【摘要】：目的:探討孕激素(Progesterone,P)及磷脂酰肌醇-3-激酶(Phosphoinositide 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(Protein kinase B,PKB/AKT)抑制劑LY294002單獨(dú)及聯(lián)合干預(yù)下調(diào)節(jié)FOXO1表達(dá)對(duì)不同孕激素受體(Progesterone receptor,PR)卵巢癌細(xì)胞增殖、凋亡的作用機(jī)制,為卵巢癌激素治療及靶向治療提供理論依據(jù)。方法:選取生長(zhǎng)良好的卵巢癌細(xì)胞株HO-8910(PR高表達(dá))、SKOV3(PR低表達(dá))作為研究對(duì)象。1.CCK-8法分別檢測(cè)不同濃度P(0、12.5、25、50、100μmol/L)及LY(0、5、10、20、40μmol/L)單獨(dú)作用24h、48h、72h對(duì)兩株細(xì)胞的增殖影響。2.取生長(zhǎng)良好的兩株細(xì)胞均分4組:對(duì)照組(0μmol/L)、實(shí)驗(yàn)組:P組(25μmol/L)、P+LY組(25+20μmol/L)、LY組(20μmol/L),對(duì)照組加入等量不含藥物的培養(yǎng)液。干預(yù)24h行相關(guān)實(shí)驗(yàn)檢測(cè):(1)CCK-8法檢測(cè)兩株細(xì)胞的增殖情況;(2)倒置顯微鏡觀察兩株細(xì)胞生長(zhǎng)形態(tài)改變;(3)Annexin V-FITC/PI雙染法流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)兩株細(xì)胞的凋亡情況;(4)免疫印跡法(Western Blot)檢測(cè)各組中p-AKTSer473、p-FOXO1Ser256、FOXO1、PR-A、PR-B蛋白的表達(dá)情況。結(jié)果:1.CCK-8檢測(cè)兩株細(xì)胞增殖情況:(1)不同濃度P作用:除外12.5μmol/L的P作用24h,與對(duì)照組SKOV3細(xì)胞存活率相比無(wú)明顯差異(P0.05),其余各實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組及各實(shí)驗(yàn)組間細(xì)胞存活率相比均有差異(P0.05)。12.5-100μmol/L的P對(duì)HO-8910細(xì)胞抑制增殖作用顯著高于SKOV3細(xì)胞且細(xì)胞存活率呈劑量-效應(yīng)與時(shí)間-效應(yīng)依賴性降低。(2)不同濃度LY干預(yù):除外5μmol/L的LY作用24h、48h對(duì)兩株細(xì)胞抑制增殖能力無(wú)明顯差異(P0.05),其余各實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組及各實(shí)驗(yàn)組間細(xì)胞存活率相比均有差異(P0.05)。5-40μmol/L的LY對(duì)HO-8910、SKOV3細(xì)胞抑制增殖作用相似且細(xì)胞存活率呈劑量-效應(yīng)與時(shí)間-效應(yīng)依賴性下降。(3)P(25μmol/L)及LY(20μmol/L)聯(lián)合作用24h,HO-8910、SKOV3細(xì)胞存活率分別為45.95±1.70%、72.23±2.08%。與藥物單獨(dú)作用相比,均為P+LY組抑制增殖效果最顯著(P0.05),且對(duì)HO-8910細(xì)胞抑制增殖作用較SKOV3細(xì)胞明顯。2.倒置顯微鏡觀察兩株細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變:對(duì)照組HO-8910、SKOV3呈上皮樣細(xì)胞生長(zhǎng),類圓形、梭形、鋪路石樣排列緊湊貼壁生長(zhǎng),細(xì)胞邊界清晰。實(shí)驗(yàn)組HO-8910細(xì)胞間隙增大并可見(jiàn)細(xì)胞碎片,細(xì)胞粘附性變差,貼壁細(xì)胞減少,懸浮細(xì)胞增多,細(xì)胞呈長(zhǎng)梭形不規(guī)則改變,且鏡下P+LY組形態(tài)變化最顯著;SKOV3細(xì)胞P組形態(tài)變化不顯著,P+LY組與LY組細(xì)胞間隙增大,部分細(xì)胞呈多角形,界限不清有融合現(xiàn)象,未見(jiàn)明顯漂浮細(xì)胞。3.兩株細(xì)胞凋亡情況:(1)與對(duì)照組相比,各實(shí)驗(yàn)組凋亡率均增加(P0.05);(2)與藥物的單獨(dú)作用相比,均為P+LY組凋亡率最高(P0.05);(3)P組及P+LY組對(duì)HO-8910促凋亡作用較SKOV3顯著增高,兩者凋亡率相比(P0.05);(4)LY組對(duì)兩株細(xì)胞誘導(dǎo)凋亡作用相比,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。4.兩株細(xì)胞Western Blot結(jié)果顯示:(1)與對(duì)照組相比,各實(shí)驗(yàn)組p-AKTSer473、p-FOXO1Ser256表達(dá)降低,FOXO1表達(dá)增加,且均為P+LY組p-AKTSer473、p-FOXO1Ser256降低最顯著,FOXO1增加最明顯;(2)P組及P+LY組作用下,對(duì)HO-8910降低p-AKTSer473、p-FOXO1Ser256,上調(diào)FOXO1能力較SKOV3顯著,兩者蛋白表達(dá)相比(P0.05);(3)而LY組一定時(shí)間及濃度下,對(duì)兩細(xì)胞株p-AKTSer473、p-FOXO1Ser256、FOXO1表達(dá)無(wú)顯著差異(P0.05);(4)雖然藥物干預(yù)后與對(duì)照組PR-B、PR-A表達(dá)相比無(wú)明顯差異(P0.05),但兩細(xì)胞株間PR-B、PR-A表達(dá)相比(P0.05),對(duì)兩細(xì)胞株P(guān)R-B/PR-A比值進(jìn)一步分析,顯示HO-8910細(xì)胞PR-B在PR中所占比例較SKOV3細(xì)胞增加顯著(P0.05)。結(jié)論:1.孕激素可能主要通過(guò)PR-B介導(dǎo)下調(diào)PI3K/AKT活性,促進(jìn)FOXO1的表達(dá),從而影響HO-8910、SKOV3卵巢癌細(xì)胞的增殖、凋亡。2.LY294002對(duì)抑制PI3K/AKT活化,其上調(diào)FOXO1的作用機(jī)制可能與PR表達(dá)水平無(wú)關(guān)。3.孕激素及LY294002聯(lián)合應(yīng)用對(duì)卵巢癌HO-8910、SKOV3細(xì)胞抑制增殖、誘導(dǎo)凋亡具有協(xié)同作用。
【學(xué)位授予單位】：遵義醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R737.31
【圖文】：

與對(duì)照組相比，細(xì)胞活性顯著降低且細(xì)胞增殖活性呈時(shí)間-效應(yīng)、劑量-效應(yīng)依賴性降低關(guān)系。（見(jiàn)表 1，圖1）對(duì)于 SKOV3 細(xì)胞，12.5μmol/L 的 P 作用 24h 后，與對(duì)照組細(xì)胞存活率相比，差異不明顯（P>0.05），隨著作用時(shí)間 48h、72h 延長(zhǎng)，與對(duì)照組細(xì)胞存活率相比（P<0.05）。其余各組細(xì)胞存活率比較均有顯著差異，增殖活性具有時(shí)間-效應(yīng)與劑量-效應(yīng)依賴性降低趨勢(shì)。（見(jiàn)表 2，圖 2）一定時(shí)間及濃度作用下，P 對(duì) HO-8910 細(xì)胞抑制增殖作用顯著強(qiáng)于 SKOV3 細(xì)胞。我們將采用 25μmol/L 的 P 作用時(shí)間為 24h 用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)研究。表 1 不同濃度的 P 作用 24 h、48 h、72 h 后 HO-8910 細(xì)胞的存活率（ x ±s

圖 2 不同濃度 P 作用 24 h、48 h、72 h 后 SKOV3 細(xì)胞存活率曲線3.12 CCK-8 檢測(cè)不同濃度 LY 對(duì) HO-8910、SKOV3 細(xì)胞增殖活性的影響對(duì)于 HO-8910、SKOV3 細(xì)胞，LY 干預(yù)下各實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞存活率與未給藥組相比，細(xì)胞增殖活性均受到抑制（P<0.05）；相同濃度 LY 分別作用 24h、48h、72h 的各時(shí)間段實(shí)驗(yàn)組存活率比較，除外 5μmol/L 的 LY 作用 24h、48h 對(duì)兩株細(xì)胞抑制增殖能力無(wú)明顯差異（P>0.05），其余各組均有顯著差異；相同時(shí)間以不同濃度 LY 作用后各濃度組存活率比較（P<0.05）。當(dāng) LY 在 5-40μmol/L 干預(yù)下，對(duì)兩株細(xì)胞增殖活性具有劑量-效應(yīng)與時(shí)間-效應(yīng)依賴性降低關(guān)系。（見(jiàn)表 3-4，圖 3-4）但總體來(lái)說(shuō)，不同濃度 LY 干預(yù)下對(duì) HO-8910、SKOV3 細(xì)胞抑制增殖作用相似。我們將采用 20μmol/L 的 LY 作用時(shí)間為 24h 用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)研究。

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 陸曉e

本文編號(hào)：2727744