【摘要】：目的本研究在體外培養(yǎng)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞Ishikawa的基礎(chǔ)上,明確高水平棕櫚酸(Palmic Acid,PA)是否通過DNMT1/3b抑制KLF4表達(dá),從而促進(jìn)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞的增殖、侵襲和遷移能力,并探討其可能的分子機(jī)制,為臨床尋找治療肥胖相關(guān)子宮內(nèi)膜癌發(fā)生、發(fā)展的分子靶標(biāo),提供理論依據(jù)。方法(1)體外培養(yǎng)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞Ishikawa,分別用20μM及50μM PA作用于癌細(xì)胞。(2)轉(zhuǎn)染過表達(dá)質(zhì)�；騭i RNA,分別上/下調(diào)KLF4、DNMT1和DNMT3b,q RT-PCR和Western Blot技術(shù)檢測DNMT1、DNMT3b、KLF4、P53、Ki67以及MMP2的m RNA和蛋白表達(dá)水平。(3)運(yùn)用CCK-8、Transwell及劃痕實(shí)驗(yàn),檢測對Ishikawa細(xì)胞增殖、侵襲和遷移能力的影響。(4)應(yīng)用SPSS 17.0軟件對數(shù)據(jù)分析。數(shù)據(jù)分析采用數(shù)據(jù)正態(tài)分布使用t檢驗(yàn)和數(shù)據(jù)非正態(tài)分布使用秩和檢驗(yàn),多組間相互比較通常采用單因素方差分析。P0.05認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果1.PA可影響KLF4及相關(guān)基因的表達(dá),并導(dǎo)致子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞的生物學(xué)行為發(fā)生變化(1)20μM、50μM PA分別作用于Ishikawa細(xì)胞24小時后,20μM組結(jié)果顯示,與對照組相比,KLF4 m RNA表達(dá)水平顯著降低(P0.05),Ki67、MMP2 m RNA表達(dá)水平顯著升高(P0.05)。50μM組結(jié)果顯示,與對照組相比,KLF4和P53的m RNA及蛋白表達(dá)水平均顯著降低(P0.05),Ki67及MMP2的m RNA及蛋白表達(dá)水平均顯著升高(P0.05)。(2)20μM、50μM PA分別作用于Ishikawa細(xì)胞24和48小時后,與對照組相比,細(xì)胞的侵襲和遷移能力均顯著升高(P0.05),但對細(xì)胞的增殖能力無顯著影響(P0.05)。2.KLF4可影響下游相關(guān)基因的表達(dá),并導(dǎo)致子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞的生物學(xué)行為發(fā)生變化(1)上調(diào)KLF4 24 h后,Ki67、MMP2 m RNA及蛋白表達(dá)水平均顯著低于對照組(P0.05),上調(diào)KLF4 24和48 h后,Ishikawa細(xì)胞的增殖、侵襲和遷移能力均顯著低于對照組(P0.05)。(2)下調(diào)KLF4 24 h后,與對照組相比,P53 m RNA及蛋白表達(dá)水平均顯著降低(P0.05),Ki67、MMP2 m RNA及蛋白表達(dá)水平均顯著升高(P0.05);下調(diào)KLF4 24和48 h后,與對照組相比,Ishikawa細(xì)胞的侵襲和遷移能力均顯著升高(P0.05)。3.PA通過抑制子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞KLF4及下游基因的表達(dá),導(dǎo)致細(xì)胞生物學(xué)行為的變化(1)50μM PA作用于子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞Ishikawa的同時,上調(diào)KLF4 24 h后,與對照組相比,P53 m RNA表達(dá)水平顯著升高(P0.05),Ki67、MMP2 m RNA及蛋白表達(dá)水平均顯著降低(P0.05)。(2)50μM PA作用于子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞Ishikawa的同時,上調(diào)KLF4 24和48 h后,與對照組相比,Ishikawa細(xì)胞的增殖、侵襲和遷移能力均顯著降低(P0.05)。4.PA通過上調(diào)甲基轉(zhuǎn)移酶(DNMT1/3b)抑制KLF4表達(dá)(1)子宮內(nèi)膜癌患者癌組織中DNMT1、DNMT3b的m RNA及蛋白表達(dá)水平均顯著高于非癌個體子宮內(nèi)膜組織(P0.05)。(2)20μM、50μM PA作用于Ishikawa細(xì)胞24小時后,與對照組相比,DNMT1、DNMT3b m RNA及蛋白表達(dá)水平均顯著升高(P0.05)。(3)下調(diào)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞Ishikawa DNMT1/3b表達(dá)24 h后,與對照組相比,KLF4 m RNA及蛋白表達(dá)水平均顯著升高(P0.05)。(4)50μM PA作用于子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞Ishikawa的同時,下調(diào)DNMT1/3b 24 h后,與對照組相比,KLF4 m RNA及蛋白表達(dá)水平均顯著升高(P0.05)。結(jié)論1.PA可能通過抑制KLF4的表達(dá),導(dǎo)致下游相關(guān)癌基因、抑癌基因的表達(dá)紊亂,最終促進(jìn)了子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞Ishikawa的增殖、侵襲和遷移能力。2.PA可能通過促進(jìn)DNA甲基轉(zhuǎn)移酶DNMT1/3b的表達(dá),抑制子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞Ishikawa KLF4的表達(dá)。
【學(xué)位授予單位】：石河子大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R737.33
【圖文】：

不同濃度PA作用于Ishikawa細(xì)胞24h、48h、72h、96h后，CCK-8檢測活細(xì)胞數(shù)目

不同濃度PA刺激Ishikawa細(xì)胞24h后，KLF4、P53、Ki67、MMP2表達(dá)水平

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前4條

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本文編號：2724576