【摘要】：研究目的:本研究旨在通過對(duì)PRMT5和與PRMT5相互作用的Snail和Nu RD(MTA1)復(fù)合物相互作用機(jī)制以及功能的研究,對(duì)PRMT5在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的作用有更深入的了解,對(duì)PRMT5作為腫瘤檢測、治療新靶點(diǎn)的可能性提供依據(jù)。具體分為以下三點(diǎn):1、探索與PRMT5相關(guān)聯(lián)的蛋白以及蛋白之間相互作用的方式。2、探討PRMT5、Snail和Nu RD(MTA1)復(fù)合物相互結(jié)合構(gòu)成的復(fù)合物在轉(zhuǎn)錄調(diào)控中發(fā)揮的作用以及方式。3、探究PRMT5在宮頸癌侵襲轉(zhuǎn)移以及在其它腫瘤發(fā)生發(fā)展中的作用。研究方法:1、通過免疫親和純化聯(lián)合銀染質(zhì)譜分析的方法,鑒定可能與PRMT5結(jié)合的蛋白,應(yīng)用免疫共沉淀(co-IP)和快速蛋白液相色譜技術(shù)(FPLC)的實(shí)驗(yàn)方法對(duì)銀染結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證,并利用GST pulldown實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步驗(yàn)證蛋白的結(jié)合機(jī)制。2、利用Ch IP技術(shù)聯(lián)合Ch IP-seq測序分析尋找PRMT5/Snail/Nu RD(MTA1)復(fù)合物三者共同調(diào)控的靶基因,并通過q Ch IP方法,驗(yàn)證三者調(diào)控的靶基因,以及三者對(duì)靶基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控的方式。3、利用宮頸癌細(xì)胞系進(jìn)行體外實(shí)驗(yàn),包括檢測EMT標(biāo)志物表達(dá)的實(shí)驗(yàn)、劃痕修復(fù)實(shí)驗(yàn)和Transwell實(shí)驗(yàn);NOD-SCID小鼠構(gòu)建動(dòng)物模型進(jìn)行宮頸癌細(xì)胞體內(nèi)原位成瘤和轉(zhuǎn)移的檢測。4、收集宮頸癌組織和癌旁組織標(biāo)本,用PRMT5的特異抗體進(jìn)行免疫組化的染色分析,并檢測多種腫瘤組織標(biāo)本中PRMT5的表達(dá)水平。結(jié)果:1、PRMT5可以與轉(zhuǎn)錄因子Snail和Nu RD(MTA1)復(fù)合物相互結(jié)合為一個(gè)有機(jī)整體發(fā)揮表觀遺傳調(diào)控作用。2、PRMT5、Snail和Nu RD(MTA1)復(fù)合物可以作為一個(gè)整體參與轉(zhuǎn)錄調(diào)控,共同抑制某些靶基因的表達(dá);并且三者發(fā)揮調(diào)控作用的模式可能是協(xié)同作用,Snail作為一個(gè)轉(zhuǎn)錄因子可以識(shí)別并結(jié)合在靶基因的啟動(dòng)子區(qū)域,進(jìn)而招募PRMT5、Nu RD(MTA1)復(fù)合物催化組蛋白的對(duì)稱性二甲基化并去組蛋白乙酰化,使染色質(zhì)結(jié)構(gòu)緊密,抑制靶基因E-cadherin、?-catenin和GATA3等的轉(zhuǎn)錄。3、PRMT5在體外和體內(nèi)都能促進(jìn)宮頸癌細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移。此外,懸浮成球?qū)嶒?yàn)發(fā)現(xiàn)PRMT5的表達(dá)與宮頸癌細(xì)胞的干性正相關(guān),進(jìn)一步證實(shí)PRMT5對(duì)宮頸癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移具有重要作用。4、PRMT5在宮頸癌組織中表達(dá)增高,并且隨著病理分級(jí)的增高表達(dá)升高;多種腫瘤組織標(biāo)本的免疫組化分析結(jié)果表明PRMT5在多種腫瘤組織中高表達(dá)。結(jié)論:我們的研究首次發(fā)現(xiàn)并鑒定了PRMT5/Snail/Nu RD(MTA1)相互結(jié)合為一個(gè)有機(jī)整體,通過抑制E-cadherin、?-catenin和GATA3的表達(dá)參與到腫瘤細(xì)胞的EMT和侵襲轉(zhuǎn)移的調(diào)控,對(duì)宮頸癌以及多種腫瘤的發(fā)生和轉(zhuǎn)移起促進(jìn)作用。首次發(fā)現(xiàn)PRMT5在宮頸癌和多種腫瘤組織中高表達(dá),提示PRMT5可能是一個(gè)潛在的腫瘤標(biāo)記物,為宮頸癌以及其它腫瘤的診斷和治療提供了一個(gè)新的靶點(diǎn)。
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R737.33

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