發(fā)布時(shí)間：2020-05-20 07:15

【摘要】：目的:多囊卵巢綜合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)是青春期及育齡期女性中常見(jiàn)的一種婦科內(nèi)分泌代謝異常疾病,嚴(yán)重影響患者的生育能力。體外受精-胚胎移植術(shù)顯示達(dá)英-35聯(lián)合二甲雙胍處理PCOS后促排卵可獲得較好的卵泡發(fā)育和排卵,從而提高PCOS患者的輔助生殖臨床結(jié)局。但關(guān)于兩者聯(lián)合治療調(diào)控PCOS卵泡發(fā)育的機(jī)制仍未明確。本研究初步探討聯(lián)合治療調(diào)控卵泡發(fā)育的機(jī)制,從而闡述達(dá)英-35聯(lián)合二甲雙胍改善PCOS患者排卵障礙的分子機(jī)制,以便更好地為臨床上應(yīng)用提供理論依據(jù)。方法:5周齡SD雌性大鼠40只適應(yīng)性飼養(yǎng)一周,隨機(jī)分為對(duì)照組10只和造模組30只。造模組大鼠用來(lái)曲唑灌服伴高脂飼料喂養(yǎng)30天;對(duì)照組大鼠予相同劑量的1%羧甲基纖維素(CMC)灌服伴普通飼料喂養(yǎng)。模型構(gòu)建成功后分組為PCOS組(模型組)和達(dá)英-35聯(lián)合二甲雙胍治療組(聯(lián)合治療組)。第一部分:陰道涂片監(jiān)測(cè)各組SD大鼠造模及治療期間動(dòng)情周期的變化;放射免疫法分別測(cè)定SD大鼠血清中空腹胰島素(fasting insulin,FINS)、促卵泡激素(follicle-stimulating hormone,FSH)、(luteinizing hormone,LH)、睪酮(Testosterone,T)等生殖激素含量;蘇木素-伊紅(hematoxylin-eosin,HE)染色觀察卵巢組織結(jié)構(gòu)的變化;免疫組化觀察卵巢顆粒細(xì)胞增殖細(xì)胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)表達(dá)情況;TUNEL法觀察卵巢顆粒細(xì)胞凋亡情況;實(shí)時(shí)熒光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)定量分析PCNA及凋亡相關(guān)基因BAX、BCL-2、CASPASE-3表達(dá)的變化。第二部分:基于MRM方法的靶向代謝組學(xué)測(cè)定卵巢糖能量代謝產(chǎn)物含量的變化;qRT-PCR定量分析糖酵解相關(guān)限速酶GLUT1、單羧酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2/4(monocarboxylate transporter,MCT2/4)、乳酸脫氫酶(lactate dehydrogenase,LDH)、己糖激酶(hexokinase,HK)、磷酸果糖激酶(phosphate fructose kinase,PFK)、丙酮酸激酶(pyruvate kinase,PK)表達(dá)的變化。結(jié)果:(1)經(jīng)動(dòng)情周期監(jiān)測(cè)、激素檢查、形態(tài)學(xué)等指標(biāo)觀察發(fā)現(xiàn)PCOS大鼠動(dòng)情周期紊亂、LH較正常組升高,T升高顯著,胰島素抵抗(IR)明顯、卵巢呈多囊樣改變、顆粒細(xì)胞層數(shù)減少甚至消失,偶見(jiàn)少量黃體,經(jīng)聯(lián)合治療后,動(dòng)情周期恢復(fù)、生殖激素與對(duì)照組無(wú)差別,卵巢內(nèi)可見(jiàn)各級(jí)卵泡,顆粒細(xì)胞層數(shù)多,有大量黃體產(chǎn)生,提示聯(lián)合治療后卵巢可恢復(fù)正常排卵。(2)通過(guò)免疫組化和qRT-PCR檢測(cè)卵巢顆粒細(xì)胞增殖與凋亡的蛋白和基因發(fā)現(xiàn)PCOS大鼠中卵巢顆粒細(xì)胞增殖明顯受到抑制,顆粒細(xì)胞凋亡顯著,經(jīng)過(guò)聯(lián)合治療后顯著提高卵巢顆粒細(xì)胞增殖,抑制卵巢細(xì)胞促凋亡因子(BAX、CASPASE-3)的表達(dá),顯著提高抑凋亡基因(BCL-2)的表達(dá),提示聯(lián)合治療后可促進(jìn)卵泡的發(fā)育。(3)通過(guò)代謝組學(xué)和qRT-PCR檢測(cè)糖酵解產(chǎn)物及限速酶發(fā)現(xiàn)PCOS大鼠卵巢能量代謝途徑發(fā)生紊亂,其中糖酵解產(chǎn)物丙酮酸升高,乳酸含量顯著下降,且糖酵解相關(guān)限速酶發(fā)生顯著變化,其中GLUT1表達(dá)顯著升高、HK表達(dá)顯著降低,同時(shí)MCT4和LDH、PFK、PKM等表達(dá)明顯下調(diào),經(jīng)過(guò)聯(lián)合治療后,乳酸含量顯著升高,糖酵解相關(guān)限速酶上調(diào)明顯,提示卵泡發(fā)生過(guò)程中的能量供應(yīng)主要通過(guò)糖酵解途徑。結(jié)論:達(dá)英-35聯(lián)合二甲雙胍治療PCOS大鼠在卵巢水平上可顯著改善其內(nèi)分泌功能,促進(jìn)卵泡顆粒細(xì)胞增殖并抑制卵巢細(xì)胞凋亡,恢復(fù)卵泡正常排卵,其機(jī)制是通過(guò)提高糖酵解相關(guān)限速酶的表達(dá),顯著提高卵巢乳酸水平,維持卵泡發(fā)育所需要的能量。
【學(xué)位授予單位】：桂林醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R711.75

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