【摘要】：目的:子癇前期(Preeclampsia,PE)是產(chǎn)科嚴(yán)重的妊娠期并發(fā)癥,目前診斷主要依靠孕晚期的臨床表現(xiàn)及生化檢查結(jié)果,而在PE發(fā)生的早期,臨床表現(xiàn)、常規(guī)生化等變化多不典型,故發(fā)現(xiàn)PE可能的潛在生物學(xué)標(biāo)志物具有重要的臨床意義。外泌體(exosomes)是一種可由多種細(xì)胞主動分泌的大小在40-150nm的細(xì)胞外囊泡,其內(nèi)含有DNA、mRNA、蛋白質(zhì)等,其內(nèi)容物由其分泌細(xì)胞決定,這種內(nèi)容物一致性,在理論上不侵犯它們的起源組織就能表征分泌細(xì)胞或組織的正常生理或病理狀態(tài),可以作為某些疾病的指示物。胎盤在妊娠期間可以分泌特異的外泌體進(jìn)入母體循環(huán)中。UL16結(jié)合蛋白1(unique long 16 binding protein 1,ULBP1)是自然殺傷(NK)細(xì)胞活化性受體凝集素樣同型二聚體(Natural killer cell group 2D,NKG2D)的一個配體,目前研究提示ULBP1在PE患者的胎盤中表達(dá)上調(diào),并參與了PE的發(fā)病,同時有研究提示可以表達(dá)在胎盤來源的外泌體膜上。目前,關(guān)于PE患者外周血外泌體中的生物活性分子的研究甚少,為此,本研究的目的在于分析正常孕婦及PE患者外周血中外泌體表達(dá)ULBP1是否具有差異性,為PE的診治提供一定的理論依據(jù)。研究方法:選取2017年6月-2018年7月于中國醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院產(chǎn)科收集的20例PE患者的外周血標(biāo)本作為實驗組(PE組),同期選取該院20例正常孕婦外周血標(biāo)本作為正常對照組(NC組)。通過低速離心分離出血清,使用ExoQuick Precipitation試劑盒提取兩組實驗對象血清中的外泌體,采用蛋白質(zhì)免疫印跡法(Western bolt,WB)檢測外泌體的標(biāo)志蛋白CD63,使用透射電鏡鑒定外泌體的形態(tài),使用BCA蛋白濃度測定試劑盒檢測兩組外泌體蛋白水平,通過酶聯(lián)免疫吸附實驗(EILSA)檢測兩組外泌體中ULBP1的水平。結(jié)果:1、WB檢測外泌體的標(biāo)志蛋白CD63呈陽性。2、透射電鏡下可見外泌體形態(tài)呈圓形或橢圓形,典型的雙層膜狀結(jié)構(gòu)。3、外泌體蛋白水平在PE組中高于NC組,分別是(7.5700±2.5700)mg/ml vs(6.0110±2.3070)mg/ml,P=0.0467,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。4、ULBP1在PE組中的水平高于NC組,分別是(1.0500±0.5937)ng/ml vs(0.4875±0.4346)ng/ml,P=0.0013,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:PE患者外周血外泌體中的ULBP1可能與PE的發(fā)生發(fā)展有關(guān),外泌體中的ULBP1可能是PE潛在的生物學(xué)標(biāo)志物。
【學(xué)位授予單位】：中國醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R714.244
【圖文】：

PE 1.89 29.10.86 36.71.69 29.8±8.20/77.60±6.51 169++ 0±286.64 275的外泌體的提取、取法提取 NC 組和 PE 組用 WB 檢測兩組外泌電鏡下可見外泌體形態(tài)

Westernblot驗證兩組外泌體標(biāo)志蛋白分子CD63

射電鏡鑒定外泌體形態(tài),呈圓形或橢圓形及典型的雙層膜囊狀結(jié)構(gòu)；A：PE 組（黑色箭頭指示外泌體，Bar=100nm，放大倍數(shù) 67000 倍）組和PE組外泌體蛋白的水平 BCA 蛋白濃度測定試劑盒測定兩組外泌體總蛋白含量，PE 組7.5700±2.5700）mg/ml 高于 NC 組（6.0110±2.3070）mg/ml，統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05，如圖 3.4）。

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本文編號：2751991