【摘要】：目的:探討臍帶間充質(zhì)干細胞來源胞外囊泡在卵巢早衰小鼠卵巢功能和生育能力重建中的作用及對子代的影響。方法:實驗動物分為對照組、模型組和實驗組,每組各40只雌性SPF級ICR小鼠。一次性腹腔注射環(huán)磷酰胺(200 mg/kg)和白消安(20 mg/kg)建立小鼠卵巢早衰模型(模型組),經(jīng)尾靜脈注射0.1 ml 150μg胞外囊泡至實驗組小鼠體內(nèi),對照組與模型組注射0.1 ml磷酸鹽緩沖溶液(PBS),觀察小鼠一般情況及體重變化。4周后各組隨機選取8只小鼠行血清學(xué)、組織學(xué)及免疫組織化學(xué)檢測,qPCR和Western blot檢測卵巢組織凋亡相關(guān)基因及蛋白表達情況;6只小鼠行體外受精,記錄取卵日E_2、獲卵數(shù)、受精卵數(shù)、卵裂胚胎數(shù)及囊胚數(shù);15只小鼠行合籠實驗,記錄小鼠獲得妊娠時間,生育子代數(shù)目及新生小鼠體重變化。對6周齡子代小鼠行Y迷宮實驗和新物體識別實驗評估其學(xué)習(xí)和記憶能力。結(jié)果:(1)模型組小鼠腹腔注射CTX/BUS 14天后動情周期紊亂,體重及E_2水平下降、FSH水平升高,卵巢體積、重量和各級卵泡數(shù)目減少,免疫組化染色顆粒細胞Caspase-3表達增加(P0.05);曠場實驗顯示小鼠自主活動能力減弱且焦慮水平增加;體外受精結(jié)果顯示,取卵日E_2水平降低,獲卵數(shù)、受精卵數(shù)、囊胚數(shù)均顯著減少,合籠后無雌鼠獲得妊娠,空白組雌鼠均妊娠并產(chǎn)仔(0 vs 11.17,P0.05)。(2)實驗組小鼠給藥后4周,體重和卵巢重量較模型組顯著增加;與模型組相比,E_2水平升高、FSH水平下降,但三組間激素水平無顯著性差異;組織學(xué)檢查顯示小鼠始基卵泡、初級卵泡及次級卵泡均顯著高于模型組,但仍低于對照組;顆粒細胞Caspase-3表達水平明顯低于模型組;qPCR結(jié)果證實,實驗組小鼠卵巢組織Caspase 3和Bax mRNA表達水平明顯低于模型組,Western blot檢測結(jié)果顯示Caspase 3和Bax蛋白表達均下降,但3組間未達到統(tǒng)計學(xué)意義。獲卵數(shù)、受精卵數(shù)、卵裂胚胎數(shù)和囊胚數(shù)均有所提高,但3組間受精率、卵裂率和囊胚形成率均無顯著性差異。合籠后,對照組15只小鼠均產(chǎn)仔,模型組15只小鼠中4只產(chǎn)仔,實驗組15只小鼠中11只產(chǎn)仔,且獲得妊娠時間明顯短于模型組。(3)子代小鼠體重呈逐漸增長趨勢,第1周對照組體重顯著高于其它兩組,但之后至6周齡3組間均無顯著性差異。Y迷宮實驗和新物體識別實驗結(jié)果顯示3組間子代學(xué)習(xí)記憶能力未見明顯差異。結(jié)論:(1)胞外囊泡可恢復(fù)化療損傷卵巢早衰小鼠卵巢功能和生育能力。(2)其機制可能與抑制顆粒細胞凋亡有關(guān)。(3)胞外囊泡對子代生長發(fā)育及學(xué)習(xí)記憶能力未見明顯不良影響。目的:探討胞外囊泡恢復(fù)小鼠卵巢功能及生育力的作用時間及最佳給藥方式,為臨床應(yīng)用提供參考。方法:實驗動物分對照組、模型組和實驗組,每組各40只雌性SPF級ICR小鼠。一次性腹腔注射環(huán)磷酰胺(200 mg/kg)和白消安(20 mg/kg)建立卵巢早衰小鼠模型,將小鼠隨機分為單次給藥組和重復(fù)給藥組。單次給藥組經(jīng)尾靜脈單次注射0.1 ml 150μg胞外囊泡至實驗組小鼠體內(nèi),對照組與模型組注射0.1 ml PBS,分別于給藥1周、2周、3周和4周后隨機處死部分小鼠觀察血清學(xué)及組織學(xué)變化,部分小鼠4周后行體外受精及合籠試驗。重復(fù)給藥組小鼠每周注射1次0.1 ml 150μg胞外囊泡至實驗組體內(nèi),共4周,對照組與模型組重復(fù)注射0.1 ml PBS,4周后行體外受精及合籠試驗。結(jié)果:(1)EVs給藥時間對卵巢功能的影響:EVs單次給藥后小鼠體重呈逐漸增長趨勢,2周后明顯高于模型組;實驗組小鼠E2水平逐漸上升,但隨時間延長,模型組小鼠E2水平也漸漸恢復(fù),4周后3組間無顯著性差異;給藥后各時間段FSH水平均低于模型組,但波動較大,3周后3組間無顯著性差異。實驗組給藥1周后卵巢重量顯著增加,并持續(xù)至第4周;組織學(xué)結(jié)果顯示,3周后始基卵泡、次級卵泡及竇卵泡均顯著高于模型組,并持續(xù)至給藥后4周,但未達對照組水平。(2)不同給藥方式對小鼠生育力影響:兩種給藥方式的獲卵數(shù)、受精卵數(shù)、卵裂胚胎數(shù)和囊胚數(shù)均無顯著性差異;合籠結(jié)果顯示,兩種給藥方式產(chǎn)仔數(shù)無顯著性差異。結(jié)論:EVs單次給藥和重復(fù)給藥均可部分恢復(fù)小鼠卵巢功能及生育能力。
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R711.75

【參考文獻】

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本文編號：2664548