【摘要】：目的:探討miR-3162-5p對(duì)人宮頸癌(Cervical cancer,CC)SiHa細(xì)胞增殖、遷移和侵襲能力的影響。生物信信息學(xué)預(yù)測(cè)miR-3162-5p的潛在靶基因,篩選靶基因富集的高分通路,初步分析驗(yàn)證RAS信號(hào)通路中miR-3162-5p的潛在靶基因。方法:構(gòu)建重組慢病毒miR-3162-5p模擬物(miR-3162-5p-LV)、miR-3162-5p模擬物空載組(LV-NC)、miR-3162-5p抑制物(miR-3162-5p-IN)、miR-3162-5p抑制物空載組(IN-NC),分別轉(zhuǎn)染宮頸癌SiHa細(xì)胞。采用CCK-8法對(duì)比轉(zhuǎn)染miR-3162-5p-LV、LV-NC及miR-3162-5p-IN、IN-NC后SiHa細(xì)胞增殖能力的區(qū)別;劃痕實(shí)驗(yàn)對(duì)比轉(zhuǎn)染miR-3162-5p-LV、LV-NC及miR-3162-5p-IN、IN-NC后SiHa細(xì)胞遷移能力區(qū)別;Transwell實(shí)驗(yàn)對(duì)比轉(zhuǎn)染miR-3162-5p-LV、LV-NC及miR-3162-5p-IN、IN-NC后SiHa細(xì)胞遷移、侵襲能力區(qū)別。檢索各microRNA數(shù)據(jù)庫如miRBase、miRWalk、miRTarBase等,運(yùn)用Targetscan在線生物軟件預(yù)測(cè)miR-3162-5p的可能靶基因。檢索多個(gè)信號(hào)通路網(wǎng)站如KEGG、STRING、COREMINE等,運(yùn)用生物信息軟件microRNA pathway分析通路閾值,選擇靶基因富集數(shù)目排名靠前的信號(hào)通路;運(yùn)用Oncomine網(wǎng)絡(luò)在線免費(fèi)芯片數(shù)據(jù)庫,查詢靶基因富集數(shù)目最多的信號(hào)通路上所有可以在KEGG上搜索到的基因在宮頸癌組織和非癌組織中的差異表達(dá)情況;利用STRING和Cytoscape構(gòu)建蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò)(PPI)和從PPI中模塊分析;根據(jù)GEPIA在線數(shù)據(jù)庫關(guān)聯(lián)已有臨床分析,應(yīng)用GEPIA的相關(guān)Kaplan-Meier曲線逐個(gè)查詢關(guān)鍵基因在CC患者中總體生存率和無病生存率,篩選出有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的關(guān)鍵基因;根據(jù)生存分析結(jié)果,針對(duì)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義關(guān)鍵基因,運(yùn)用免疫組織化學(xué)S-P法初步驗(yàn)證這些基因在CC癌組織和非癌組織中的表達(dá)情況;RASA4是一個(gè)作用于RAS信號(hào)通路上GDP/GTP循環(huán)的RasGAP家族的一個(gè)分子,用Western blot驗(yàn)證轉(zhuǎn)染了miR-3162-5p-LV、LV-NC、miR-3162-5p-IN、IN-NC后SiHa細(xì)胞RASA4蛋白表達(dá)的區(qū)別。結(jié)果:轉(zhuǎn)染miR-3162-5p-LV后,宮頸鱗癌SiHa細(xì)胞的增殖、遷移能力均增高;轉(zhuǎn)染miR-3162-5p-IN后,宮頸鱗癌SiHa細(xì)胞的增殖、遷移能力有所下降;CCK-8法對(duì)比轉(zhuǎn)染miR-3162-5p-LV后SiHa細(xì)胞增殖能力增高(p0.05),轉(zhuǎn)染miR-3162-5p-IN后SiHa細(xì)胞增殖能力下降(p0.05);劃痕實(shí)驗(yàn)對(duì)比SiHa細(xì)胞轉(zhuǎn)染miR-3162-5p-LV后遷移能力增高(p0.05),轉(zhuǎn)染miR-3162-5p-IN后遷移能力下降(p0.05)。綜合各個(gè)microRNA pathway在線數(shù)據(jù)庫分析,得出miR-3162-5p靶基因富集于RAS信號(hào)通路的數(shù)目最多(34個(gè));在KEGG上查找RAS信號(hào)通路上的所有基因,隨后用Oncomine芯片數(shù)據(jù)庫篩選出RAS信號(hào)通路在宮頸癌組織和正常宮頸組織中存在差異表達(dá)的基因,其中有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的差異表達(dá)基因77個(gè),包括31個(gè)高表達(dá)基因、42個(gè)低表達(dá)基因和4個(gè)在Oncomine芯片數(shù)據(jù)庫不同數(shù)據(jù)集中既存在高表達(dá)又存在低表達(dá)情況的差異基因;通過STRING和Cytoscape構(gòu)建的蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò)(PPI)和模塊分析中得到RAS通路中在宮頸癌組織和非癌組織中差異表達(dá)的關(guān)鍵基因24個(gè)。關(guān)聯(lián)臨床上有關(guān)于24個(gè)關(guān)鍵基因的生存分析,結(jié)果顯示:FGFR2、GNG7、IGF1、GNB5、PTPN11和VEGFA突變的宮頸癌患者總體生存率較差,KITLG和PTPN11突變的宮頸癌患者無病生存率較差;免疫組織化學(xué)結(jié)果表示PTPN11在宮頸癌組織中存在高表達(dá)的趨勢(shì);Western blot實(shí)驗(yàn)顯示轉(zhuǎn)染miR-3162-5p-LV的SiHa細(xì)胞RASA4蛋白表達(dá)降低,轉(zhuǎn)染miR-3162-5p-IN的SiHa細(xì)胞ASA4蛋白表達(dá)升高。結(jié)論:miR-3162-5p對(duì)人宮頸癌SiHa細(xì)胞的增殖和遷移能力有促進(jìn)作用;miR-3162-5p調(diào)控RAS信號(hào)通路促進(jìn)宮頸癌發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移;PTPN11、RASA4可能是miR-3162-5p調(diào)控的RAS信號(hào)通路的靶基因,RASA4低表達(dá)、PTPN11高表達(dá)都有可能是miR-3162-5p調(diào)控RAS通路促進(jìn)CC發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移的其中機(jī)制。
【圖文】：

1（A）U6 的擴(kuò)增曲線，（B）miRNA-3162-5p-LV、LV-NC、miRNA-3162-5p-IN擴(kuò)增曲線，，黃色為 miRNA-3162-5p-LV 組、藍(lán)色為 LV-NC 組、紅色為 SiHa 組62-5p-IN、紫色為 IN-NC-1 （A）The amplification curves of U6，(B)the amplification curves of miRNA-3iRNA-3162-5p-LV、LV-NC and SiHa. Yellow for miRNA-3162-5p-LV, blue for LVn for miRNA-3162-5p-IN, purple for IN-NC

2-3 miRNA-3162-5p 在各細(xì)胞中的相對(duì)表達(dá)量，miR-3162-5p-LV 2-5p-IN、IN-NC 組和 SiHa 組相比，其 miR-3162-5p 表達(dá)量明顯高于.2-3 The relative expression of miRNA-3162-5p in each group. The3162-5p in miR-3162-5p-LV was significantly higher than that in LV-NC IN-NC group、SiHa group (P < 0.001) 熒光顯微鏡下 SiHa 細(xì)胞的形態(tài)1）熒光顯微鏡下未經(jīng)嘌呤霉素篩選的 SiHa 細(xì)胞的
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R737.33

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 黎欣,曹蘭琴;青年人宮頸癌的特點(diǎn)[J];中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志;2000年06期

2 溫淦f;鄔淑云;張紀(jì)寧;張建華;肖湘;;人宮頸癌的免疫組織化學(xué)分析[J];中國(guó)病理生理雜志;1988年05期

3 楊平;劉薇茜;譚云;伍星欣;趙文先;;人宮頸癌DNA轉(zhuǎn)化活性及轉(zhuǎn)化基因?qū)傩訹J];醫(yī)學(xué)研究通訊;1988年08期

4 黃光琦;Donald Blair;李茵;黃一峰;毛婷;寧其志;王艷萍;袁淑蘭;;人宮頸癌癌基因的研究——轉(zhuǎn)化活性及癌基因?qū)傩澡b定[J];遺傳與疾病;1989年04期

5 袁明生;劉振海;;人宮頸癌基因?qū)υl(fā)性肝癌的診斷價(jià)值[J];現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué);2013年05期

6 徐立新;葉云飛;馬戎;王海琳;;裸小鼠人宮頸癌組織模型的建立及其生物學(xué)特性初探[J];腫瘤防治研究;2010年09期

7 陳玲;于壯;宋揚(yáng);張笑雪;李明君;;刺參黏多糖對(duì)人宮頸癌細(xì)胞凋亡的影響[J];齊魯醫(yī)學(xué)雜志;2009年02期

8 韓曉紅;邵世和;薛延軍;;4HPR對(duì)人宮頸癌細(xì)胞凋亡的影響[J];山東大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2008年12期

9 羅麗莉;于曉軍;陳福;董紅梅;許錦階;;珍香膠囊抗人宮頸癌作用及其機(jī)制研究[J];中國(guó)熱帶醫(yī)學(xué);2007年01期

10 慕明濤;霍滿鵬;蒲力群;張靜;劉俊俊;;白藜蘆醇誘導(dǎo)人宮頸癌細(xì)胞凋亡的作用[J];中國(guó)優(yōu)生與遺傳雜志;2014年09期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 黎欣;徐碧泉;曹蘭琴;;青年人宮頸癌的特點(diǎn)[A];2000全國(guó)腫瘤學(xué)術(shù)大會(huì)論文集[C];2000年

2 熊艷;胡玉玲;魏晚霞;;老年人宮頸癌放療的護(hù)理體會(huì)[A];全國(guó)第13屆老年護(hù)理學(xué)術(shù)交流暨專題講座會(huì)議、全國(guó)中醫(yī)、中西醫(yī)結(jié)合護(hù)理學(xué)術(shù)交流暨專題講座會(huì)議論文匯編[C];2010年

3 朱克修;李旭;陳葳;程小麗;;人宮頸癌細(xì)胞凋亡的研究[A];中國(guó)抗癌協(xié)會(huì)婦科腫瘤專業(yè)委員會(huì)第六次全國(guó)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2001年

4 關(guān)燕清;屈曉丹;;人宮頸癌細(xì)胞凋亡的線粒體膜電位及細(xì)胞周期的研究[A];提高全民科學(xué)素質(zhì)、建設(shè)創(chuàng)新型國(guó)家——2006中國(guó)科協(xié)年會(huì)論文集[C];2006年

5 劉雨聲;牛巨偉;張衛(wèi)華;孔為民;鄧小虹;;聯(lián)合放療熱療對(duì)人宮頸癌HeLa細(xì)胞作用的實(shí)驗(yàn)室研究[A];第三次全國(guó)婦產(chǎn)科基層醫(yī)師學(xué)術(shù)會(huì)議資料匯編[C];2005年

6 程玉峰;魏瑋;馬道新;;Bcl-2與c-mycASODN聯(lián)合轉(zhuǎn)染對(duì)人宮頸癌裸鼠皮下移植瘤抑制作用研究[A];2007第六屆全國(guó)放射腫瘤學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2007年

7 楊建林;韓鈺;周永芹;張偉;;阿司匹林誘導(dǎo)人宮頸癌Caski細(xì)胞凋亡機(jī)制研究[A];2009醫(yī)學(xué)前沿論壇暨第十一屆全國(guó)腫瘤藥理與化療學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2009年

8 笪宇蓉;姚智;鄧為民;洪敬欣;何津巖;楊潔;;YD383,YD438對(duì)人宮頸癌細(xì)胞體外增殖及細(xì)胞周期的影響[A];中國(guó)免疫學(xué)會(huì)第五屆全國(guó)代表大會(huì)暨學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要[C];2006年

9 蘇寶山;楊軍;李牧;田瑋;李宗芳;;苦參堿對(duì)人宮頸癌HeLa細(xì)胞凋亡機(jī)制的研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)病理學(xué)分會(huì)2006年學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2006年

10 李昆;司靜懿;韓日才;張衛(wèi);譚兵兵;趙維敏;劉世德;宋國(guó)興;陳蓮風(fēng);賈麗萍;麥永嫣;曾毅;周宜男;王月珠;林堅(jiān);孫瑜;孟詳金;俞章風(fēng);卜黎明;;人宮頸癌與人乳頭瘤病毒關(guān)系的基因[A];第六次全國(guó)電子顯微學(xué)會(huì)議論文摘要集[C];1990年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 王偉瓊;線粒體融合蛋白2通過線粒體凋亡途徑誘導(dǎo)人宮頸癌HeLa細(xì)胞凋亡[D];華中科技大學(xué);2018年

2 孔為民;Ad-p53及聯(lián)合化、放療對(duì)人宮頸癌HeLa細(xì)胞作用的研究[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2001年

3 李新國(guó);NS-398作用人宮頸癌的差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究[D];中南大學(xué);2006年

4 成海恩;RNAi沉默人宮頸癌CaSki細(xì)胞HPV-16 E6基因表達(dá)的研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2006年

5 韓曉兵;熱休克蛋白和p53在BK通道介導(dǎo)的腫瘤細(xì)胞凋亡與增殖抑制中的作用[D];華中科技大學(xué);2006年

6 干曉琴;腹腔鏡CO_2氣腹對(duì)人宮頸癌CaSki細(xì)胞體外生長(zhǎng)的影響及其機(jī)制的研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2007年

7 周菊梅;不同溫度熱療對(duì)人宮頸癌細(xì)胞凋亡和增殖的影響[D];中南大學(xué);2009年

8 陳秀瑋;白樺脂酸誘導(dǎo)人宮頸癌HeLa細(xì)胞凋亡及機(jī)制的研究[D];黑龍江中醫(yī)藥大學(xué);2012年

9 楊維娜;重組AAV-Endostatin治療人宮頸癌裸鼠模型的實(shí)驗(yàn)研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2011年

10 邢軍;SAHA對(duì)人宮頸癌細(xì)胞化放療增敏作用的研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2011年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 黃巧巧;miR-3162-5p對(duì)人宮頸癌SiHa細(xì)胞增殖、遷移、侵襲能力的影響及其靶基因的初步研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2019年

2 朱夢(mèng)雯;MSNs搭載阿霉素對(duì)人宮頸癌細(xì)胞增殖、凋亡及自噬的影響[D];蘭州大學(xué);2017年

3 李鵬昆;基于轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù)對(duì)人宮頸癌Hela細(xì)胞阿霉素獲得性耐藥機(jī)制的研究[D];西北大學(xué);2018年

4 張帥;SIRT1基因沉默對(duì)人宮頸癌裸鼠移植瘤生長(zhǎng)的影響及機(jī)制研究[D];青島大學(xué);2018年

5 董巍檑;黃荊子乙酸乙酯提取物對(duì)人宮頸癌裸鼠移植瘤生長(zhǎng)及PCNA和VEGF表達(dá)的影響[D];南華大學(xué);2008年

6 祝建芳;聚焦超聲治療人宮頸癌裸鼠皮下移植瘤的實(shí)驗(yàn)研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2008年

7 任艷珍;莪術(shù)水煎液對(duì)人宮頸癌裸鼠移植瘤模型抗腫瘤作用的研究[D];山西中醫(yī)學(xué)院;2015年

8 楊麗肖;雷帕霉素與順鉑聯(lián)合應(yīng)用對(duì)人宮頸癌裸鼠皮下移植瘤生長(zhǎng)的影響[D];大連醫(yī)科大學(xué);2010年

9 賀珊;雷帕霉素對(duì)人宮頸癌裸鼠皮下移植瘤生長(zhǎng)的抑制作用[D];大連醫(yī)科大學(xué);2009年

10 孫英朝;三氧化二砷對(duì)人宮頸癌裸鼠皮下移植瘤的抗腫瘤作用及機(jī)制研究[D];青島大學(xué);2010年

本文編號(hào)：2680919