【摘要】：目的:探索前梯度蛋白2(Anterior gradient 2,AGR2)在宮頸病變進(jìn)展的臨床意義及作用機(jī)制。方法:收集慢性宮頸炎組織(Chronic cervicitis,CC),低級別鱗狀上皮內(nèi)病變(Low-grade squamous intraepithelial lesion,LSIL)、高級別鱗狀上皮內(nèi)病變(High-grade squamous intraepithelial lesion,HSIL)及鱗狀細(xì)胞癌(Squamous cell carcinoma of cervix,SCC)的石蠟切片和臨床資料分別各46、31、70、37例,通過IHC檢測分析組織中AGR2及P16~(INK4)的差異表達(dá);將宮頸病變病理診斷分別組合為三種二分類模式:慢性宮頸炎組(CC組)與宮頸病變組(LSIL組+HSIL組+SCC組,LHS組)、LSIL及以下病變組(CC組+LSIL組,CL組)與HSIL及以上病變組(HSIL組+SCC組,HS組)、非惡性宮頸病變組(CC組+LSIL組+HSIL組,CLH組)及SCC組,以P16~(INK4)作為對照,通過Logistic回歸分析獲取比值比(Odds ratio,OR),評估AGR2對宮頸病變的診斷價值;并通過受試者工作曲線(Receiver operator characteristic curve,ROC curve)及曲線下面積(Area under the curve,AUC),評估AGR2、P16~(INK4)及AGR2與P16~(INK4)聯(lián)合檢測在宮頸病變診斷的準(zhǔn)確性。收集行子宮頸冷刀錐切(Cold Knife Conization,CKC)及宮頸環(huán)形電切手術(shù)(Loop Eelectrosurgical Excision Procedure,LEEP)經(jīng)病理科醫(yī)生確診為切緣陽性、陰性的石蠟切片和完整臨床資料各17例,通過IHC檢測分析其中AGR2的表達(dá)差異,回顧性分析其隨訪資料,研究AGR2表達(dá)與宮頸錐切術(shù)后病灶殘留/復(fù)發(fā)發(fā)生的相關(guān)性。培養(yǎng)子宮頸鱗癌(cervical squamous cell carcinoma,CSCC)細(xì)胞系Ca ski、SiHa,應(yīng)用針對AGR2的siRNA(siRNA-AGR2),分別轉(zhuǎn)染子宮頸鱗癌細(xì)胞,構(gòu)建敲低AGR2表達(dá)水平的宮頸鱗癌細(xì)胞模型,同時設(shè)置陰性對照組siRNA-control,qRT-PCR和Western Blot技術(shù)分析各組細(xì)胞中AGR2的表達(dá)水平,驗(yàn)證轉(zhuǎn)染效率。在構(gòu)建的細(xì)胞模型基礎(chǔ)上,分別通過CCK-8、平板克隆形成及流式細(xì)胞周期觀察下調(diào)AGR2對宮頸癌細(xì)胞體外增殖能力的影響。結(jié)果:IHC結(jié)果顯示,AGR2陽性表達(dá)率隨宮頸病變程度加重呈遞增趨勢,在CC、LSIL、HSIL、SCC組中,AGR2陽性表達(dá)分別為4.3%、38.7%、65.7%、89.2%,四組比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(χ2=82.760,P0.001);組內(nèi)比較:宮頸炎組與LSIL組陽性率比較,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=14.195,P0.001);LSIL組與HSIL組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=10.667,P0.001);HSIL組與SCC組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=22.823,P0.001)。P16~(INK4)陽性表達(dá)率隨宮頸病變程度加重呈遞增趨勢,在CC、LSIL、HSIL、SCC組中,P16~(INK4)陽性表達(dá)率分別為19.6%、51.6%、70%、91.9%,四組比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(χ2=73.340,P0.001);組內(nèi)比較:宮頸炎組與LSIL組陽性率比較,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=7.971,P0.001);LSIL組與HSIL組,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=6.084,P=0.014,校準(zhǔn)檢驗(yàn)水準(zhǔn)后無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義);HSIL組與SCC組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=28.808,P0.001)。Logistic回歸分析結(jié)果顯示,在CC組對比LHS組、CL組對比HS組、CLH組對比SCC組中,AGR2的OR值分別為6.440、3.022、2.204,P16~(INK4)的OR值分別為1.927、1.795、2.913,提示AGR2、P16~(INK4)與宮頸病變發(fā)生顯著相關(guān),是宮頸癌發(fā)生的危險因素。ROC曲線及AUC結(jié)果顯示,在CC組對比LHS組、CL組對比HS組、CLH組對比SCC組中,AGR2的AUC分別為0.815、0.817、0.847,P16~(INK4)的AUC分別為0.786、0.788、0.860,AGR2與P16~(INK4)聯(lián)合檢測(新變量)AUC分別為0.858、0.851、0.902;AGR2與P16~(INK4)比較AUC,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);AGR2與P16~(INK4)聯(lián)合檢測的AUC均顯著高于AGR2、P16~(INK4)單獨(dú)檢測(P0.05),提示聯(lián)合檢測可以提高宮頸病變診斷效能。IHC結(jié)果顯示,AGR2陽性表達(dá)率在切緣陽性樣本中(88.2%)顯著高于切緣陰性樣本(41.2%)(P0.05),隨訪結(jié)果顯示AGR2表達(dá)率與切緣陽性患者二次手術(shù)率及宮頸病變進(jìn)展相關(guān)。成功構(gòu)建了敲低AGR2的宮頸癌細(xì)胞模型,在宮頸癌細(xì)胞模型的基礎(chǔ)上證實(shí),下調(diào)AGR2能顯著抑制宮頸癌細(xì)胞的體外增殖、克隆能力,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:AGR2在子宮頸病變中有促癌作用,對不同程度宮頸病變的診斷及預(yù)測預(yù)后有一定的臨床價值,可能成為宮頸癌治療新的靶點(diǎn)。
【學(xué)位授予單位】：石河子大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R737.33
【圖文】：

46 44 1 1 0 4.3%31 19 8 3 1 38.7%70 24 10 26 10 65.7%37 4 3 5 25 89.2%46 44 1 1 0 4.3%31 19 8 3 1 38.7%46 44 1 1 0 4.3%70 24 10 26 10 65.7%46 44 1 1 0 4.3%37 4 3 5 25 89.2%31 19 8 3 1 38.7%70 24 10 26 10 65.7%31 19 8 3 1 38.7%37 4 3 5 25 89.2%70 24 10 26 10 65.7%37 4 3 5 25 89.2%

圖 1-2 AGR2 在不同宮頸病變中的表達(dá)（IHC,×400）(P < 0.05)3.2 P16INK4在 CC 組、LSIL 組、HSIL 組、SCC 組中的表達(dá)通過免疫組化 EnVision 兩步法分別檢測 CC 組、LSIL 組、HSIL 組、SCC 組中的表達(dá)中 P16INK4的表達(dá)情況。P16INK4表達(dá)于細(xì)胞漿與細(xì)胞核，陽性表達(dá)呈淺棕、深棕色(圖1-3)。CC 組組織共 46 例，陰性表達(dá) 37 例，陽性表達(dá) 9 例(弱陽性 5 例，中度陽性 2 例，強(qiáng)陽性 2 例)；LSIL 組組織共 31 例，陰性表達(dá) 15 例，陽性表達(dá) 16 例(弱陽性 9 例，中度陽性 5 例，強(qiáng)陽性 2 例)；HSIL 組組織共 70 例，陰性表達(dá) 21 例，陽性表達(dá) 49 例(弱陽性 15 例，中度陽性 18 例，強(qiáng)陽性 16 例)；SCC 組組織共 37 例，陰性表達(dá) 3 例，陽性表達(dá) 34 例(弱陽性 0 例，中度陽性 4 例，強(qiáng)陽性 30 例)。P16INK4在 CC 組、LSIL 組、HSIL 組、SCC 組中的陽性表達(dá)率呈現(xiàn)逐漸遞增的趨勢，依次為 19.6%(9/46)、51.6%(16/31)、70%(49/70)、91.9%(34/37)，四組比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異 (χ2=73.340，P<0.001)；將四組進(jìn)行兩兩比較，CC 與 LSIL 組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=7.971，P=0.005)，CC 與 HSIL 組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=27.678，P<0.001) ，CC 與 SCC 組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=53.356，P<0.001) ，LSIL 與 HSIL 組間差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=6.084，P=0.014) ，LSIL 與 SCC 組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=35.965，P<0.001) ，

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前3條

1 陳紅;杜敏霞;;“牛仔帽”式宮頸冷刀錐切術(shù)對宮頸柱狀上皮外翻預(yù)防作用分析[J];中國醫(yī)藥導(dǎo)報;2013年30期

2 王軍;李銀鳳;馬麗蓉;;宮頸病變診斷與治療的進(jìn)展[J];內(nèi)蒙古醫(yī)學(xué)雜志;2012年09期

3 陽霞;錢德英;陳觀娣;岑堅(jiān)敏;;不同LEEP術(shù)式對年輕CINⅡ～Ⅲ患者術(shù)后病變殘留/復(fù)發(fā)及妊娠結(jié)局的影響[J];實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志;2012年11期

本文編號：2740623