【摘要】：背景與目的卵巢癌(Ovarian Cancer,OC)是臨床上常見的婦科惡性腫瘤,同時也是致死率最高的女性相關(guān)惡性腫瘤之一。卵巢癌發(fā)病隱匿,缺乏典型的早期臨床癥狀以及有效的篩查手段,當患者出現(xiàn)腹脹、腹痛或發(fā)現(xiàn)盆腔腫物就診時,60%-70%患者已被診斷為中晚期。目前卵巢癌的診斷主要借助于影像學(xué)檢查和腫瘤標記物的檢測,但其特異性和敏感性較低。隨著診療手段的不斷提高,卵巢癌的治療主要以手術(shù)治療聯(lián)合化療為主。早期卵巢癌患者可行全面分期手術(shù),晚期卵巢癌患者術(shù)前可在鉑類為基礎(chǔ)的新輔助化療下行腫瘤細胞減滅術(shù),或行腫瘤細胞減滅術(shù)后給予足量、足療程、規(guī)范的以鉑類為基礎(chǔ)的聯(lián)合化療。成纖維細胞生成因子8(firbroblast growth factor 8,FGF8)是成纖維生長因子家族(FGFs)的成員之一,在人類原腸胚時期參與細胞早期分化過程,是胚胎發(fā)育中不可缺少的的生長因子之一。目前相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)FGF8在正常成人組織中呈無表達或低表達狀態(tài),但在某些激素依賴性腫瘤(如前列腺癌、乳腺癌、卵巢癌)中FGF8呈過表達。為了進一步研究FGF8對卵巢癌發(fā)生發(fā)展的影響,我們收集了87例來自鄭州大學(xué)附屬鄭州中心醫(yī)院卵巢切除患者的組織標本。通過免疫組織化學(xué)染色法檢測FGF8在上皮性卵巢癌、良性卵巢腫瘤以及正常卵巢組織中的表達情況,并分析FGF8在卵巢癌組織中的表達水平與患者年齡、臨床分期、組織分級、組織類型、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及患者有無腹水之間的關(guān)系。然后通過慢病毒介導(dǎo)FGF8過表達,旨在探討FGF8對卵巢癌細胞體外遷移能力的影響。方法1.選取2012年01月至2018年12月在鄭州大學(xué)附屬鄭州中心醫(yī)院住院手術(shù)患者術(shù)后卵巢組織石蠟標本,共87例,包括上皮性卵巢癌47例,良性卵巢腫瘤25例,正常卵巢組織15例,卵巢癌患者年齡介于24-82歲之間,平均年齡53.67歲。按照國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟(FIGO)標準手術(shù)病理分期:I-II期19例,III-IV期28例;組織類型:漿液性癌32例,黏液性癌7例,子宮內(nèi)膜樣癌6例,透明細胞癌2例;組織學(xué)分級:中-高分化9例,低分化38例;無腹水者15例,有腹水者32例;術(shù)后證實有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者15例,無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者32例。利用免疫組織化學(xué)染色法檢測FGF8在三種不同卵巢組織中的表達情況,并分析FGF8的表達水平與臨床各病理參數(shù)之間的關(guān)系。2.構(gòu)建FGF8過表達慢病毒載體,包裝慢病毒顆粒HBLV-h-FGF8-3xflagGFP-PURO,實驗組感染卵巢癌細胞SKOV-3及OVCAR-8,使SKOV-3及OVCAR-8過表達FGF8,并設(shè)置未處理的空白組和感染HBLV-GFP-PURO的陰性對照組,采用Western blot技術(shù)檢測卵巢癌細胞內(nèi)FGF8蛋白的表達水平,進一步通過細胞劃痕實驗了解FGF8對卵巢癌細胞遷移能力的影響。3.相關(guān)數(shù)據(jù)分析采用SPSS 20.0版軟件進行處理,組別之間的比較采用卡方檢驗和單因素方差分析,進一步組間兩兩比較采用LSD-t檢驗,P0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果1.FGF8在上皮性卵巢癌組的表達明顯高于良性卵巢腫瘤與正常卵巢組織組,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),而良性卵巢腫瘤與正常卵巢組織之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。且FGF8在上皮性卵巢癌組織中的表達水平與患者的臨床病理分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05),與患者年齡、組織分級、組織類型、有無腹水無統(tǒng)計差異(P0.05)。2.慢病毒感染卵巢癌細胞SKOV-3及OVCAR-8,Western blot結(jié)果顯示實驗組FGF8蛋白高表達。細胞劃痕實驗結(jié)果顯示過表達FGF8的SKOV-3及OVCAR-8實驗組細胞遷移能力均高于相應(yīng)的空白組及陰性對照組(P0.05),而空白組與陰性對照組細胞遷移能力無明顯差異(P0.05)。結(jié)論1.FGF8在上皮性卵巢癌組織中高表達,并與卵巢癌的臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)。2.FGF8促進了卵巢癌細胞的體外遷移能力。
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R737.31
【圖文】：

1.1 免疫組織化學(xué)染色結(jié)果光學(xué)顯微鏡400倍數(shù)下觀察切片，免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示，F(xiàn)GF8在細胞漿內(nèi)表達。圖3.1所示：根據(jù)染色強度及染色百分比情況，A代表FGF8在上皮性卵巢癌組織中表達陰性（-），可見其細胞漿及細胞核均為藍色；B代表FGF8在上皮性卵巢癌組織中表達陽性（+），可見其細胞漿染色為褐色，細胞核為藍色。圖 3.1 免疫組化檢測 FGF8 在上皮性卵巢癌組織中的表達情況（400×）1.2 FGF8 在上皮性卵巢癌、卵巢良性腫瘤及正常卵巢組織中表達情況FGF8在上皮性卵巢癌組織中的陽性表達率為63.83%，在良性卵巢腫瘤組織中的陽性表達率為28.00%，在正常卵巢組織中的陽性表達率13.33%，可見FGF8在上皮性卵巢癌組織中的陽性表達率明顯高于良性腫瘤組及正常卵巢組，且上皮性卵巢癌組與良性卵巢腫瘤組及正常卵巢組兩兩比較均有統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.05）

具體見圖3.2。圖 3.2：熒光顯微鏡下觀察慢病毒感染細胞后熒光顯色情況（100×）注：A: SKOV-3 陰性對照組白光（感染 HBLV-GFP-PURO）；B: SKOV-3 陰性對照組熒 光 顯 色 （ 感 染 HBLV-GFP-PURO ） ； C: SKOV-3 實 驗 組 白 光 （ 感 染HBLV-h-FGF8-3xflag-GFP-PURO）; D: SKOV-3實驗組熒光顯色（感染HBLV-h-FGF8-3xflag-GFP-PURO）; E: OVCAR-8 陰性對照組白光（感染 HBLV-GFP-PURO）；F：OVCAR-8 陰性對照組熒光顯色（感染 HBLV-GFP-PURO）；G: OVCAR-8 實驗組白光（感染HBLV-h-FGF8-3xflag-GFP-PURO ） ； H: OVCAR-8 實 驗 組 組 熒 光 顯 色 （ 感 染HBLV-GFP-PURO）3 慢病毒感染卵巢癌細胞后 FGF8 蛋白檢測結(jié)果過表達慢病毒感染卵巢癌SKOV-3及OVCAR-8細胞后，通過Western blot檢測感染細胞內(nèi)FGF8的表達情況。將SKOV-3及OVCAR-8細胞分別設(shè)置空白組、陰性對照組和實驗組。由于FGF8是一種分泌型蛋白，我們通過檢測位于慢病毒載體下游的flag蛋白間接檢測FGF8蛋白的表達水平（圖3.3、3.4）。實驗結(jié)果顯示過表達慢病毒感染后，實驗組SKOV-3及OVCAR-8細胞內(nèi)的flag蛋白的表達水平明顯高于空白組和陰性對照組。組間比較采用單因素方差分析：對于SKOV-3細胞，F(xiàn)= 64.091，P=0.000，各組間實驗結(jié)果比較采用LSD-t法檢驗，實驗組flag

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本文編號：2738375