【摘要】：背景子宮內(nèi)膜異位癥(以下簡(jiǎn)稱內(nèi)異癥)是指具有生長(zhǎng)功能的子宮內(nèi)膜組織(間質(zhì)和腺體)出現(xiàn)在在子宮腔被覆蓋內(nèi)膜及官體肌層以外的其他部位的婦科常見(jiàn)疾病。內(nèi)異癥在育齡期婦女中的發(fā)病率約為15%,主要臨床癥狀包括疼痛(痛經(jīng)、性交痛和慢性盆腔痛等)和不孕。內(nèi)異癥疼痛的發(fā)生機(jī)制至今仍然不清,導(dǎo)致其臨床處理匱乏。因而,積極研究?jī)?nèi)異癥疼痛的發(fā)生機(jī)制,獲得特異性分子靶點(diǎn),從而有效預(yù)防和治療內(nèi)異癥疼痛迫在眉睫。內(nèi)異癥是一種雌激素(E2)依賴性疾病,其是內(nèi)異癥發(fā)病的根源,也參與調(diào)控內(nèi)異癥神經(jīng)炎癥性疼痛的整個(gè)發(fā)生過(guò)程。但雌激素通過(guò)哪些途徑或關(guān)鍵環(huán)節(jié)促使內(nèi)異癥病灶炎癥因子產(chǎn)生以及病灶神經(jīng)敏化導(dǎo)致神經(jīng)炎癥性疼痛的發(fā)生至今仍然不十分清楚。肥大細(xì)胞(Mast cell,MC)是免疫炎癥反應(yīng)中的重要細(xì)胞之一。近年研究發(fā)現(xiàn),內(nèi)異癥病灶中活化和脫顆粒的MC較對(duì)照組顯著增加,增加的MC非�？拷≡钪械纳窠�(jīng)纖維;同時(shí)還發(fā)現(xiàn),內(nèi)異癥患者腹腔液中的SCF水平顯著高于對(duì)照組。內(nèi)異癥病灶活化的MC可釋放組胺、類胰蛋白酶、糜蛋白酶及神經(jīng)生長(zhǎng)因子(Nerve growth factor,NGF)等介質(zhì)一方面可損傷神經(jīng)導(dǎo)致神經(jīng)損傷后的炎癥性級(jí)聯(lián)反應(yīng),另一方面還可促進(jìn)神經(jīng)肽物質(zhì)如P物質(zhì)(Substance P,SP)和降鈣素基因相關(guān)肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)的產(chǎn)生,致敏的感覺(jué)神經(jīng)纖維釋放SP、NGF及CGRP進(jìn)一步促進(jìn)MC活化脫顆粒,形成一個(gè)正反饋環(huán),最后導(dǎo)致患者產(chǎn)生疼痛的臨床癥狀。由于MC上存在雌激素受體,因此,內(nèi)異癥病灶局部高水平的雌激素可直接通過(guò)其與MC上的雌激素受體結(jié)合激活MC從而使其發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)。基于以上研究,我們?cè)O(shè)計(jì)了本實(shí)驗(yàn)。首先檢測(cè)比較非內(nèi)異癥女性的子宮內(nèi)膜、內(nèi)異癥女性的在位內(nèi)膜和卵巢內(nèi)異癥囊腫組織的E2濃度和MC數(shù)目與脫顆粒率,同時(shí),進(jìn)一步分析局部E2水平、MC脫顆粒數(shù)目和患者的疼痛程度之間的相關(guān)性;再通過(guò)細(xì)胞共培養(yǎng)后觀察E2促M(fèi)C脫顆粒能否促神經(jīng)軸突生長(zhǎng)及外周敏化;最后通過(guò)E2干預(yù)異位和正常內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞,觀察其是否對(duì)MC有募集作用,并檢測(cè)內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞中促M(fèi)C募集相關(guān)細(xì)胞因子的表達(dá)。研究卵巢內(nèi)異癥囊腫局部高E2水平對(duì)MC募集與脫顆粒的影響,進(jìn)一步探討其在內(nèi)異癥疼痛中的作用,為臨床內(nèi)異癥疼痛的治療提供新思路。目的研究卵巢內(nèi)異癥囊腫局部高E2水平對(duì)MC募集與脫顆粒的影響,并探討其在內(nèi)異癥疼痛中的作用。材料與方法分別通過(guò)ELISA和免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)比較非內(nèi)異癥女性的子宮內(nèi)膜、內(nèi)異癥女性的在位內(nèi)膜和卵巢內(nèi)異癥囊腫組織的E2濃度和MC數(shù)目與脫顆粒率;通過(guò)GraphPad Prism軟件分析局部E2水平、MC脫顆粒數(shù)量和各臨床參數(shù)(尤其是患者的疼痛程度)之間的相關(guān)性;通過(guò)檢測(cè)氨基己糖苷酶(Hexosaminidase,hex)證實(shí)E2能直接刺激MC脫顆粒;細(xì)胞共培養(yǎng)后觀察E2促M(fèi)C脫顆粒后能誘導(dǎo)PC12細(xì)胞軸突生長(zhǎng)及背根神經(jīng)節(jié)(dorsal root ganglion,DRG)細(xì)胞的外周敏化;收集E2干預(yù)異位和正常內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞后的上清,觀察比較其促進(jìn)MC募集的能力;Real-time PCR檢測(cè)E2干預(yù)異位和正常內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞后MC募集相關(guān)細(xì)胞因子的表達(dá)水平。結(jié)果1.卵巢內(nèi)異癥囊腫病灶局部高E2濃度與患者內(nèi)異癥相關(guān)性痛經(jīng)的嚴(yán)重程度呈正相關(guān)。2.卵巢內(nèi)異癥囊腫病灶較對(duì)照內(nèi)膜組織有更高的MC數(shù)目和脫顆粒率,且其與患者內(nèi)異癥相關(guān)性痛經(jīng)的嚴(yán)重程度呈正相關(guān),而與卵巢內(nèi)異癥囊腫的大小無(wú)關(guān)。3.E2能刺激MC脫顆粒釋放生物學(xué)活性的NGF,促PC12細(xì)胞軸突生長(zhǎng)和DRG細(xì)胞Trpv1和Nav1.8表達(dá)上調(diào)。4.E2能促異位間質(zhì)細(xì)胞上調(diào)SCF,TGF-β和MCP1的表達(dá),促異位病灶局部MC的募集。結(jié)論1.卵巢內(nèi)異癥囊腫局部高E2水平和高M(jìn)C脫顆粒率均與患者內(nèi)異癥相關(guān)性痛經(jīng)的嚴(yán)重程度呈正相關(guān)。2.卵巢內(nèi)異癥囊腫局部高E2能促M(fèi)C募集與脫顆粒,通過(guò)釋放生物活性的NGF促神經(jīng)生長(zhǎng)和神經(jīng)敏化,進(jìn)一步參與內(nèi)異癥疼痛。
【圖文】：

正相關(guān)（ｒ邋＝邋０．５７５，Ｐ邋＝邋０．０１６），而與其血清Ｅ２濃度卻無(wú)明顯相關(guān)性（ｒ邋＝邋０．３３９，Ｐ邋＝逡逑０．１８３）（見(jiàn)圖邋２）。逡逑圖２內(nèi)異癥患者痛經(jīng)嚴(yán)重程度與血清或病灶Ｅ２濃度的相關(guān)性分析逡逑Ａ邋８－１邐Ｂ邋８－逡逑荽＆■？？？？？？邐＾邋６－邐？邋？邋？？逡逑§邋？逡逑－％Ａｍ邋邋邐一＾邐目４＂邋？逡逑ｗ邋－邐Ｗ邐？逡逑＾邋２－邋？邋＜２－邋？逡逑＾邋ｆ邋■邋■邐■邐邐邋ｒ邋＝邋０．３３９邐＾邐邐邋｜｜邋邐邋ｒ邋＝邋０．５７５逡逑０邐５００邐１０００邐１邋５００邐２０００邋Ｐ邋＝邋０．１８３邐0邋５００邐１邋０００邐１邋５００邐２０００邋Ｐ邋＝邋０．０１６逡逑Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ邋ｏｆ邋Ｅ２邋ｉｎ邋ｓｅｒｕｍ邐Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ邋ｏｆ邋Ｅ２邋ｉｎ邋ｌｅｓｉｏｎｓ逡逑圖２邋（Ａ）內(nèi)異癥患者痛經(jīng)嚴(yán)重程度與血清Ｅ２濃度的相關(guān)性分析；（Ｂ）內(nèi)異逡逑癥患者痛經(jīng)嚴(yán)重程度與卵巢內(nèi)異癥囊腫組織Ｅ２濃度的相關(guān)性分析；每個(gè)點(diǎn)都代表逡逑１６逡逑

膜組織（未脫顆粒／脫顆粒／總數(shù)；１．７±０．１／０．６邋±０．１／２．３邋±０．２；邋Ｐ＜邋０１００１）和逡逑非內(nèi)異癥患者內(nèi)膜組織（未脫顆粒／脫顆粒／總數(shù)；１．０邋±邋０．１邋／邋０．４邋±邋０．０４邋／邋１．４邋±邋０．１；逡逑Ｐ＜０．００１）（見(jiàn)圖３Ａ）。Ｃ－ｋｉｔ（ＣＤ１１７）染色陽(yáng)性的ＭＣ被認(rèn)為是活化狀態(tài)且絕大部分逡逑發(fā)生脫顆粒，其在三組間的計(jì)數(shù)（＞＜２０物鏡，ｘｌ0目鏡，，ｍｅａｎ士ＳＥＭ），分別為：內(nèi)逡逑異癥患者卵巢異位囊腫活化ＭＣ數(shù)目（４．６邋±０．２）；內(nèi)異癥患者在位內(nèi)膜活化ＭＣ逡逑數(shù)目（０．８邋±０．１）；非內(nèi)異癥患者內(nèi)膜組織活化ＭＣ數(shù)目（０．５邋±０．１）邋（Ｊ＃圖３Ｂ），逡逑其結(jié)果與Ｔｒｙｐｔａｓｅ染色相符。結(jié)合臨床信息，肥大細(xì)胞數(shù)目和脫顆粒率與月經(jīng)周逡逑期無(wú)明顯相關(guān)性（Ｐ＞邋０．０５）。逡逑困３Ｅｃ組，Ｅｕ組和Ｎｍ組內(nèi)膜組織中ＭＣ染色與計(jì)數(shù)逡逑１７逡逑
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R711.71

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 林開(kāi)清;朱麗波;張信美;林俊;;肥大細(xì)胞在雌激素介導(dǎo)的子宮內(nèi)膜異位癥中的作用機(jī)制研究[J];浙江大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2015年03期

2 Ming-Hai Wang;Ruiwen Zhang;Yong-Qing Zhou;Hang-Ping Yao;;Pathogenesis of RON receptor tyrosine kinase in cancer cells: activation mechanism, functional crosstalk, and signaling addiction[J];The Journal of Biomedical Research;2013年05期

本文編號(hào)：2667376