【摘要】：目的:應(yīng)用生物信息學(xué)方法分析hsa-mi R-429的基本信息,預(yù)測(cè)其靶基因,對(duì)其靶基因進(jìn)行功能注釋,為探索其在卵巢癌治療方面的機(jī)制研究作理論基礎(chǔ)。方法:利用從mi RDB、Targetscan、Target Miner、RNACentral四個(gè)預(yù)測(cè)軟件和Satrbase v3.0數(shù)據(jù)庫(kù)平臺(tái)預(yù)測(cè)到的hsa-mi R-429的靶基因,并通過(guò)GEO數(shù)據(jù)庫(kù)檢索到有關(guān)mi R-429靶基因的芯片數(shù)據(jù)庫(kù)GSE56967進(jìn)行靶基因分析,將預(yù)測(cè)到的靶基因進(jìn)行GO功能注釋。結(jié)果:四個(gè)預(yù)測(cè)軟件同期預(yù)測(cè)到25個(gè)hsa-mi R-429的靶基因,在Satrbase v3.0數(shù)據(jù)庫(kù)平臺(tái)中預(yù)測(cè)出7個(gè)預(yù)測(cè)靶基因(ZEB1、ATP2A2、NAB1、VLDLR、CHD1、SEC23A、FRMD4B);在GEO數(shù)據(jù)庫(kù)中搜索卵巢癌與mi R-429有關(guān)的數(shù)據(jù)芯片,結(jié)果顯示,mi R-429過(guò)表達(dá)會(huì)介導(dǎo)ZEB1下調(diào)。而預(yù)測(cè)到的hsa-mi R-429的靶基因在胚胎器官發(fā)育、轉(zhuǎn)錄調(diào)控、MAPK家族信號(hào)通路的調(diào)控、信號(hào)調(diào)節(jié)、信號(hào)傳導(dǎo)、脂質(zhì)代謝等生物學(xué)過(guò)程具有富集表現(xiàn)(P0.05)。結(jié)合前期研究中卵巢癌與mi RNA的差異表達(dá)譜相關(guān)的臨床數(shù)據(jù),發(fā)現(xiàn)mi R-429在卵巢癌耐藥組中下調(diào)0.35倍,mi R-429及其靶基因ZEB2和KANK2的差異表達(dá)亦與患者OS和PFS相關(guān)。結(jié)論:hsa-mi R-429可能調(diào)控多種靶基因,而ZEB1、ATP2A2、NAB1、VLDLR、CHD1、SEC23A、FRMD4B可能是發(fā)揮關(guān)鍵作用的基因;同時(shí)在與卵巢癌相關(guān)方面,轉(zhuǎn)錄調(diào)控、MAPK家族信號(hào)通路的調(diào)控、信號(hào)調(diào)節(jié)、信號(hào)傳導(dǎo)又可能是hsa-mi R-429靶基因群關(guān)鍵的調(diào)節(jié)機(jī)制所在,后續(xù)將同期對(duì)這些靶基因進(jìn)行實(shí)驗(yàn)和臨床的驗(yàn)證。目的:前期研究表明mi R-429的靶基因可能是ZEB1,以此探討卵巢癌耐藥細(xì)胞系及裸鼠移植瘤中ZEB1的表達(dá)水平。方法:慢病毒感染靶細(xì)胞;熒光定量PCR檢測(cè)SKOV3、SKOV3/DDP2、SKOV3/DDP2-mi R-429mimics、SKOV3/DDP2-mi R-NC、SKOV3/DDP2-mi R-429inhibitor細(xì)胞中mi R-429的表達(dá)水平分析;將SKOV3、SKOV3/DDP2、SKOV3/DDP2-mi R-429mimics、SKOV3/DDP2-mi R-NC、SKOV3/DDP2-mi R-429inhibitor細(xì)胞移植入小鼠皮下,監(jiān)測(cè)移植瘤的生長(zhǎng)情況;q RT-PCR檢測(cè)移植瘤組織的mi R-429表達(dá);免疫組化觀(guān)察裸鼠移植瘤ZEB1的表達(dá);HE(蘇木素-伊紅)染色觀(guān)察裸鼠移植瘤的細(xì)胞形態(tài)。結(jié)果:SKOV3/DDP2-mi R-429mimic移植瘤與對(duì)照組移植瘤相比,腫瘤生長(zhǎng)速度緩慢;mi R-429在移植瘤SKOV3/DDP2-mi R-429m imics中呈高表達(dá);免疫組化檢測(cè)發(fā)現(xiàn),五種移植瘤中ZEB1的表達(dá)隨順鉑的注射次數(shù)的增加而減弱,且移植瘤SKOV3/DDP2-mi R-429mimics中ZEB1的表達(dá)程度低于對(duì)照組移植瘤。結(jié)論:在裸鼠移植瘤研究中,mi R-429可以靶向作用于ZEB1,mi R-429的上調(diào)對(duì)ZEB1基因的表達(dá)有抑制作用。目的:探索mi R-429過(guò)表達(dá)后在卵巢癌順鉑耐藥株SKOV3/DDP2自噬過(guò)程的變化,以及對(duì)PI3K-AKT1自噬通路的影響,并采用裸鼠體內(nèi)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。方法:CCK8檢測(cè)SKOV3/DDP2和親本細(xì)胞SKOV3的IC50及SKOV3/DDP2的耐藥指數(shù);CCK8檢測(cè)SKOV3/DDP2、SKOV3/DDP2-mi R-429mi mics、SKOV3/DDP2-mi R-NC、SKOV3/DDP2-mi R-429inhibitor細(xì)胞的IC50值;免疫熒光觀(guān)察不同濃度順鉑作用24小時(shí)細(xì)胞內(nèi)自噬蛋白LC3A/B分布的影響;透射電鏡觀(guān)察一定順鉑濃度作用24小時(shí)細(xì)胞內(nèi)的自噬小體;West ern Bolt檢測(cè)不同順鉑濃度作用24小時(shí)細(xì)胞內(nèi)自噬蛋白(LC3A/B-II)/(LC3A/B-I)、p62的表達(dá);Western Bolt檢測(cè)mi R-429過(guò)表達(dá)影響卵巢癌細(xì)胞中PI3K-AKT1通路的表達(dá);Western Bolt檢測(cè)移植瘤內(nèi)自噬蛋白(LC3A/B-II)/(LC3A/B-I)、p62的表達(dá);HE(蘇木素-伊紅)染色觀(guān)察裸鼠移植瘤;免疫組化觀(guān)察裸鼠移植瘤中LC3B的表達(dá)。結(jié)果:順鉑誘導(dǎo)后,mi R-429過(guò)表達(dá)耐藥株mimics透射電鏡未見(jiàn)自噬體形成;一定濃度順鉑作用后,Western Bolt顯示mimics細(xì)胞(LC3A/B-II)/(LC3A/B-I)比值降低,p62升高;SKOV3/DDP2-mi R-429mimics在PI3K-AKT1自噬通路中AKT1、p-AKT1、m TOR、p-m TOR的表達(dá)增高,同時(shí),SKOV3/DDP2-mi R-429inhibitor中Atg7和AM PK的表達(dá)上調(diào)。裸鼠體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中,Western Bolt檢測(cè)SKOV3/DDP2-mi R-429mimics裸鼠瘤的LC3A/B的表達(dá)比對(duì)照組低。結(jié)論:mi R-429過(guò)表達(dá)能在SKOV3/DDP2細(xì)胞中減弱順鉑誘導(dǎo)產(chǎn)生的自噬,同時(shí)增加順鉑耐藥細(xì)胞的敏感性,并且mi R-429在卵巢癌耐藥細(xì)胞中過(guò)表達(dá)能有效的抑制耐藥腫瘤生長(zhǎng),減弱順鉑誘導(dǎo)的自噬。因此,進(jìn)一步研究mi R-429介導(dǎo)自噬對(duì)卵巢癌耐藥發(fā)展過(guò)程中的信號(hào)傳導(dǎo)通路機(jī)制研究及其在臨床中的應(yīng)用提供了重要的指導(dǎo)意義。
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類(lèi)號(hào)】：R737.31
【圖文】：

圖 1-1 hsa-miR-429 基因序列號(hào)Figure 1-1 gene sequence number of hsa-miR-429圖 1-2 hsa-miR-429 在人類(lèi)基因組中成熟染色體Figure 1-2 mature chromosomes of hsa-miR-429 in the human genome

調(diào)控自噬增強(qiáng)鉑類(lèi)耐藥卵巢上皮癌細(xì)胞敏感性的機(jī)制研究 2019屆碩士圖 1-1 hsa-miR-429 基因序列號(hào)Figure 1-1 gene sequence number of hsa-miR-429

圖 1-3 hsa-miR-429 在人類(lèi)基因組中成熟位點(diǎn)Figure 1-3 mature site of hsa-miR-429 in human genome圖 1-4 miR-429 預(yù)測(cè)的靶基因Figure 1-4 predicted target genes of miR-429

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本文編號(hào)：2755886