【摘要】：目的:子癇前期(preeclampsia,PE)作為妊娠期一種復(fù)雜的綜合征,其發(fā)病機(jī)制尚不明確,且臨床上缺乏有效的預(yù)測指標(biāo)。本研究通過對比PE孕婦、健康孕婦以及非妊娠期健康女性外周血中各種細(xì)胞源性微囊泡(cell-derived microvesicles,CMVs)、CMVs清除蛋白以及血小板(platelets,PLT)、白細(xì)胞(white blood cells,WBC)和內(nèi)皮細(xì)胞(endothelial cells,EC)間粘附水平的差異,以及各自分娩前后的變化,初步探討CMVs、CMVs清除蛋白及PLT、WBC、EC間粘附在PE發(fā)病中的臨床意義,試圖為PE的臨床預(yù)測尋找敏感的生物標(biāo)志物,為PE新的治療思路提供一定的理論依據(jù)。方法:第一部分:應(yīng)用流式細(xì)胞技術(shù)檢測PE孕婦、健康孕婦以及非孕期健康女性外周血中CMVs總數(shù)、合體滋養(yǎng)細(xì)胞源性微囊泡(syncytiotrophoblast microvesicles,STBMVs)總數(shù)以及Annexin V陽性(AV+)CMVs、STBMVs、血小板源性微囊泡(platelet-derived microvesicles,PMVs)、內(nèi)皮細(xì)胞源性微囊泡(endothelial-derived microvesicles,EMVs)、白細(xì)胞源性微囊泡(leukocyte-derived microvesicles,LMVs)、紅細(xì)胞源性微囊泡(red blood cell-derived microvesicles,RMVs)水平在各組間的差異,以及PE孕婦、健康孕婦分娩前后的變化。第二部分:應(yīng)用ELISA法檢測PE孕婦、健康孕婦以及非孕期健康女性外周血中CMVs清除蛋白Lactadherin、DEL-1、Annexin V水平在各組間的差異,以及PE孕婦、健康孕婦分娩前后的變化。第三部分:應(yīng)用流式細(xì)胞技術(shù)檢測PE孕婦、健康孕婦以及非妊娠期健康女性外周血中PLT與WBC、PLT與EC間粘附水平,以及PLT表面表達(dá)CD62P的差異,以及分娩前后的變化。結(jié)果:第一部分:(1)妊娠期PE孕婦總CMVs水平升高,分別是健康孕婦的3.3倍、非孕期女性的4.4倍。分娩后,健康孕婦降至分娩前的15.3%~15.8%;PE孕婦降至分娩前水平的5.3%~8.7%。(2)妊娠期PE孕婦Annexin V陽性(AV+)CMVs水平明顯升高,分別是健康孕婦的5.0倍、非孕期女性的15.9倍。分娩后,健康孕婦降至分娩前的12.4%~15.7%;PE孕婦降至分娩前的4.5%~5.3%。(3)妊娠期總STBMVs水平明顯升高,PE孕婦是健康孕婦的4.1倍、非孕期女性的9.6倍;健康孕婦是非孕期女性的2.4倍。分娩后,健康孕婦降至分娩前的20.3%~23.2%;PE孕婦降至分娩前水平的3.5%~6.0%。(4)妊娠期AV+STBMVs水平顯著升高,PE孕婦是健康孕婦的7.7倍、非孕期女性的41.1倍;健康孕婦是非孕期女性的5.4倍。分娩后,健康孕婦降至分娩前的17.1%~20.4%;PE孕婦顯著下降,為分娩前的2.3%~2.9%。(5)妊娠期PE孕婦AV+PMVs水平升高,分別是健康孕婦的4.8倍、非孕期女性的15.5倍。分娩后,健康孕婦產(chǎn)后1天降至分娩前水平的33%,產(chǎn)后3~4天恢復(fù)至分娩前水平;PE孕婦降至分娩前水平的19.3%~21.6%。(6)妊娠期AV+EMVs水平升高,PE孕婦是健康孕婦的2.3倍、非孕期女性的6.6倍;健康孕婦是非孕期女性的2.9倍。分娩后,健康孕婦無明顯變化;PE孕婦降至分娩前水平的38.1%。(7)妊娠期PE孕婦AV+LMVs水平升高,是非孕期女性的10.5倍,與健康孕婦水平無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。分娩后,健康孕婦和PE孕婦水平較分娩前均無明顯變化。(8)妊娠期AV+RMVs水平升高,PE孕婦是健康孕婦的5.2倍、非孕期女性的17.7倍;健康孕婦是非孕期女性的3.4倍。分娩后健康孕婦無明顯下降;PE孕婦降至分娩前水平的24.3%~29.4%。(9)妊娠平均32~33周時(shí),AV+STBMVs、AV+CMVs、總STBMVs和總CMVs診斷PE的預(yù)測界限值依次為3630個(gè)/μl、7995個(gè)/μl、21×10~4個(gè)/μl、66.4×10~4個(gè)/μl。其中AV+STBMVs對預(yù)測PE的診斷價(jià)值最高,其靈敏度、特異度、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值分別為85.4%、97.1%、96.7%和82.5%。第二部分:(1)妊娠期Lactadherin在PE孕婦明顯升高,是健康孕婦的1.7倍、非孕期女性的2.9倍,而健康孕婦與非孕期女性水平無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;在分娩后4天內(nèi),健康孕婦和PE孕婦水平較分娩前均未見明顯變化。(2)妊娠期Lactadherin與AV+CMVs、AV+STBMVs相關(guān)性最高,相關(guān)系數(shù)分別為0.525和0.524。(3)妊娠平均32~33周時(shí),Lactadherin對診斷PE的預(yù)測界限值為2541 pg/ml,其靈敏度、特異度、陽性預(yù)測值以及陰性預(yù)測值分別為57.6%、92.0%、90.5%、62.2%。(4)AV+STBMVs與Lactadherin兩者聯(lián)合檢測預(yù)測PE,比AV+STBMVs單獨(dú)檢測靈敏度提高(97.0%vs 85.4%);比Lactadherin單獨(dú)檢測時(shí),靈敏度大幅度提高(97.0%vs 57.6%),陽性預(yù)測值明顯升高(95.7%vs 62.2%)。(5)妊娠期PE孕婦外周血中DEL-1的水平與非孕期女性、健康孕婦無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;但分娩后,健康孕婦降至分娩前的74.3%~80.0%;PE孕婦降至分娩前水平的68.7%~87.5%。(6)妊娠期PE孕婦外周血中Annexin V水平與非孕期女性、健康孕婦相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;在分娩后4天內(nèi),健康孕婦和PE孕婦水平較分娩前均未見明顯變化。第三部分:(1)妊娠期PE孕婦PLT-WBC粘附比例升高,分別是健康孕婦的1.6倍、非孕期女性的4.1倍,健康孕婦是非孕期女性的2.5倍。分娩后,健康孕婦PLT-WBC粘附比例升高至分娩前的1.6倍,而產(chǎn)后3~4天內(nèi)PE孕婦未見明顯變化。(2)妊娠期PE孕婦PLT-EC粘附水平與非孕期女性、健康孕婦無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;分娩后健康孕婦和PE孕婦水平亦無明顯變化。(3)妊娠期PE孕婦PLT表面CD62P表達(dá)率升高,分別是健康孕婦的3.4倍、非孕期女性的7.4倍。健康孕婦PLT表面CD62P表達(dá)率在產(chǎn)后3~4天降至分娩前的72.7%;分娩后,PE孕婦降至分娩前27.0%~43.2%。結(jié)論:第一部分:(1)妊娠期PE孕婦CMVs總數(shù)較正常孕婦增加,以膜表面高表達(dá)磷脂酰絲氨酸(phosphatidylserine,PS)的AV+CMVs升高更為顯著,可能與PE孕婦的高凝狀態(tài)密切相關(guān)。(2)妊娠期PE孕婦各種AV+的CMVs水平比健康孕婦、非孕期女性有不同程度地升高,其中以胎盤源性的AV+STBMVs升高最為顯著;且AV+STBMVs在產(chǎn)后1天迅速降至健康產(chǎn)婦水平,與胎盤娩出后PE孕婦病情可迅速緩解相一致。提示PE孕婦血循環(huán)中AV+STBMVs異常增多可能參與PE的發(fā)病。(3)妊娠32~33周時(shí)診斷PE的預(yù)測價(jià)值從高至低依次為AV+STBMVsAV+CMVs總STBMVs總CMVs。第二部分:(1)妊娠期Lactadherin與AV+CMVs、AV+STBMVs相關(guān)性較強(qiáng),提示膜表面高表達(dá)PS的CMVs可能是Lactadherin代償性增高的主要誘發(fā)因素。(2)妊娠期DEL-1和Annexin V變化在孕婦外周血中的表達(dá)水平相對恒定,可能對PE發(fā)病過程體內(nèi)異常增多的CMVs的清除作用有限。第三部分:PE孕婦外周血中血小板與白細(xì)胞間粘附、血小板活化在PE微血栓栓塞和炎癥反應(yīng)等的病理過程中可能起一定的作用。
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R714.244
【圖文】：

應(yīng)用 Megamix 標(biāo)準(zhǔn)微粒確定微囊泡位置；B，圈選 P1 區(qū)；C，圈選 Counting Beads；D，F(xiàn)ITC-IgG 同型對照；E，AnnexinV EDTA 對照；F，AnnexinV 和 STBMVs 雙陽性區(qū)根據(jù)圖 1.1 FCM 的設(shè)定方法，其中圖 1.1 B 中的 P1 區(qū)為外周血中 CMVs 總數(shù)。圖 1.1 F 中 Q2-1+Q4-1 區(qū)域?yàn)?AV+ CMVs 總數(shù)，Q1-1+Q2-1 區(qū)域?yàn)镕ITC-STBMVs 總數(shù)，Q2-1 區(qū)為 AV+ STBMVs 總數(shù)。流式細(xì)胞儀 CMVs 濃度的計(jì)算方法為 CMV（s個(gè)/μl）=（檢測樣本所含 CMVs數(shù) / 檢測 Counting Beads 數(shù)）×（20240 / 檢測樣本體積 μl ）。圖 1.2 顯示三組研究對象外周血中總 CMVs 水平及分娩前后的變化。K-S 檢驗(yàn)變量為非正態(tài)分布，各組平均值采用中位數(shù)表示。非孕女性組 36.9×104個(gè)/μl、正常孕婦產(chǎn)前、產(chǎn)后 1 天、產(chǎn)后 3～4 天分別為 48.6×104個(gè)/μl、7.7×104個(gè)/μl 和7.5×104個(gè)/μl，PE孕婦產(chǎn)前、產(chǎn)后1天、產(chǎn)后3～4天分別為160.2×104個(gè)/μl、8.6×104個(gè)/μl 和 14.0×104個(gè)/μl。PE 孕婦比正常孕婦、非孕女性外周血的總 CMVs 水平顯著升高（P<0.05），正常孕婦較非孕期女性有升高趨勢，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P=0.337）。PE 孕婦、正常孕婦分娩后總 CMVs 水平都存在明顯下降（P<0.05），正常孕婦產(chǎn)后 1 天和產(chǎn)后 3～4 天水平無明顯差異（P=0.495），PE 組產(chǎn)后 1 天和

應(yīng)用 Megamix 標(biāo)準(zhǔn)微粒確定微囊泡位置；B，圈選 P1 區(qū)；C，圈選 Counting Beads；D，F(xiàn)ITC-IgG 同型對照；E，AnnexinV EDTA 對照；F，AnnexinV 和 STBMVs 雙陽性區(qū)根據(jù)圖 1.1 FCM 的設(shè)定方法，其中圖 1.1 B 中的 P1 區(qū)為外周血中 CMVs 總數(shù)。圖 1.1 F 中 Q2-1+Q4-1 區(qū)域?yàn)?AV+ CMVs 總數(shù)，Q1-1+Q2-1 區(qū)域?yàn)镕ITC-STBMVs 總數(shù)，Q2-1 區(qū)為 AV+ STBMVs 總數(shù)。流式細(xì)胞儀 CMVs 濃度的計(jì)算方法為 CMV（s個(gè)/μl）=（檢測樣本所含 CMVs數(shù) / 檢測 Counting Beads 數(shù)）×（20240 / 檢測樣本體積 μl ）。圖 1.2 顯示三組研究對象外周血中總 CMVs 水平及分娩前后的變化。K-S 檢驗(yàn)變量為非正態(tài)分布，各組平均值采用中位數(shù)表示。非孕女性組 36.9×104個(gè)/μl、正常孕婦產(chǎn)前、產(chǎn)后 1 天、產(chǎn)后 3～4 天分別為 48.6×104個(gè)/μl、7.7×104個(gè)/μl 和7.5×104個(gè)/μl，PE孕婦產(chǎn)前、產(chǎn)后1天、產(chǎn)后3～4天分別為160.2×104個(gè)/μl、8.6×104個(gè)/μl 和 14.0×104個(gè)/μl。PE 孕婦比正常孕婦、非孕女性外周血的總 CMVs 水平顯著升高（P<0.05），正常孕婦較非孕期女性有升高趨勢，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P=0.337）。PE 孕婦、正常孕婦分娩后總 CMVs 水平都存在明顯下降（P<0.05），正常孕婦產(chǎn)后 1 天和產(chǎn)后 3～4 天水平無明顯差異（P=0.495），PE 組產(chǎn)后 1 天和

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6 向t

本文編號(hào)：2732683