【摘要】：背景卵巢癌是常見的的婦科惡性腫瘤之一,是一種致死率高、嚴(yán)重危害婦女健康的疾病。其主要轉(zhuǎn)移途徑是腹腔種植轉(zhuǎn)移,這個過程是影響預(yù)后的重要因素,也是研究卵巢癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵所在。載脂蛋白E(Apolipoprotein E,ApoE)是血漿脂蛋白的重要組成部分,參與多種細(xì)胞的生長調(diào)控。在卵巢癌患者的血清、原發(fā)腫瘤和轉(zhuǎn)移中均可檢測到ApoE的過表達。有研究表明ApoE缺失可以導(dǎo)致細(xì)胞外基質(zhì)分泌和表達增高,影響腹腔內(nèi)微環(huán)境變化。然而目前尚無研究揭示ApoE缺失與卵巢癌進展的相關(guān)機制。目的研究ApoE缺失介導(dǎo)的腹腔細(xì)胞外基質(zhì)重塑,以及這個過程影響卵巢癌惡性進展的具體機制。方法1.收集9例卵巢癌患者配對原發(fā)灶與轉(zhuǎn)移灶的組織標(biāo)本,通過HE染色法、Masson染色和和天狼星紅染色法檢測組織標(biāo)本中的膠原纖維表達水平。2.使用ApoE缺失的小鼠以及WT小鼠作為動物模型,q-PCR以及Western blot技術(shù)檢測其橫膈膜和大網(wǎng)膜的ECM成分。將ID8細(xì)胞種植至ApoE-/-小鼠與WT小鼠腹腔中獲得獲得同種異體移植模型,使用活體生物熒光成像方法監(jiān)測其腫瘤進展。通過Masson染色法分析腫瘤組織中的膠原含量。使用免疫組化的方法檢測腫瘤組織中MMP-10、MMP-9以及ERK的表達。免疫熒光法檢測小鼠腫瘤組織中FAK活性。BAPN提前處理腫瘤建立前的模型小鼠,以及MEK抑制劑PD-325901處理移植腫瘤后的小鼠,用上述方法監(jiān)測其腫瘤進展以及分析組織中膠原蛋白及MMP-10和MMP-9的表達。3.體外實驗中使用Collagen l預(yù)涂板培養(yǎng)SKOV3細(xì)胞與OV-90細(xì)胞,通過體外細(xì)胞粘附試驗檢測膠原對細(xì)胞粘附的作用。Western blot實驗與免疫熒光實驗檢測FAK-Rho-ERK通路相關(guān)蛋白表達水平。使用PD-325901以及PBS分別處理實驗組及對照組SKOV3細(xì)胞與OV-90細(xì)胞,通過Western blot分析MMP-9、MMP-10以及P-ERK1/2蛋白表達水平,并通過CCK8檢測細(xì)胞活性與增殖。結(jié)果卵巢癌轉(zhuǎn)移灶組織中的纖維膠原蛋白與原發(fā)性腫瘤相比顯著增加,證明ECM確實參與了卵巢癌進展過程。ApoE缺失可以導(dǎo)致ECM積聚并使腹腔微環(huán)境發(fā)生改變。金屬蛋白酶的表達升高,增強了卵巢癌細(xì)胞的侵襲能力。ECM改變通過介導(dǎo)細(xì)胞與基質(zhì)的粘附,激活FAK-ERK-MMP信號通路促進腫瘤進展。LOX抑制劑BAPN以及MEK抑制劑PD-325901處理可以通過抑制該信號通路活化,有效逆轉(zhuǎn)ECM積聚、減少粘附并降低卵巢癌細(xì)胞的侵襲能力。結(jié)論ApoE缺失通過介導(dǎo)細(xì)胞外基質(zhì)重塑,使FAK-ERK-MMP信號通路活化,增強了卵巢癌細(xì)胞的侵襲能力,促進卵巢癌的惡性進展。BAPN和PD-325901可以通過抑制ERK活化起到抑制腫瘤的作用,有效延緩卵巢癌進展。這個發(fā)現(xiàn)為進一步探索卵巢癌的新型治療方法提供了動力。
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R737.31

【參考文獻】

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1 張國兵,陳灝珠,江智文,溫沁竹,陸元善,莊文燕;載脂蛋白E基因多態(tài)性與冠心病的關(guān)系[J];中國動脈硬化雜志;2001年04期

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本文編號：2660171