【摘要】：研究一:孕期雙酚A暴露對子代雌鼠青春期發(fā)育提前與下丘腦Pc G蛋白關(guān)鍵基因甲基化和相關(guān)激素水平的影響目的探討孕期母體雙酚A(BPA)暴露對子代雌鼠青春期提前、下丘腦調(diào)控青春期啟動的Pc G蛋白關(guān)鍵基因Eed、Ezh甲基化水平以及青春期發(fā)育相關(guān)激素水平的影響;同時探討下丘腦Pc G蛋白關(guān)鍵基因甲基化在聯(lián)結(jié)孕期母體BPA暴露與子代青春期發(fā)育提前中的作用。方法將40只受孕CD-1小鼠隨機均分為對照組(玉米油)、低劑量組(8 mg/kg)、中劑量組(40 mg/kg)和高劑量組(200 mg/kg)。于妊娠1~18天(GD 1~18),每日對暴露組進行BPA灌胃染毒,對照組則進行玉米油灌胃。子代仔鼠出生后通過肛門與生殖器之間的距離判斷性別。出生后21天(PND 21)天將子代小鼠斷乳,并且分開飼養(yǎng)。PND 21~33,每日觀察子代雌鼠陰道開口情況,對已經(jīng)陰道開口的雌鼠進行陰道涂片,觀察涂片細胞變化以判斷其動情階段。PND 1、2、3、7、14、21、28、33天稱量雌鼠重量。于PND 34,全部子代雌鼠經(jīng)眼球穿刺取血處死,收集下丘腦組織。使用放射免疫法(RIA)檢測子代雌鼠血清中Kisspeptin-10、促性腺激素釋放激素(Gn RH)激素水平,酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測子代雌鼠血清促卵泡激素(FSH)、促黃體激素(LH)、雌二醇(E2)水平。RT-PCR檢測下丘腦Eed、Ezh m RNA水平,焦磷酸測序檢測Eed、Ezh甲基化水平。結(jié)果與對照組相比,BPA暴露組子代小鼠總數(shù)、雌鼠數(shù)、雄鼠數(shù)未發(fā)生明顯變化,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P值均0.05)。中、高劑量孕期母體BPA暴露組子代雌鼠比例均低于低劑量組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P值均0.05),而與對照組相比,各劑量BPA暴露組子代雌鼠比例差異均無統(tǒng)計學(xué)變化(P值均0.05)。與對照組相比,8 mg/kg、40 mg/kg和200 mg/kg孕期母體BPA暴露組的子代雌鼠體重增長差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P值均0.05)。各劑量BPA暴露組的子代雌鼠陰道開口時間和第一次動情時間均早于對照組,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P值均0.05)。各劑量BPA暴露組PND 28陰道開口率均高于對照組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。而動情期時間在各組之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。與對照組相比,8 mg/kg BPA暴露組動情周期時間增加,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。孕期母體各劑量BPA暴露組子代雌鼠Eed1和Eed2甲基化水平均高于對照組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P值均0.05)。與對照組相比,各劑量BPA暴露組Ezh1甲基化水平差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。與對照組相比,孕期母體BPA暴露組Ezh2甲基化水平均明顯增加,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P值均0.05)。孕期各劑量BPA暴露組子代雌鼠Eed1和Eed2的m RNA表達水平均低于對照組,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P值均0.05)。對于Ezh1 m RNA表達水平,BPA暴露組與對照組之間差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。與對照組相比,8 mg/kg和40 mg/kg BPA暴露組Ezh2m RNA表達水平降低,而200 mg/kg BPA暴露組Ezh2 m RNA有所增加,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P值均0.05)。各劑量BPA暴露組的子代雌鼠血清Kisspeptin-10與Gn RH水平均高于對照組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P值均0.05)。8 mg/kg BPA暴露組血清LH水平與對照組相比有所降低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。與對照組相比,孕期母體各劑量BPA暴露組子代雌鼠血清FSH、E2水平差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P值均0.05)。對照組、8 mg/kg和40 mg/kg BPA暴露組中,青春期提前的子代雌鼠Eed1、Eed2、Ezh2基因甲基化、Kisspeptin-10水平均要高于青春期未提前的子代雌鼠;而在200 mg/kg BPA暴露組中,青春期提前的子代雌鼠Eed1、Ezh2甲基化、Kisspeptin-10、Gn RH水平要高于青春期未提前的子代雌鼠,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P值均0.05)。BPA暴露組Eed1、Eed2、Ezh2基因甲基化、激素水平與青春期提前之間的相關(guān)系數(shù)要高于對照組。BPA對青春期提前未產(chǎn)生直接影響,路徑系數(shù)未達到顯著性水平(P0.05);BPA通過Eed2、Ezh2基因甲基化對青春期提前產(chǎn)生間接影響,路徑系數(shù)達到顯著性水平(P0.05)。結(jié)論本研究結(jié)果表明孕期母體BPA暴露會導(dǎo)致子代雌鼠青春期發(fā)育提前,并且增加子代雌鼠下丘腦Eed、Ezh基因的甲基化程度。而且證明Eed、Ezh基因甲基化在孕期母體BPA暴露與子代雌鼠青春期提前的中介效應(yīng)。這表明孕期母體BPA暴露引起青春期發(fā)育提前的機制與這兩個基因的甲基化程度增高有關(guān)。研究二:孕期雙酚A暴露對子代雌鼠青春期發(fā)育提前影響的關(guān)鍵期研究目的研究不同孕期母體BPA暴露對子代雌鼠青春期發(fā)育提前以及下丘腦Pc G蛋白關(guān)鍵基因甲基化的影響,探討孕期母體BPA暴露影響子代雌鼠青春期發(fā)育提前的“關(guān)鍵期”。方法48只受孕CD-1小鼠隨機均分為孕早期組、孕中期組、孕晚期組,每組再進一步隨機分成對照組(玉米油)和BPA染毒組(8 mg/kg)。于GD 1~6天,對孕早期染毒組進行BPA灌胃暴露,對照組進行玉米油灌胃;于GD 7~12,對孕中期染毒組進行BPA灌胃暴露,對照組進行玉米油灌胃;于GD 13~18,對孕晚期染毒組進行BPA灌胃暴露,對照組進行玉米油灌胃。子代仔鼠出生后通過肛門與生殖器之間的距離判斷性別。PND 21將子代小鼠斷乳,并且按照比例分開飼養(yǎng)。PND 21~33,每日觀察子代雌鼠陰道開口情況,對已經(jīng)陰道開口的雌鼠進行陰道涂片,觀察涂片細胞變化以判斷其動情階段。于PND 1、7、14、21、28、33天稱量雌鼠重量。于PND 34,全部子代雌鼠經(jīng)眼球穿刺取血處死,收集下丘腦組織。使用RIA檢測子代雌鼠血清檢測血清中Kisspeptin-10、Gn RH激素水平。RT-PCR檢測下丘腦Eed、Ezh m RNA水平。焦磷酸測序檢測Eed、Ezh甲基化水平。結(jié)果與對照組相比,不同孕期8 mg/kg BPA暴露的子鼠數(shù)量、雌鼠數(shù)量、雄鼠數(shù)量、雌鼠比例均無統(tǒng)計學(xué)差異(P值均0.05)。與對照組相比,各孕期母體BPA暴露組子代雌鼠體重增長差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P值均0.05)。不同孕期給予母體8 mg/kg BPA灌胃處理后,與對照組相比,孕中期母體8mg/kg BPA染毒組的子代雌鼠陰道開口時間較早,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),而孕早期、孕晚期8 mg/kg BPA染毒組陰道開口均無統(tǒng)計學(xué)差異(P值均0.05)。孕中期母體BPA暴露的子代雌鼠陰道開口提前率高于孕中期對照組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。與對照組相比,不同孕期母體BPA暴露的子代雌鼠動情期時間、動情周期時間差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P值均0.05)。不同孕期母體BPA暴露后,子代雌鼠Eed1甲基化程度均高于對照組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P值均0.05);而對于Eed2甲基化檢測結(jié)果顯示,與對照組相比,孕中期BPA染毒組甲基化水平明顯增加,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。不同孕期母體BPA暴露子代雌鼠Ezh1甲基化水平與對照組相比差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P值均0.05);與對照組相比,孕中、晚期母體8 mg/kg BPA暴露會增加子代雌鼠下丘腦Ezh2甲基化水平,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P值均0.05)。孕中、晚期母體給予8 mg/kg BPA灌胃暴露會導(dǎo)致子代雌鼠下丘腦Eed1 m RNA表達水平低于對照組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P值均0.05);不同孕期母體BPA暴露組子代雌鼠Eed2 m RNA表達水平均低于對照組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P值均0.05);而對于Ezh基因表達檢測,結(jié)果顯示孕中期母體BPA染毒組的子代雌鼠Ezh1 m RNA表達水平要低于對照組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);而孕早、中期母體BPA暴露的子代雌鼠Ezh2 m RNA表達水平低于對照組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P值均0.05)。孕早期暴露組的子代雌鼠血清Kisspeptin-10含量低于對照組,而孕中期、孕晚期暴露組子代雌鼠血清Kisspepitn-10水平要高于對照組;孕中期、孕晚期BPA暴露組Gn RH水平均高于對照組,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P值均0.05)。結(jié)論本研究通過對不同孕期母體BPA暴露對子代雌鼠青春期提前、血清激素水平和青春期啟動基因影響的研究,發(fā)現(xiàn)孕中期母體BPA暴露顯著提前子代雌鼠青春期啟動時間,并且發(fā)現(xiàn)在孕中、晚期暴露于BPA的子代雌鼠青春期啟動基因甲基化程度明顯增加。這表明孕期母體BPA暴露對子代雌性青春期提前影響的“關(guān)鍵期”可能在孕中、晚期。
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R715.3

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 徐耿;蘇普玉;;童年期雙酚A暴露對女童青春期發(fā)育提前的影響[J];中國兒童保健雜志;2016年07期

2 王紅;郝加虎;陶芳標;;環(huán)境內(nèi)分泌干擾物與青春發(fā)動時相提前[J];實用兒科臨床雜志;2009年20期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 李昱辰;青春期前雙酚A暴露對大鼠卵泡發(fā)育的影響及其相關(guān)基因的表達與調(diào)控[D];福建醫(yī)科大學(xué);2013年

本文編號：2713992