【摘要】：研究背景與目的宮頸癌是全球最普遍的女性惡性腫瘤之一,同時(shí)也是發(fā)展中國(guó)家女性最主要的死亡原因。雖然針對(duì)人類乳頭狀病毒的疫苗接種,定期癌癥篩查和手術(shù)治療能夠降低宮頸癌的發(fā)病率,但它仍然是女性最常見(jiàn)的致死病因之一。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是宮頸癌的主要轉(zhuǎn)移途徑和影響宮頸癌治療及預(yù)后的獨(dú)立指標(biāo)。因此,加強(qiáng)宮頸癌轉(zhuǎn)移機(jī)制的基礎(chǔ)研究,闡明淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制,對(duì)宮頸癌轉(zhuǎn)移進(jìn)行早期預(yù)測(cè)、診斷、靶向防治和預(yù)后評(píng)估是宮頸癌研究的重要內(nèi)容之一,對(duì)于提高宮頸癌治愈率,降低死亡率具有重要科學(xué)意義。TWIST2 屬于堿性螺旋-環(huán)-螺旋(Basic helix-loop-helix protein,bHLH)家族B類成員。bHLH家族的轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控多種細(xì)胞的分化,其中B類成員蛋白易與A類蛋白形成異源二聚體,結(jié)合在基因控制區(qū)的E-box共有序列(CANNTG),實(shí)現(xiàn)對(duì)目的基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控。故而TWIST2可以通過(guò)與CANNTG序列結(jié)合,從而作為轉(zhuǎn)錄因子與下游靶基因的啟動(dòng)子發(fā)生作用,發(fā)揮轉(zhuǎn)錄抑制功能。許多研究表明TWIST2在腫瘤轉(zhuǎn)移過(guò)程中發(fā)揮了核心作用,其主要通過(guò)影響上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(Epithelial-MesenchymalTransition,EMT)相關(guān)蛋白表達(dá)從而改變腫瘤細(xì)胞的遷移和侵襲能力進(jìn)而調(diào)控腫瘤轉(zhuǎn)移。但是,TWIST2在宮頸癌中的報(bào)道較少,并且在腫瘤中對(duì)TWIST2所參與的信號(hào)通路和分子機(jī)制的研究也較少。2014年Wang等的研究發(fā)現(xiàn),TWIST2在宮頸癌中表達(dá)上調(diào),且與宮頸癌FIGO分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)。此外,相比于TWIST1,抑制TWIST2其表達(dá)后可以顯著上調(diào)E-Cadherin表達(dá)同時(shí)下調(diào)N-Cadherin表達(dá),進(jìn)而抑制宮頸癌細(xì)胞的遷移和侵襲能力。然而,TWIST2對(duì)宮頸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的分子調(diào)控機(jī)制和信號(hào)通路,仍有待進(jìn)一步探索。微小RNA(microRNA,簡(jiǎn)稱miRNA)是一類內(nèi)源性非編碼小RNA,其能結(jié)合靶基因3'端轉(zhuǎn)錄區(qū)域,導(dǎo)致mRNA的降解或者轉(zhuǎn)錄后抑制。因此,miRNAs被認(rèn)為是許多重要生理過(guò)程的主要調(diào)節(jié)因子,包括細(xì)胞增殖、分化、發(fā)育和凋亡。近年來(lái),大量研究發(fā)現(xiàn)人類癌癥中存在miRNAs的異常表達(dá),50%以上的人類miRNAs位于腫瘤相關(guān)基因區(qū)域,例如脆性位點(diǎn)或靠近癌基因。故而,miRNAs的表達(dá)失調(diào)和多種癌癥的進(jìn)展密切相關(guān)。miRNAs可以結(jié)合下游靶基因3'端轉(zhuǎn)錄區(qū)域改變其表達(dá)和轉(zhuǎn)錄,從而發(fā)揮生物學(xué)作用。同時(shí),miRNAs還受到上游轉(zhuǎn)錄因子的調(diào)控。因此,轉(zhuǎn)錄因子-miRNAs-靶基因形成完整的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)進(jìn)一步參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展,其中包括宮頸癌。大量實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,miRNAs因?yàn)槠浞�(wěn)定性和保守性可作為腫瘤的診斷標(biāo)記物和治療靶點(diǎn)。一些文獻(xiàn)報(bào)道了 TWIST2和部分miRNAs緊密相關(guān)。同時(shí),TWIST2作為轉(zhuǎn)錄因子可以通過(guò)結(jié)合miRNAs上游啟動(dòng)子區(qū)域從而促進(jìn)其表達(dá)。基于此,我們對(duì)過(guò)表達(dá)TWIST2的Siha細(xì)胞進(jìn)行了 Agilent miRNAs芯片檢測(cè)。在檢測(cè)到的36個(gè)差異表達(dá)超過(guò)2倍的miRNAs中,我們采用熒光定量PCR對(duì)其中的表達(dá)差異明顯的miRNA-221-3p進(jìn)行了驗(yàn)證。結(jié)果顯示,過(guò)表達(dá)TWIST2后,miR-221-3p的表達(dá)顯著上調(diào)。同時(shí),通過(guò)Jaspar數(shù)據(jù)庫(kù)篩選了 miR-221-3p上游啟動(dòng)子區(qū)域,發(fā)現(xiàn)了 85個(gè)潛在調(diào)控miR-221-3p且促腫瘤轉(zhuǎn)移的轉(zhuǎn)錄因子,其中包括TWIST2。因此,我們推測(cè)TWIST2作為轉(zhuǎn)錄因子可能通過(guò)直接結(jié)合miR-221-3p的啟動(dòng)子區(qū)域進(jìn)而促進(jìn)其轉(zhuǎn)錄表達(dá)。本文的主要內(nèi)容是著重探討了 TWIST2是否通過(guò)靶向調(diào)控miR-221-3p進(jìn)而介導(dǎo)了宮頸癌的EMT,促進(jìn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。同時(shí)探討了 miR-221-3p進(jìn)一步調(diào)控宮頸癌EMT的具體分子機(jī)制。這為我們理解宮頸癌發(fā)生EMT進(jìn)而轉(zhuǎn)移提供了一定的理論基礎(chǔ),也為尋找宮頸癌潛在的治療靶基因提供了一定的幫助。研究?jī)?nèi)容與方法1.TWIST2調(diào)控宮頸癌細(xì)胞發(fā)生EMT進(jìn)而促進(jìn)其淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(1)設(shè)計(jì)并構(gòu)建穩(wěn)定過(guò)表達(dá)TWITS2慢病毒載體并進(jìn)行宮頸癌細(xì)胞轉(zhuǎn)染,運(yùn)動(dòng)熒光定量PCR和Western blot檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率。選取穩(wěn)定過(guò)表達(dá)TWIST2的宮頸癌細(xì)胞進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。(2)劃痕實(shí)驗(yàn)和Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)TWIST2對(duì)宮頸癌細(xì)胞體外遷移和侵襲能力的影響。(3)乆淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移模型驗(yàn)證TWIST2對(duì)宮頸癌細(xì)胞淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的影響。(4)熒光定量PCR和Western Blot檢測(cè)TWIST2對(duì)宮頸癌細(xì)胞EMT相關(guān)蛋白表達(dá)的影響。2.TWIST2通過(guò) 調(diào)miR-221-3p轉(zhuǎn)錄進(jìn)而促進(jìn)宮頸癌細(xì)胞的遷移和侵襲(1)miRNAs芯片檢測(cè)穩(wěn)定過(guò)表達(dá)TWIST2后的Siha細(xì)胞中表達(dá)變化的miRNAs,并用熒光定量PCR驗(yàn)證和尋找差異表達(dá)顯著的miRNA-221-3p進(jìn)行后續(xù)研究。(2)生物信息學(xué)分析TWIST2可以結(jié)合miR-221-3p的啟動(dòng)子區(qū)域,雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)TWIST2與miRNA-221-3p啟動(dòng)子的直接結(jié)合并能促進(jìn)其轉(zhuǎn)錄。(3)設(shè)計(jì)并構(gòu)建miR-221-3p穩(wěn)定過(guò)表達(dá)慢病毒載體并運(yùn)用熒光定量PCR進(jìn)行驗(yàn)證。(4)劃痕實(shí)驗(yàn)和Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)miR-221-3p對(duì)宮頸癌細(xì)胞體外遷移和侵襲能力的影響。(5)乆淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移模型驗(yàn)證miR-221-3p對(duì)宮頸癌細(xì)胞淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的影響。(6)熒光定量PCR和WesternBlot檢測(cè)miR-221-3p對(duì)宮頸癌細(xì)胞EMT相關(guān)蛋白表達(dá)的影響。(7)劃痕實(shí)驗(yàn)和Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證TWIST2通過(guò)直接調(diào)控miR-221-3p進(jìn)而影響宮頸癌細(xì)胞的體外功能。(8)熒光定量PCR和Western Blot檢測(cè)TWIST2通過(guò)調(diào)控miR-221-3p進(jìn)而影響EMT相關(guān)蛋白表達(dá)。3.miR-221-3p直接靶向調(diào)節(jié)THBS2進(jìn)而影響宮頸癌細(xì)胞的功能(1)生物信息學(xué)預(yù)測(cè)THBS2可能為miR-221-3p的下游靶基因,雙熒光素酶報(bào)告基因驗(yàn)證miR-221-3p可以直接結(jié)合THBS2的3'-UTR區(qū)域進(jìn)而抑制其表達(dá)。并采用熒光定量PCR和Western blot驗(yàn)證過(guò)表達(dá)和沉默miR-221-3p后對(duì)THBS2表達(dá)的影響。(2)劃痕實(shí)驗(yàn)和Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)THBS2對(duì)宮頸癌細(xì)胞體外遷移和侵襲能力的影響。(3)熒光定量PCR和WesternBlot檢測(cè)THBS2對(duì)宮頸癌細(xì)胞EMT相關(guān)蛋白表達(dá)的影響。(4)劃痕實(shí)驗(yàn)和Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證miR-221-3p通過(guò)直接調(diào)控THBS2進(jìn)而影響宮頸癌細(xì)胞的體外功能。(5)熒光定量PCR和Western Blot檢測(cè)miR-221-3p通過(guò)直接調(diào)控THBS2進(jìn)而影響EMT相關(guān)蛋白表達(dá)。4.TWIST2-miR-221-3p-THBS2信號(hào)通路在臨床組織標(biāo)本中的表達(dá)和分析(1)熒光定量PCR和免疫組化檢測(cè)TWIST2和THBS2在10例正常宮頸組織、23例不伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的宮頸癌組織和22例伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的宮頸癌組織中的表達(dá)水平。(2)熒光定量PCR和原位雜交檢測(cè)miR-221-3p在10例正常宮頸組織、23例不伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的宮頸癌組織和22例伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的宮頸癌組織中的表達(dá)水平。(3)統(tǒng)計(jì)分析宮頸癌臨床樣本中TWIST2、miR-221-3p、THBS2之間的表達(dá)相關(guān)性。結(jié)果1.TWIST2調(diào)控宮頸癌細(xì)胞發(fā)生EMT進(jìn)而促進(jìn)其淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移成功構(gòu)建穩(wěn)定過(guò)表達(dá)TWIST2的Siha(Siha-TW2)和Hela(Hela-TW2)細(xì)胞株。隨后運(yùn)用劃痕實(shí)驗(yàn)和Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)穩(wěn)定過(guò)表達(dá)TWIST2后對(duì)宮頸癌細(xì)胞體外遷移和侵襲的作用。劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,與對(duì)照組相比,Siha-TW2和Hela-TW2的遷移率明顯增高(P=0.005;P=0.003);Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,與對(duì)照組相比,Siha-TW2和Hela-TW2的穿膜細(xì)胞數(shù)顯著增多(P0.001;P=0.003)。采用乆淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移實(shí)驗(yàn)檢測(cè)穩(wěn)定過(guò)表達(dá)TWIST2后對(duì)宮頸癌細(xì)胞體內(nèi)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的作用。結(jié)果表明,與對(duì)照組相比,Siha-TW2和Hela-TW2的乆淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率明顯增高(33.3%vs.83.3%;16.7%vs.66.7%)。采用熒光定量PCR和Western blot檢測(cè)穩(wěn)定過(guò)表達(dá)TWIST2后宮頸癌細(xì)胞EMT相關(guān)蛋白的表達(dá)變化。結(jié)果顯示,Siha-TW2和Hela-TW2的N-Cadherin和Vimentin表達(dá)上調(diào),E-Cadherin表達(dá)下調(diào),而沉默組的結(jié)果相反。2.TWIST2 通過(guò)上調(diào)miR-221-3p轉(zhuǎn)錄進(jìn)而促進(jìn)宮頸癌細(xì)胞的遷移和侵襲對(duì)Siha-TW2進(jìn)行AgilentmiRNAs芯片檢測(cè)一共發(fā)現(xiàn)了 36個(gè)差異表達(dá)miRNAs,選取其中表達(dá)差異最明顯且上調(diào)的miR-221-3p采用熒光定量PCR驗(yàn)證。結(jié)果顯示,過(guò)表達(dá)TWIST2后,miR-221-3p的表達(dá)顯著下調(diào)(P0.001;P0.001)。進(jìn)一步利用生物信息學(xué)預(yù)測(cè),發(fā)現(xiàn)TWIST2和miR-221-3p上游啟動(dòng)子序列存在結(jié)合靶點(diǎn),隨后利用雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)υ摻Y(jié)合位點(diǎn)進(jìn)行驗(yàn)證。結(jié)果表明,過(guò)表達(dá)TWIST2后可以促進(jìn)其與miR-221-3p啟動(dòng)子的結(jié)合,沉默TWIST2后可以抑制其與miR-221-3p啟動(dòng)子的結(jié)合(P均小于0.001)。構(gòu)建穩(wěn)定過(guò)表達(dá)miR-221-3p慢病毒載體并轉(zhuǎn)染Siha(Siha-221)和Hela(Hela-221),熒光定量PCR驗(yàn)證表明miR-221-3p在Siha-221和Hela-221中上調(diào)超過(guò)200倍和120倍(P0.001;P0.001)。隨后進(jìn)行體內(nèi)/外功能實(shí)驗(yàn)。體外遷移和Transwell 侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,Siha-221 和 Hela-221 的體外遷移(P=0.003;P=0.001)和侵襲能力(P=0.001;P=0.001)明顯增強(qiáng)。體內(nèi)行乆淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,與對(duì)照組相比,Siha-221和Hela-221的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率明顯增高(37.5%vs.87.5%;25%vs.75%)。采用熒光定量PCR和Western blot檢測(cè)Siha-221和Hela-221中EMT相關(guān)蛋白的表達(dá)變化。結(jié)果顯示,Siha-221和Hela-221的EMT相關(guān)蛋白N-Cadherin和Vimentin表達(dá)上調(diào),E-Cadherin表達(dá)下調(diào)。進(jìn)一步瞬時(shí)轉(zhuǎn)染 miR-221-3pinhibitor 至 Siha-TW2(Siha-TW2/221 KN)和Hela-TW2(Hela-TW2/221KN)中,隨后采用劃痕和Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)來(lái)檢測(cè)細(xì)胞功能的變化。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,與Siha-TW2和Hela-TW2相比,Siha-TW2/221 KN 和 Hela-TW2/221 KN 的體外遷移(P=0.004;P=0.005)和侵襲能力(P0.001;P=0.003)明顯減弱。該結(jié)果提示,miR-221-3p對(duì)TWIST2促細(xì)胞遷移和侵襲的能力有協(xié)同作用。采用熒光定量 PCR 和 Western blot 檢測(cè) Siha-TW2、Siha-TW2/221 KN、Hela-TW2和Hela-TW2/221 KN EMT相關(guān)蛋白的表達(dá)變化。結(jié)果顯示,與Siha-TW2和 Hela-TW2 相比,Siha-TW2/221 KN 和 Hela-TW2/221 KN 的 N-Cadherin 和Vimentin表達(dá)下調(diào),E-Cadherin表達(dá)上調(diào)。該結(jié)果提示,miR-221-3p對(duì)TWIST2促細(xì)胞EMT有協(xié)同作用。3.miR-221-3p直接靶向調(diào)節(jié)THBS2進(jìn)而影響宮頸癌細(xì)胞的功能在3個(gè)miRNA靶基因預(yù)測(cè)網(wǎng)站上對(duì)miR-221-3p可能的靶基因進(jìn)行了預(yù)測(cè),同時(shí)結(jié)合miR-221-3p的Westernblot和熒光定量PCR結(jié)果,選取了 THBS2這個(gè)可能的靶基因。Western blot和熒光定量PCR結(jié)果表明,miR-221-3p mimic組中宮頸癌細(xì)胞中THBS2表達(dá)下調(diào)(P均小于0.001),miR-221-3p inhibitor組中宮頸癌細(xì)胞中THBS2表達(dá)上調(diào)(P均小于0.001)。雙熒光素酶報(bào)告基因結(jié)果顯示,在THBS2基因3'-UTR區(qū)域中加入miR-221-3p mimic可以抑制載體熒光的表達(dá)(P0.001),而突變靶基因3'-UTR區(qū)域的熒光強(qiáng)度不發(fā)生改變。該結(jié)果提示,miR-221-3p可以特異性結(jié)合靶基因THBS2的3'-UTR區(qū)域,負(fù)性調(diào)控THBS2的表達(dá)。瞬時(shí)轉(zhuǎn)染THBS2過(guò)表達(dá)質(zhì)粒至Siha(Siha-TH2)和Hela(Hela-TH2)中,隨后進(jìn)行劃痕和Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,Siha-TH2和Hela-TH2的體外遷移(P=0.001;P=0.002)和侵襲能力(P=0.001;P=0.003)明顯減弱。采用熒光定量PCR和Western blot檢測(cè)瞬轉(zhuǎn)Siha-TH2和Hela-TH2的EMT相關(guān)蛋白表達(dá)變化。結(jié)果顯示,Siha-TH2和Hela-TH2的N-Cadherin和Vimentin表達(dá)下調(diào),E-Cadherin表達(dá)上調(diào)。進(jìn)一步將THBS2過(guò)表達(dá)質(zhì)粒瞬轉(zhuǎn)至Siha-221(Siha-221/TH2)和Hela-221(Hela-221/TH2)。隨后采用劃痕和Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)來(lái)檢測(cè)細(xì)胞功能的變化。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,Siha-221/TH2 和 Hela-221/TH2 可以逆轉(zhuǎn) Siha-221 和 Hela-221 增強(qiáng)的遷移(P=0.003;P=0.002)和侵襲能力(P0.001;P0.001)。即 miR-221-3p可以通過(guò)下調(diào)THBS2的表達(dá)進(jìn)而促進(jìn)宮頸癌細(xì)胞的遷移和侵襲能力。采用熒光定量 PCR 和 Western blot 檢測(cè) Siha-221/TH2 和 Hela-221/TH2 的EMT相關(guān)蛋白表達(dá)變化。結(jié)果顯示,Siha-221和Hela-221相比,Siha-221/TH2和 Hela-221/TH2 的 N-Cadherin 和 Vimentin 表達(dá)下調(diào),E-Cadherin 表達(dá)上調(diào)。即miR-221-3p可以通過(guò)下調(diào)THBS2的表達(dá)進(jìn)而促進(jìn)宮頸癌細(xì)胞發(fā)生EMT。4.TWIST2-miR-221-3p-THBS2信號(hào)通路在臨床組織標(biāo)本中的表達(dá)和分析運(yùn)用熒光定量PCR、免疫組化和原位雜交檢測(cè)TWIST2、miR-221-3p和THBS2在10例正常宮頸組織、23例不伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的宮頸癌組織(I-II期)和22例伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的宮頸癌組織(I-II期)中的表達(dá)水平。結(jié)果顯示,正常宮頸組織中,TWIST2和miR-221-3p基本不表達(dá)。不伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的宮頸癌組織中,TWIST2、miR-221-3p的表達(dá)量中等偏低,而THBS2的表達(dá)量中等。伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的宮頸癌組織中,TWIST2和miR-221-3p表達(dá)量高,而THBS2的表達(dá)偏低。其中TWIST2的表達(dá)主要位于細(xì)胞核,而miR-221-3p和THBS2的表達(dá)主要位于細(xì)胞漿。最后對(duì)TWITS2、miR-221-3p和THBS2之間表達(dá)相關(guān)性進(jìn)行了分析。結(jié)果表明,TWIST2 和 miR-221-3p 之間存在正相關(guān)關(guān)系(r=0.867,P0.001),miR-221-3p和THBS2之間存在負(fù)相關(guān)關(guān)系(r=-0.729,P0.001)。結(jié)論TWIST2作為轉(zhuǎn)錄因子可以與miR-221-3p上游啟動(dòng)子區(qū)域的位點(diǎn)結(jié)合并上調(diào)其轉(zhuǎn)錄,從而促進(jìn)miR-221-3p與THBS2的3'-UTR區(qū)域靶向結(jié)合,下調(diào)THBS2的表達(dá),進(jìn)一步通過(guò)上調(diào)N-Cadherin和Vimentin的表達(dá),下調(diào)E-Cadherin的表達(dá)來(lái)促進(jìn)宮頸癌細(xì)胞的遷移和侵襲。此外,TWIST2和miR-221-3p在伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的宮頸癌臨床樣本中高表達(dá),而THBS2在伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的宮頸癌臨床樣本中低表達(dá)。同時(shí),TWIST2與miR-221-3p的表達(dá)呈正相關(guān),而miR-221-3p與THBS2的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)。
【圖文】：

ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ邋ＴＷＩＳＴ２逡逑進(jìn)一步采用熒光定量ＰＣＲ（邋ｑＲＴ－ＰＣＲ）檢測(cè)Ｓｉｈａ和Ｈｅｌａ轉(zhuǎn)染慢病毒后ＴＷＩＳＴ逡逑ｍＲＮＡ的表達(dá)情況。如圖１－２和表１－１所示，Ｓｉｈａ－ＴＷ２和Ｈｅｌａ－ＴＷ２的ＴＷＩＳＴ２逡逑ｍＲＮＡ邋表達(dá)水平明顯高于邋Ｖｅｃｔｏｒ邋組（Ｓｉｈａ－Ｖｅｃｔｏｒ邋ｖｓ．邋Ｓｉｈａ－ＴＷ２：邋１．０５±０．０７邋ｖｓ．逡逑１３２．２８±９．５４，尸＜０．００１；邋Ｈｅｌａ－Ｖｅｃｔｏｒ邋ｖｓ．邋Ｈｅｌａ－ＴＷ２：邋１．０８±０．１１邋ｖｓ．邋７４．１６±１４＿０１，逡逑尸＜０．００１邋）。且運(yùn)用Ｗｅｓｔｅｒｎ邋ｂｌｏｔ實(shí)驗(yàn)檢測(cè)Ｓｉｈａ和Ｈｅｌａ轉(zhuǎn)染慢病毒后ＴＷＩＳＴ蛋白逡逑的表達(dá)情況。如圖１－１Ｃ，Ｓｉｈａ－ＴＷ２和Ｈｅｌａ－ＴＷ２的ＴＷＩＳＴ２蛋白水平同樣明顯逡逑高于Ｖｅｃｔｏｒ組。這些結(jié)果表明，過(guò)表達(dá)ＴＷＩＳＴ２的Ｓｉｈａ－ＴＷ２和Ｈｅｌａ－ＴＷ２細(xì)胞逡逑株己被成功構(gòu)建，可運(yùn)用于后續(xù)研究。逡逑１９逡逑

邐５１．２６±７．２３逡逑我們同時(shí)采用了邋Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ小室侵襲實(shí)驗(yàn)對(duì)穩(wěn)定過(guò)表達(dá)ＴＷＩＳＴ２的Ｓｉｈａ－ＴＷ２逡逑和Ｈｅｌａ－ＴＷ２的侵襲能力進(jìn)行了檢測(cè)。如圖１－４和表１－３，，Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ小室侵襲實(shí)逡逑驗(yàn)結(jié)果顯示，與Ｖｅｃｔｏｒ組相比，Ｓｉｈａ－ＴＷ２和Ｈｅｌａ－ＴＷ２的穿膜細(xì)胞數(shù)明顯增多逡逑（Ｓｉｈａ－Ｖｅｃｔｏｒｖｓ．Ｓｉｈａ－ＴＷ２：邋５８．３７±１０．３７邋ｖｓ．邋１６８．６７±１２．３１，邋？＜０．００１；邋Ｈｅｌａ－Ｖｅｃｔｏｒ逡逑ｖｓ．Ｈｅｌａ－ＴＷ２：邋３７．７２±８．４５ｖｓ．９９．１７±１５．３５，邋Ｐ＝０．００３）。這些結(jié)果提示，在宮頸癌逡逑細(xì)胞中過(guò)表達(dá)ＴＷＩＳＴ２后
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R737.33

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 Hao Yu;Guang-Zhi Jin;Kai Liu;Hui Dong;Hua Yu;Ji-Cheng Duan;Zhe Li;Wei Dong;Wen-Ming Cong;Jia-He Yang;;Twist2 is a valuable prognostic biomarker for colorectal cancer[J];World Journal of Gastroenterology;2013年15期

本文編號(hào)：2663189