發(fā)布時間：2017-03-23 16:14

  本文關鍵詞：三種方法應用于人卵巢組織玻璃化冷凍的效果分析，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:卵巢組織冷凍作為女性生育力保存的一種方法,具有廣闊的應用及發(fā)展前景。目前卵巢組織冷凍仍是一項試驗性技術,標準化的冷凍方案尚未確定。本研究初步比較三種不同的冷凍方法對人卵巢皮質組織玻璃化冷凍效果的影響,旨在探討人卵巢皮質組織玻璃化冷凍的可行方案。材料與方法:收集2014.3~2014.9因卵巢良性囊腫于天津市中心婦產科醫(yī)院實施手術的40例患者的卵巢皮質塊作為實驗材料。術中切除的卵巢組織放入裝有磷酸鹽緩沖液的離心管中,置于冰上半小時內送至實驗室。將卵巢皮質切割成大小為5×1×1mm3的組織塊,每位患者的卵巢組織塊隨機平均分為四組:一組作為新鮮對照組,剩余三組作為實驗組行玻璃化冷凍。本實驗中聯(lián)合使用低濃度的乙二醇和二甲基亞砜作為玻璃化冷凍保護劑,實驗組分別行微滴法玻璃化冷凍、凍存管法玻璃化冷凍、尼龍篩網法玻璃化冷凍,放入液氮保存一周后解凍復蘇。觀察并計數(shù)新鮮組和實驗組卵巢組織內各級卵泡數(shù)、計算始基卵泡的正常形態(tài)率,通過TUNEL法檢測卵巢組織細胞凋亡情況,通過免疫組織化學法檢測細胞增殖情況,比較并分析四組數(shù)據(jù)。結果:1.卵巢組織形態(tài)學檢測結果:微滴法組、尼龍篩網法組與新鮮組相比,總卵泡數(shù)及始基卵泡所占比例無統(tǒng)計學差異(P0.05),凍存管法組的總卵泡數(shù)及始基卵泡所占比例明顯少于新鮮組,差異有統(tǒng)計學意義(P㩳0.05)。新鮮組始基卵泡正常形態(tài)率明顯高于三個實驗組,差異有統(tǒng)計學意義(c2=6.956,P=0.008;c2=27.038,P=0.000;c2=10.963,P=0.001),微滴法組、尼龍篩網法組始基卵泡正常形態(tài)率高于凍存管法組,差異均有統(tǒng)計學意義(c2=8.444,P=0.004;c2=5.309,P=0.021),微滴法組與尼龍篩網法組始基卵泡正常形態(tài)率之間的差異沒有統(tǒng)計學意義(c2=0.507,P=0.476)。光鏡下觀察可見實驗組部分卵巢組織出現(xiàn)間質水腫、間質細胞連接疏松、顆粒細胞層與卵泡膜之間空隙增大。2.TUNEL檢測結果:四組卵巢組織中各級卵泡中卵母細胞及顆粒細胞中均未見凋亡細胞,而卵巢間質細胞核內可見凋亡細胞。3.免疫組化Ki67表達結果:微滴法組、尼龍篩網法組Ki67陽性細胞數(shù)目與新鮮組比較無統(tǒng)計學差異(P0.05),凍存管法組Ki67陽性細胞數(shù)目明顯低于新鮮組,差異有統(tǒng)計學意義(P㩳0.05),微滴法組和尼龍篩網法組相比無統(tǒng)計學差異(P0.05)。結論:1.本課題為天津市衛(wèi)生局資助項目,首次全面系統(tǒng)地采用不同冷凍試劑配伍不同冷凍載體對人卵巢組織玻璃化冷凍的效果進行觀察評價。本部分實驗內容固定冷凍試劑不變,分析并討論三種冷凍載體應用于人卵巢組織玻璃化冷凍的效果。2.從卵巢組織形態(tài)學、細胞凋亡及細胞增殖三個方面判斷:微滴法及尼龍篩網法的玻璃化冷凍效果優(yōu)于凍存管法。3.新型冷凍載體尼龍篩網為人卵巢組織玻璃化冷凍提供了新的選擇。4.本實驗結果表明卵巢組織玻璃化冷凍是保存女性生育力的可行方法。本實驗為臨床正式應用卵巢組織冷凍提供了技術方面的準備,同時為建立卵巢組織冷凍庫奠定基礎。
【關鍵詞】：卵巢組織 玻璃化冷凍 冷凍載體 形態(tài)學 細胞增殖 細胞凋亡
【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R714.8
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 縮略語10-11
• 前言11-13
• 研究現(xiàn)狀、成果11-12
• 研究目的、方法12-13
• 對象和方法13-21
• 1.研究對象13
• 2.研究方法13-21
• 2.1 主要試劑13-14
• 2.2 主要設備及耗材14
• 2.3 主要溶液的配制14-15
• 2.4 卵巢組織的處理15
• 2.5 玻璃化冷凍15-16
• 2.6 解凍復蘇16
• 2.7 檢測項目16-18
• 2.8 結果判定18-20
• 2.9 統(tǒng)計分析20-21
• 結果21-26
• 1.卵巢組織形態(tài)學比較21-23
• 2.卵巢組織細胞凋亡情況比較23-24
• 3.卵巢組織Ki67表達比較24-26
• 討論26-34
• 1.影響卵巢組織玻璃化冷凍效果的因素26-29
• 2.卵巢組織冷凍方案的評價指標29-31
• 3.卵巢組織冷凍復蘇后移植的應用現(xiàn)狀31-34
• 結論34-35
• 參考文獻35-42
• 發(fā)表論文和參加科研情況42-43
• 綜述43-54
• 綜述參考文獻49-54
• 致謝54

【共引文獻】

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1 徐瑾;玉蘭花粉超低溫保存機制研究[D];北京林業(yè)大學;2014年

2 李s，

本文編號：264098