【摘要】：引言宮頸癌是女性第二大常見惡性腫瘤,死亡率居女性惡性腫瘤第三位,其中約90%的宮頸癌死亡發(fā)生在發(fā)展中國(guó)家。宮頸癌篩查的普及和人乳頭瘤病毒(Human Papillomavirus,HPV)疫苗的使用,使宮頸癌成為可預(yù)防的惡性腫瘤。但是HPV和細(xì)胞學(xué)篩查仍存在較大的漏診風(fēng)險(xiǎn),宮頸癌缺乏精準(zhǔn)的早期篩查標(biāo)志物。因此,尋找能夠有效識(shí)別宮頸癌及其癌前病變的特異性分子標(biāo)志物,補(bǔ)充目前宮頸癌早期篩查方法的不足,具有重要意義。研究表明DNA甲基化是惡性腫瘤發(fā)生的早期事件,且與宮頸癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān),可作為宮頸癌早期診斷的特異性分子標(biāo)志,應(yīng)用DNA甲基化檢測(cè)技術(shù)能提高宮頸癌早期診斷的檢出率。具有序列相似性的19家族(趨化因子(C-Cmotif)-樣)成員A4(family with sequence similarity 19 member A4,FAM19A4)是TAFA基因家族成員,國(guó)外已有研究發(fā)現(xiàn)FAM19A4基因啟動(dòng)子甲基化能有效識(shí)別宮頸癌及其癌前病變,有望成為新型腫瘤標(biāo)記物。但國(guó)內(nèi)外目前尚無文獻(xiàn)報(bào)道FAM19A4基因啟動(dòng)子甲基化與中國(guó)婦女宮頸疾病相關(guān)性的研究,也無FAM19A4基因啟動(dòng)子甲基化與宮頸癌臨床病理特征及HPV感染型別相關(guān)性的研究。為探討FAM19A4基因啟動(dòng)子甲基化在我國(guó)婦女宮頸癌及其癌前病變?cè)\斷中的價(jià)值,在國(guó)外研究基礎(chǔ)上,本文采用雙探針熒光定量PCR(Taqman probe-based quantitative PCR,q PCR)技術(shù),從宮頸石蠟包埋組織(formalin-fixed and parrffin-embedded,FFPE)和hr-HPV陽性患者的宮頸細(xì)胞刷液兩種標(biāo)本中,檢測(cè)不同宮頸疾病中FAM19A4基因啟動(dòng)子甲基化情況,并比較該基因甲基化在宮頸癌的不同臨床病理特征和不同HPV型別中的差異,分析該基因甲基化在宮頸癌及其癌前病變中的診斷價(jià)值。第一部分FAM19A4基因啟動(dòng)子甲基化檢測(cè)在宮頸癌及其癌前病變組織中的臨床意義目的檢測(cè)宮頸癌、宮頸癌前病變及正常宮頸/宮頸炎的FFPE標(biāo)本中,FAM19A4基因啟動(dòng)子甲基化的表達(dá)情況,并探討FAM19A4甲基化對(duì)宮頸癌及其癌前病變的診斷價(jià)值。方法分別隨機(jī)選取31例、22例及23例經(jīng)病理確診為宮頸癌、宮頸HSIL(CINⅢ)及正常宮頸/宮頸炎的FFPE標(biāo)本,采用q PCR技術(shù)分別檢測(cè)三組FFPE標(biāo)本中FAM19A4基因啟動(dòng)子甲基化的表達(dá)情況,并采用SPSS 23.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,評(píng)估該基因甲基化在宮頸癌及其癌前病變?cè)\斷中的價(jià)值。結(jié)果1.FAM19A4基因甲基化檢出率在正常宮頸/宮頸炎、宮頸HSIL及宮頸癌的FFPE標(biāo)本中分別為8.70%(2/23)、72.73%(16/22)和96.77%(30/31),三組間甲基化檢出率存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),且隨著宮頸病變嚴(yán)重程度增加,FAM19A4甲基化的檢出率逐漸升高(Cochran-Armitage趨勢(shì)檢驗(yàn),P0.05)。2.三組樣本卡方檢驗(yàn)后的兩兩比較分析顯示,宮頸癌組的FAM19A4基因啟動(dòng)子甲基化陽性檢出率高于宮頸HSIL組(96.77%vs 72.73%,P0.05);宮頸癌組的FAM19A4基因啟動(dòng)子甲基化陽性檢出率高于正常宮頸/宮頸炎組(96.77%vs 8.70%,P0.05);及宮頸HSIL組的FAM19A4基因甲基化檢出率也高于正常宮頸/宮頸炎組(72.72%vs 8.70%,P0.05)。3.FAM19A4基因啟動(dòng)子的甲基化檢出情況,在宮頸癌不同年齡段、不同病理類型、不同臨床分期、不同腫瘤大小及不同淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀態(tài)中的差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論FAM19A4基因可能是宮頸細(xì)胞癌變的特異性分子標(biāo)志物。從正常宮頸到癌前病變?cè)傧蚪䴘?rùn)癌的進(jìn)展過程中,FAM19A4基因啟動(dòng)子甲基化檢出率逐漸升高,提示該基因甲基化可能在宮頸癌的發(fā)生發(fā)展中起著一定作用。第二部分hr-HPV陽性宮頸細(xì)胞刷液中FAM19A4基因啟動(dòng)子甲基化檢測(cè)在宮頸癌及其癌前病變?cè)\斷中的臨床意義目的檢測(cè)高危型HPV(high-risk types of human papillomavirus,hr-HPV)陽性患者的宮頸細(xì)胞刷液中,FAM19A4基因啟動(dòng)子甲基化在不同宮頸疾病中的表達(dá)情況,探索AM19A4甲基化與宮頸癌臨床病理特征及HPV感染型別的相關(guān)性,及比較該基因甲基化與細(xì)胞學(xué)、HPV16/18分型在宮頸癌及其癌前病變?cè)\斷中的差異和價(jià)值。方法選取264例hr-HPV陽性(包括HP16,18,31,33,35,39,45,51,52,56,58,59,66和68)患者的宮頸細(xì)胞刷液,經(jīng)2位以上病理醫(yī)師確定組織學(xué)診斷分別為宮頸癌72例、宮頸HSIL 70例、宮頸LSIL 45例及正常宮頸/宮頸炎77例,采用q PCR技術(shù)分別檢測(cè)五組不同宮頸疾病的細(xì)胞刷液中,FAM19A4基因啟動(dòng)子甲基化的表達(dá)情況,并采用SPSS 23.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。檢測(cè)FAM19A4甲基化表達(dá)在不同臨床病理特征的宮頸癌及不同HPV感染型別中的差異。同時(shí)比較HPV16/18分型、細(xì)胞學(xué)檢測(cè)和FAM19A4甲基化三種方法,在檢測(cè)HSIL以上病變(≥HSIL/HSIL+)時(shí)的靈敏度、特異度、陽性預(yù)測(cè)值(Positive predictive value,PPV)、陰性預(yù)測(cè)值(Negative predictive value,NPV)及約登指數(shù)(Youden’s index,YI)的差異,評(píng)估該基因甲基化在宮頸癌及其癌前病變?cè)缙谠\斷中的價(jià)值。結(jié)果1.FAM19A4基因啟動(dòng)子甲基化檢出率分別為:正常宮頸/宮頸炎組9.09%(7/77)、宮頸LSIL組24.44%(11/45)、宮頸HSIL組58.57%(41/70)及宮頸癌組94.44%(68/72),四組別間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),且隨著宮頸病變嚴(yán)重程度增加,FAM19A4甲基化的檢出率逐漸升高(Cochran-Armitage趨勢(shì)檢驗(yàn),P0.05)。2.五組卡方檢驗(yàn)后的兩兩比較分析顯示,任意兩組別間的FAM19A4基因啟動(dòng)子甲基化檢出率的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。3.與正常宮頸/宮頸炎組相比,宮頸癌、宮頸HSIL及宮頸LSIL組中FAM19A4基因啟動(dòng)子甲基化檢出率的OR值分別170.00(95%CI:47.60-607.16)、14.138(95%CI:5.685-35.156)、3.24(95%CI:1.15-9.08),均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。4.72例hr-HPV陽性宮頸癌細(xì)胞刷液中,FAM19A4基因啟動(dòng)子的甲基化檢出情況,在宮頸癌不同年齡段、不同病理類型、不同臨床分期、不同腫瘤大小、和不同淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀態(tài)中均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。5.不同HPV分型與FAM19A4基因啟動(dòng)子甲基化檢出率間存在相關(guān)性(P0.05)。在所有hr-HPV陽性患者的宮頸細(xì)胞刷液中,FAM19A4基因啟動(dòng)子甲基化檢出率在HPV16/18感染組別中高于非HPV16/18感染組(66.15%vs 30.60%,P0.05)。在非癌變的hr-HPV陽性宮頸細(xì)胞刷液中,FAM19A4基因啟動(dòng)子甲基化檢出率在HPV16/18感染組別中仍高于非HPV16/18感染組(43.84%vs22.69%,P0.05)。6.FAM19A4基因啟動(dòng)子甲基化在檢測(cè)≥宮頸HSIL病變時(shí)的靈敏度稍低于HPV16/18分型聯(lián)合細(xì)胞學(xué)檢測(cè)(85.84%vs 93.81%),但特異度、PPV、NPV及YI均高于聯(lián)合檢測(cè)。與單獨(dú)FAM19A4甲基化檢測(cè)相比,FAM19A4甲基化聯(lián)合HPV16/18分型檢測(cè)后,在檢測(cè)≥宮頸HSIL病變時(shí)的靈敏度和NPV均稍增高,但特異度、PPV及YI均明顯下降。結(jié)論1.hr-HPV陽性細(xì)胞刷液中,FAM19A4基因可能是宮頸癌的特異性腫瘤標(biāo)記物。隨著宮頸病變進(jìn)展,FAM19A4基因甲基化檢出率逐漸升高,表明該基因甲基化可能與宮頸癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。2.與傳統(tǒng)HPV分型和細(xì)胞學(xué)檢查相比,FAM19A4基因啟動(dòng)子甲基化在診斷≥宮頸HSIL病變時(shí)具有優(yōu)勢(shì),FAM19A4甲基化能提高宮頸癌及其癌前病變檢出的準(zhǔn)確率,有望成為宮頸癌診斷的一種輔助手段。
【圖文】：

圖 1: ddH2O、正常外周血及宮頸癌的 FAM19A4 及內(nèi)參 ACTB 基因擴(kuò)增曲線Figure 1: Amplification curves of ddH2O, normal peripheral blood DNA ancervical cancer samples3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用 SPSS 23．0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，所有統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)均為雙側(cè)檢驗(yàn)。計(jì)量資料以均數(shù) 標(biāo)準(zhǔn)差（ SD）表示。計(jì)量資料的兩獨(dú)立樣本比較采用 Mann-Whitney 檢驗(yàn)， =0.05。計(jì)量資料的多樣本比較采用 Kruskal-Wallis H 檢驗(yàn)， =0.05；組間的兩兩比較采取 Bonferroni 校正，矯正后的檢驗(yàn)水準(zhǔn) =0.05/比較次數(shù)。計(jì)數(shù)資料采用 Pearson 卡方檢驗(yàn)或 Fisher 精確概率法， =0.05；組間的兩兩比較采取Bonferroni 校正，矯正后的檢驗(yàn)水準(zhǔn) =0.05/比較次數(shù)。線性趨勢(shì)采用 Cochran-Armitage 趨勢(shì)檢驗(yàn)， =0.05。定義 P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
【學(xué)位授予單位】：廣州醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R737.33

【參考文獻(xiàn)】

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1 王宏;潘世揚(yáng);龐智睿;王芳;徐建;陳丹;謝而付;張麗霞;高麗;許雨喬;晉柏;;子宮頸癌和CIN患者血漿APC和RASSF1A基因啟動(dòng)子甲基化檢測(cè)的意義[J];中國(guó)婦產(chǎn)科雜志;2013年12期

2 劉瑾;魏瓊;;宮頸癌中FHIT基因CpG島甲基化檢測(cè)意義[J];中華實(shí)用診斷與治療雜志;2012年04期

3 徐軍;王紅琳;陸杲川;王治潔;林曉;周宏衛(wèi);;子宮頸癌組織中抑癌基因DNA甲基化的檢測(cè)[J];中華婦產(chǎn)科雜志;2007年06期

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本文編號(hào)：2632111