【摘要】：目的:建立超高壓液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)(Ultra performance liquid chromatography tandem mass spectrometry,UPLC-MS/MS)檢測血清類固醇激素睪酮(Testosterone,T)、硫酸脫氫表雄酮(Dehydroepiandrosterone Sulfate,DHEA-S)、雄烯二酮(Androstenedione,AD)和17α-羥孕酮(17α-hydroxy progesterone,17α-OHP)的實驗方法和性能驗證方案。比較UPLC-MS/MS和化學發(fā)光免疫學技術(shù)(Chemiluminescence Immunoassay,CLIA)分別測定血清雄性激素水平高低與多囊卵巢綜合征(Polycystic Ovarian Syndrome,PCOS)的臨床診斷符合率。方法:研究對象選自上海市交通大學附屬瑞金醫(yī)院內(nèi)分泌門診和病房確診的160例PCOS患者。PCOS診斷標準參照2003鹿特丹標準。另外選取146名瑞金醫(yī)院正常女性志愿者作為對照組。參考美國臨床和實驗室標準化委員會(Clinical and Laboratory Standards Institute,CLSI)系列文件,對UPLC-MS/MS測定的血清T、DHEA-S、AD和17α-OHP的檢測低限、精密度、分析測量范圍、正常值參考范圍和準確度等分析性能進行驗證和評價。并從中選取100例受試者血清,將UPLC-MS/MS檢測結(jié)果與不同檢測系統(tǒng)如CLIA和放射免疫分析技術(shù)(Radioimmunoassay,RIA)進行方法學比較。在建立UPLC-MS/MS測定血清類固醇激素方法的基礎(chǔ)上,采用UPLC-MS/MS和CLIA分別測定160例PCOS患者和146例正常對照組血清中的雄性激素--T和DHEA-S水平,并結(jié)合身體質(zhì)量指數(shù)(Body Mass Index,BMI)等參數(shù)繪制受試者工作特征曲線(Receiver Operating Characteristic Curve,ROC Curve),計算曲線下面積(Area Under Curve,AUC),選擇與臨床特征最符合的測定方法為PCOS臨床診斷服務。結(jié)果:UPLC-MS/MS檢測類固醇激素的方法性能驗證:(1)檢測低限:T、DHEA-S、AD和17α-OHP的檢測低限分別為0.02ng/ml、5ng/ml、0.02ng/ml和0.02ng/ml。(2)精密度:T批內(nèi)和總精密度分別為4.86%-5.6%和5.53%-6.17%,DHEA-S批內(nèi)和總精密度分別為2.58%-5.31%和2.88%-7.18%,AD批內(nèi)和總精密度分別為4.81%-5.2%和4.55%-5.89%,17α-OHP批內(nèi)和總精密度分別為3.66%-4.79%和3.58%-4.98%。(3)分析測量范圍:T、DHEA-S、AD和17α-OHP的分析測量范圍分別為0.02-100ng/ml、5-4000ng/ml、0.02-100ng/ml和0.02-100ng/ml。(4)正常值參考范圍:T、DHEA-S、AD和17α-OHP的正常值參考范圍分別為0.15-0.63 ng/ml、423-1929 ng/ml、0.94-4.25 ng/ml和0.03-2.73 ng/ml。(5)回收率:T、DHEA-S、AD和17α-OHP的回收率均在80%-120%范圍內(nèi)。(6)不同檢測系統(tǒng)的比較:UPLC-MS/MS法和CLIA法的測定的結(jié)果呈極顯著正相關(guān),UPLC-MS/MS法和RIA法的測定的結(jié)果呈顯著正相關(guān)。比較UPLC-MS/MS法和CLIA法測定雄性激素水平高低與PCOS的臨床診斷符合率:(1)UPLC-MS/MS測定DHEA-S的AUC(0.789)明顯優(yōu)于CLIA測定DHEA-S的AUC(0.661),有顯著統(tǒng)計學差異(P0.01);UPLC-MS/MS測定T的AUC(0.85)和CLIA測定T的AUC(0.805)無統(tǒng)計學差異(P=0.17)。(2)UPLC/MS-MS測定T及DHEA-S聯(lián)合后的AUC(0.917)明顯優(yōu)于CLIA測定的AUC(0.808),有顯著統(tǒng)計學差異(P0.001);也優(yōu)于其單獨測定T的AUC(P0.01)或DHEA-S的AUC(P0.001)。(3)UPLC/MS-MS測定T,DHEA-S及BMI聯(lián)合后的AUC(0.942)明顯優(yōu)于CLIA測定的AUC(0.847),有極顯著統(tǒng)計學差異(P0.001);也優(yōu)于其兩指標聯(lián)合測定的AUC(P0.05)。結(jié)論:UPLC-MS/MS檢測系統(tǒng)檢測血清類固醇激素T、DHEA-S、AD和17α-OHP的分析性能符合臨床要求,可用于臨床樣本的檢測。UPLC-MS/MS檢測法測定的雄性激素水平聯(lián)合被測者的BMI對PCOS有更高的檢出率,并具有一定的臨床應用和推廣價值。
【圖文】：

圖 1-5：T 的線性圖Fig.1-5: Linearity of T圖 1-6：DHEA-S 的線性圖Fig.1-6: Linearity of DHEA-S

DHEA-S的線性圖
【學位授予單位】：上海交通大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：O657.63;R711.75

【參考文獻】

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