均有關聯(重度PE vs對照:χ2=10.97,P=0.004;早發(fā)型PE vs對照:χ2=11.82,P=0.003)。然而,SVCT2基因rs1279683位點的基因型分布與等位基因頻率在病例組和對照組之間差異無統(tǒng)計學意義(基因型:χ2=1.52,P=0.47;等位基因:χ2=0.64,P=0.44,OR=1.05,95%CI=0.93 1.2)。2.在年齡方面,年齡≥31歲者占63%;BMI水平,24≤BMI28(超重)的患者占37%,BMI≥28(肥胖)的患者占10%。在疾病史方面,合并慢性高血壓者占12%,有糖尿病病史者占9%,合并高血脂者占3.5%。在體力活動方面,幾乎不鍛煉者占57%,輕度體力活動者占24%,適度體力活動者占19%。飲食習慣上,17.5%的患者嗜油炸食物,30%的患者常吃偏咸的食物,18.5%的患者喜好甜食;三餐不規(guī)律者占了11%。從供能營養(yǎng)素比例分配來看,蛋白質、脂肪、碳水化合物實際供能比分別為9.8%、31.6%、58.6%;其中蛋白質供能偏低的患者有116名(58%),脂肪供能占總產量比過高者有46名(23%)。在營養(yǎng)素攝入水平方面,膳食中蛋白質、維生素C、鈣及鋅的攝入量不足,NAR分別是0.78、0.65、0.52、065;維生素E攝入量過高,NAR為1.31。膳食多樣化分析發(fā)現,子癇前期患者的DDS評分均值為6.2分,眾數為6;魚蝦類、奶類及其制品、大豆及堅果類的消費率偏低,分別為46.0%、52.5%、47.0%。結論1.本研究數據表明山東漢族女性SVCT2基因rs6133175位點多態(tài)性可能與子癇前期遺傳易感性有關聯;而該基因另一位點rs1279683位點多態(tài)性可能與子癇前期遺傳易感性無關聯。2.子癇前期患者孕前超重或肥胖問題普遍存在;部分子癇前期患者孕前患有慢性高血壓疾病、糖尿病、高血脂等慢性疾病;體力活動偏少,存在不良飲食習慣;三大產能營養(yǎng)素攝入不均衡,蛋白質攝入偏少,脂肪攝入偏多,碳水化合物攝入量較適宜;部分營養(yǎng)素攝入量偏低,如蛋白質、維生素C、鈣、鋅等;飲食多樣化程度不高,魚蝦、奶類、豆類及堅果類食用率偏低。
【學位授予單位】：青島大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R714.244
【圖文】：

圖 1.1 Taqman 探針熒光定量 PCR 原理圖TaqMan 探針的 5’處有一個報告熒光基團（reporter dye，簡稱 R 基團），3’處有一個淬滅熒光基團（quencher，簡稱 Q 基團），Q 集團與 R 集團位于探針兩端，完整的探針中 R 集團發(fā)出的熒光信號會被 Q 基團所吸收，呈現熒光（-）信號；PCR 擴增時，探針會與 DNA 模板結合，當正向引物與探針相遇時，Taq 聚合酶（Taq polymerase）的5’-3’的外切酶活性會把探針溶解，R 集團與探針分離，使它和猝滅集團分開，這時就會產生熒光，這樣就實現了每合成一條 DNA 鏈就就會捕獲到一個熒光信號，經過 PCR的多個循環(huán)之后，熒光檢測系統(tǒng)就會得到一條呈  S ‖增長的熒光信號增長曲線。本實驗在 PCR 反應體系中加入兩種不同熒光標記的探針，在 PCR 擴增之后通過終點讀板檢測熒光信號有無就可以判斷樣本的基因型。3.2 標本采集納入研究隊列的孕婦在入院后，常規(guī)禁食12 h后，次日清晨采集外周肘靜脈血2 mL（EDTA 抗凝），進行充分地顛倒混勻，吸取 200 μL 全血至 1.5 mL EP 管中，置于 4℃冰箱保存，盡快進行 DNA 的提取，并將剩余的全血置于 2 mL EP 管內，于-80℃冰箱

CAGTCTGGGATATGGAAATTTC-3’ ； rs1279683 位點的上游引物序列是：GTTCTTGGACCGCTAAGCA-3’, 下 游 引 物 序 列 是 CCATGTGAGGTCAGACAGACA。.2 PCR 反應體系和反應條件實時熒光定量 PCR 的總反應體系共 25 μL，包括：2×Taqman Genotyping M 12.5 μL、20×SNP Genotyping Assay 1.25 μL、高壓滅菌去離子水 10.25μL 以及A 樣本 1.0 μL。PCR 擴增反應由 C1000TM熱循環(huán)儀進行，反應條件是：①95℃預變性 3 分鐘變性 15 秒；③ 60℃退火 1 分鐘，共 45 個循環(huán)。.3 SNP 基因分型應用美國Bio-Rad 公司的 CXF96 TM Manager 軟件檢測 VIC 跟 FAM 標記的探號，進而對 rs6133175 和 rs1279683 兩位點的樣本基因型進行區(qū)分�，F以 rs613，其三種基因型如下圖所示：

FAM標記的堿基被擴增，基因型讀為GG（純合性）

【參考文獻】

相關期刊論文 前10條

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本文編號：2758184