發(fā)布時間：2020-04-18 12:54

【摘要】：引言宮頸癌是女性第二大常見惡性腫瘤,死亡率居女性惡性腫瘤第三位,其中約90%的宮頸癌死亡發(fā)生在發(fā)展中國家。宮頸癌篩查的普及和人乳頭瘤病毒(Human Papillomavirus,HPV)疫苗的使用,使宮頸癌成為可預防的惡性腫瘤。但是HPV和細胞學篩查仍存在較大的漏診風險,宮頸癌缺乏精準的早期篩查標志物。因此,尋找能夠有效識別宮頸癌及其癌前病變的特異性分子標志物,補充目前宮頸癌早期篩查方法的不足,具有重要意義。研究表明DNA甲基化是惡性腫瘤發(fā)生的早期事件,且與宮頸癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān),可作為宮頸癌早期診斷的特異性分子標志,應(yīng)用DNA甲基化檢測技術(shù)能提高宮頸癌早期診斷的檢出率。具有序列相似性的19家族(趨化因子(C-Cmotif)-樣)成員A4(family with sequence similarity 19 member A4,FAM19A4)是TAFA基因家族成員,國外已有研究發(fā)現(xiàn)FAM19A4基因啟動子甲基化能有效識別宮頸癌及其癌前病變,有望成為新型腫瘤標記物。但國內(nèi)外目前尚無文獻報道FAM19A4基因啟動子甲基化與中國婦女宮頸疾病相關(guān)性的研究,也無FAM19A4基因啟動子甲基化與宮頸癌臨床病理特征及HPV感染型別相關(guān)性的研究。為探討FAM19A4基因啟動子甲基化在我國婦女宮頸癌及其癌前病變診斷中的價值,在國外研究基礎(chǔ)上,本文采用雙探針熒光定量PCR(Taqman probe-based quantitative PCR,q PCR)技術(shù),從宮頸石蠟包埋組織(formalin-fixed and parrffin-embedded,FFPE)和hr-HPV陽性患者的宮頸細胞刷液兩種標本中,檢測不同宮頸疾病中FAM19A4基因啟動子甲基化情況,并比較該基因甲基化在宮頸癌的不同臨床病理特征和不同HPV型別中的差異,分析該基因甲基化在宮頸癌及其癌前病變中的診斷價值。第一部分FAM19A4基因啟動子甲基化檢測在宮頸癌及其癌前病變組織中的臨床意義目的檢測宮頸癌、宮頸癌前病變及正常宮頸/宮頸炎的FFPE標本中,FAM19A4基因啟動子甲基化的表達情況,并探討FAM19A4甲基化對宮頸癌及其癌前病變的診斷價值。方法分別隨機選取31例、22例及23例經(jīng)病理確診為宮頸癌、宮頸HSIL(CINⅢ)及正常宮頸/宮頸炎的FFPE標本,采用q PCR技術(shù)分別檢測三組FFPE標本中FAM19A4基因啟動子甲基化的表達情況,并采用SPSS 23.0軟件進行統(tǒng)計學分析,評估該基因甲基化在宮頸癌及其癌前病變診斷中的價值。結(jié)果1.FAM19A4基因甲基化檢出率在正常宮頸/宮頸炎、宮頸HSIL及宮頸癌的FFPE標本中分別為8.70%(2/23)、72.73%(16/22)和96.77%(30/31),三組間甲基化檢出率存在統(tǒng)計學差異(P0.05),且隨著宮頸病變嚴重程度增加,FAM19A4甲基化的檢出率逐漸升高(Cochran-Armitage趨勢檢驗,P0.05)。2.三組樣本卡方檢驗后的兩兩比較分析顯示,宮頸癌組的FAM19A4基因啟動子甲基化陽性檢出率高于宮頸HSIL組(96.77%vs 72.73%,P0.05);宮頸癌組的FAM19A4基因啟動子甲基化陽性檢出率高于正常宮頸/宮頸炎組(96.77%vs 8.70%,P0.05);及宮頸HSIL組的FAM19A4基因甲基化檢出率也高于正常宮頸/宮頸炎組(72.72%vs 8.70%,P0.05)。3.FAM19A4基因啟動子的甲基化檢出情況,在宮頸癌不同年齡段、不同病理類型、不同臨床分期、不同腫瘤大小及不同淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀態(tài)中的差異均無統(tǒng)計學意義(P0.05)。結(jié)論FAM19A4基因可能是宮頸細胞癌變的特異性分子標志物。從正常宮頸到癌前病變再向浸潤癌的進展過程中,FAM19A4基因啟動子甲基化檢出率逐漸升高,提示該基因甲基化可能在宮頸癌的發(fā)生發(fā)展中起著一定作用。第二部分hr-HPV陽性宮頸細胞刷液中FAM19A4基因啟動子甲基化檢測在宮頸癌及其癌前病變診斷中的臨床意義目的檢測高危型HPV(high-risk types of human papillomavirus,hr-HPV)陽性患者的宮頸細胞刷液中,FAM19A4基因啟動子甲基化在不同宮頸疾病中的表達情況,探索AM19A4甲基化與宮頸癌臨床病理特征及HPV感染型別的相關(guān)性,及比較該基因甲基化與細胞學、HPV16/18分型在宮頸癌及其癌前病變診斷中的差異和價值。方法選取264例hr-HPV陽性(包括HP16,18,31,33,35,39,45,51,52,56,58,59,66和68)患者的宮頸細胞刷液,經(jīng)2位以上病理醫(yī)師確定組織學診斷分別為宮頸癌72例、宮頸HSIL 70例、宮頸LSIL 45例及正常宮頸/宮頸炎77例,采用q PCR技術(shù)分別檢測五組不同宮頸疾病的細胞刷液中,FAM19A4基因啟動子甲基化的表達情況,并采用SPSS 23.0軟件進行統(tǒng)計學分析。檢測FAM19A4甲基化表達在不同臨床病理特征的宮頸癌及不同HPV感染型別中的差異。同時比較HPV16/18分型、細胞學檢測和FAM19A4甲基化三種方法,在檢測HSIL以上病變(≥HSIL/HSIL+)時的靈敏度、特異度、陽性預測值(Positive predictive value,PPV)、陰性預測值(Negative predictive value,NPV)及約登指數(shù)(Youden’s index,YI)的差異,評估該基因甲基化在宮頸癌及其癌前病變早期診斷中的價值。結(jié)果1.FAM19A4基因啟動子甲基化檢出率分別為:正常宮頸/宮頸炎組9.09%(7/77)、宮頸LSIL組24.44%(11/45)、宮頸HSIL組58.57%(41/70)及宮頸癌組94.44%(68/72),四組別間差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05),且隨著宮頸病變嚴重程度增加,FAM19A4甲基化的檢出率逐漸升高(Cochran-Armitage趨勢檢驗,P0.05)。2.五組卡方檢驗后的兩兩比較分析顯示,任意兩組別間的FAM19A4基因啟動子甲基化檢出率的差異均有統(tǒng)計學意義(P0.05)。3.與正常宮頸/宮頸炎組相比,宮頸癌、宮頸HSIL及宮頸LSIL組中FAM19A4基因啟動子甲基化檢出率的OR值分別170.00(95%CI:47.60-607.16)、14.138(95%CI:5.685-35.156)、3.24(95%CI:1.15-9.08),均有統(tǒng)計學意義。4.72例hr-HPV陽性宮頸癌細胞刷液中,FAM19A4基因啟動子的甲基化檢出情況,在宮頸癌不同年齡段、不同病理類型、不同臨床分期、不同腫瘤大小、和不同淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀態(tài)中均無統(tǒng)計學差異(P0.05)。5.不同HPV分型與FAM19A4基因啟動子甲基化檢出率間存在相關(guān)性(P0.05)。在所有hr-HPV陽性患者的宮頸細胞刷液中,FAM19A4基因啟動子甲基化檢出率在HPV16/18感染組別中高于非HPV16/18感染組(66.15%vs 30.60%,P0.05)。在非癌變的hr-HPV陽性宮頸細胞刷液中,FAM19A4基因啟動子甲基化檢出率在HPV16/18感染組別中仍高于非HPV16/18感染組(43.84%vs22.69%,P0.05)。6.FAM19A4基因啟動子甲基化在檢測≥宮頸HSIL病變時的靈敏度稍低于HPV16/18分型聯(lián)合細胞學檢測(85.84%vs 93.81%),但特異度、PPV、NPV及YI均高于聯(lián)合檢測。與單獨FAM19A4甲基化檢測相比,FAM19A4甲基化聯(lián)合HPV16/18分型檢測后,在檢測≥宮頸HSIL病變時的靈敏度和NPV均稍增高,但特異度、PPV及YI均明顯下降。結(jié)論1.hr-HPV陽性細胞刷液中,FAM19A4基因可能是宮頸癌的特異性腫瘤標記物。隨著宮頸病變進展,FAM19A4基因甲基化檢出率逐漸升高,表明該基因甲基化可能與宮頸癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。2.與傳統(tǒng)HPV分型和細胞學檢查相比,FAM19A4基因啟動子甲基化在診斷≥宮頸HSIL病變時具有優(yōu)勢,FAM19A4甲基化能提高宮頸癌及其癌前病變檢出的準確率,有望成為宮頸癌診斷的一種輔助手段。
【圖文】：

圖 1: ddH2O、正常外周血及宮頸癌的 FAM19A4 及內(nèi)參 ACTB 基因擴增曲線Figure 1: Amplification curves of ddH2O, normal peripheral blood DNA ancervical cancer samples3 統(tǒng)計學方法采用 SPSS 23．0 軟件進行統(tǒng)計學分析，所有統(tǒng)計檢驗均為雙側(cè)檢驗。計量資料以均數(shù) 標準差（ SD）表示。計量資料的兩獨立樣本比較采用 Mann-Whitney 檢驗， =0.05。計量資料的多樣本比較采用 Kruskal-Wallis H 檢驗， =0.05；組間的兩兩比較采取 Bonferroni 校正，矯正后的檢驗水準 =0.05/比較次數(shù)。計數(shù)資料采用 Pearson 卡方檢驗或 Fisher 精確概率法， =0.05；組間的兩兩比較采取Bonferroni 校正，矯正后的檢驗水準 =0.05/比較次數(shù)。線性趨勢采用 Cochran-Armitage 趨勢檢驗， =0.05。定義 P<0.05 為差異有統(tǒng)計學意義。
【學位授予單位】：廣州醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R737.33

【參考文獻】

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2 劉瑾;魏瓊;;宮頸癌中FHIT基因CpG島甲基化檢測意義[J];中華實用診斷與治療雜志;2012年04期

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本文編號：2632111