【摘要】：子癇前期(preeclampsia,PE)是重要的妊娠期高血壓疾病之一,一般發(fā)生于妊娠20周之后,患者的主要特征表現(xiàn)為高血壓、蛋白尿,嚴重者可導致腦水腫、腦出血、肺水腫、胎盤早剝、胎兒生長受限(fetal growth restriction,FGR)、胎死宮內等并發(fā)癥,是孕產婦及圍產兒病死率升高的原因之一,甚至可直接導致10%-15%的孕產婦死亡�，F(xiàn)有各種學說都不能完全闡明其原因及發(fā)病機制,目前比較公認的兩階段學說認為滋養(yǎng)細胞浸潤異常,螺旋動脈重鑄不良,胎盤血流灌注減少為子癇前期發(fā)病的第一階段;進而出現(xiàn)器官受損,導致各種臨床征象為發(fā)生第二階段。近年來研究發(fā)現(xiàn)胎盤細胞自噬可能與子癇前期的發(fā)病密切相關。多種細胞傳導信號參與細胞自噬調控,其中比較公認的是PI3K/Akt/mTOR(磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/雷帕霉素靶)。哺乳動物雷帕霉素靶蛋白(mammalian Target of Rapamyc,m TOR)則對自噬泡的形成及成熟起抑制作用。BECN 1(Beclin1)基因是哺乳動物參與自噬的特異性基因,是PI3K復合物的組成部分。LC3為微管相關蛋白1和輕鏈3,LC3存在可溶型LC3-I以及膜結合型LC3-II兩種形式,在自噬過程中LC3-I向LC3-II轉化,LC3-II的含量與自噬體數(shù)量呈正相關關系。這三者均是重要的自噬相關蛋白,LC3-II、Beclin1更是被作為自噬標記蛋白。IGF2是一種主要在胚胎期表達的小分子糖蛋白。它具有促進細胞有絲分裂、促進分化,調節(jié)代謝和抗凋亡等作用。有研究顯示在腫瘤組織中IGF2蛋白的異常表達與細胞過度自噬相關。目的:本研究擬檢測IGF2蛋白及自噬相關蛋白m TOR、Beclin1、LC3-II在正常和重度子癇前期(severe preeclampsia,SE)胎盤組織中的表達及相互關系。方法:選擇2015年07月至2017年02月在中國醫(yī)科大學附屬盛京醫(yī)院產科分娩的重度子癇前期患者30例,選取同期分娩無合并癥正常孕婦30例作為對照組。采用Western Blot及免疫組化SP法檢測兩組患者胎盤組織中IGF2蛋白及自噬相關蛋白的表達情況,透射電鏡觀察滋養(yǎng)細胞超微結構及自噬體形成。分析重度子癇前期胎盤組織中IGF2蛋白與自噬相關蛋白表達間的相互關系。結果:免疫組化結果顯示IGF2、Beclin1、LC3-II、mTOR在SE組和對照組胎盤組織中都有表達。SE組IGF2的高表達率為30%,對照組IGF2的高表達率為56.67%,SE組的IGF2的高表達率明顯低于對照組(P0.01);SE組m TOR高表達率為20%,對照組m TOR的高表達率為56.67%,SE組的m TOR的高表達率明顯低于對照組(P0.01);SE組Beclin1的高表達率為76.67%,對照組Beclin1的高表達率為26.67%,SE組的Beclin1的高表達率明顯高于對照組(P0.01);SE組LC3-II的高表達率為60%,對照組LC3-II的高表達率為16.67%,SE組的LC3-II的高表達率明顯高于對照組(P0.01)。Western Blot方法對IGF2、m TOR、Beclin1和LC3-II在SE組和對照組表達的含量進行半定量。結果顯示SE組IGF2的相對含量為0.48±0.16,對照組IGF2的相對含量為1±0.21、SE組IGF2的表達明顯低于對照組(P0.05);SE組m TOR的相對含量為0.44±0.08,對照組m TOR的相對含量為1±0.26,SE組m TOR的表達明顯低于對照組(P0.05);SE組Beclin1的相對含量為3.45±0.95,對照組Beclin1的相對含量為1±0.23,SE組Beclin1的表達明顯高于對照組(P0.05);SE組LC3-II的相對含量為3.50±0.52,對照組LC3-II的相對含量為1±0.17、SE組LC3-II的表達明顯高于對照組(P0.05)。采用Spearman相關分析方法,對SE組中,IGF2的陽性表達率與自噬相關蛋白的mTOR、Beclin1、LC3-II陽性表達率之間的相關性進行比較。IGF2與m TOR的表達率間的相關系數(shù)為0.440,P=0.015;IGF2與Beclin1的表達率間的相關系數(shù)為-0.417,P=0.022;IGF2與LC3-II的表達率間的相關系數(shù)為-0.539,P=0.002;表明IGF2與自噬相關蛋白表達強度間均存在相關性。透射電鏡下可觀察到重度子癇前期胎盤組織細胞質中典型的雙層膜結構的自噬小體以及單層膜結構包繞著尚未分解完全的細胞器的自噬溶酶體的形成。結論:重度子癇前期的胎盤組織中細胞自噬活躍,SE胎盤組織中IGF2的異常表達可能與細胞自噬相關。SE胎盤組織中IGF2表達降低,可能通過m TOR通路調節(jié),導致過度自噬參與子癇前期的發(fā)病。
【學位授予單位】：中國醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R714.244
【圖文】：

中國醫(yī)科大學碩士學位論文3 結果3.1 IGF2 蛋白相對表達水平免疫組化結果顯示，IGF2 在正常對照組中高表達率為 56.67%，在 SE 組中高達率僅為 30% (見表 1 和圖 1)。對照組胎盤組織中 IGF2 的表達明顯高于 SE 組，異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。表 1 免疫組化方法檢測 IGF2 在 SE 組和對照組胎盤組織中的表達情況組別 例數(shù)IGF2/例 高表達率（-/+） (++/+++)（%）SE 組 30 21 9 30對照組 30 13 17 56.67*P＜0.01

圖 2 Western blot 方法顯示 IGF2 在正常對照組及 SE 組胎盤組織中的表達情況（*P<0.03.2 mTOR 蛋白相對表達水平免疫組化結果顯示，mTOR 在正常對照組中高表達率為 56.67%，在 SE 組中表達率為 20% (見表 2 和圖 3)。對照組胎盤組織中 mTOR 的表達明顯高于 SE 組差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。表 2 免疫組化方法檢測 mTOR 在 SE 組和對照組胎盤組織中的表達情況組別 例數(shù)mTOR/例 高表達率（-/+） (++/+++)（%）SE 組 30 24 6 20對照組 30 13 17 56.67*P＜0.01

【參考文獻】

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1 董倩;徐小潔;紀貝貝;范忠義;梁迎春;王濤;葉棋濃;胡毅;;人LC3B基因的真核表達及鑒定[J];生物技術通訊;2015年05期

2 劉蓉;宗實;史娟娟;王s

本文編號：2733022