【摘要】：目的比較ERα、ERβ、AP-1、VEGF在子宮內(nèi)膜異位癥(Endometriosis,EMT)患者中異位內(nèi)膜和在位內(nèi)膜的細(xì)胞定位、蛋白表達(dá)情況及其可能存在的關(guān)聯(lián),并比較這些蛋白在月經(jīng)周期中增生期與分泌期表達(dá)的差異,以探討EMT的發(fā)病機制,為臨床靶向治療EMT提供理論依據(jù)。方法1.選取2016年7月至2017年7月期間因卵巢型子宮內(nèi)膜異位癥(Ovary endomeitriosis,OEMT)就診于安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科的患者40例,其中增生期(n=16),分泌期(n=24),開腹或腹腔鏡下行異位囊腫剝除術(shù),實驗組A收取囊壁,即異位內(nèi)膜組織,實驗組B為同一患者的在位內(nèi)膜組織;以同期因單純輸卵管因素致不孕的患者37例為對照組,其中增生期(n=22),分泌期(n=15),行宮腔鏡檢查,輕刮少量內(nèi)膜組織為對照組。采用免疫組織化學(xué)(Immunohistochemistry,IHC)的方法分析比較ERα、ERβ、AP-1和VEGF在異位內(nèi)膜、在位內(nèi)膜及正常內(nèi)膜組織的陽性表達(dá)及定位分布。2.隨機選取實驗組12例,增生期和分泌期各6例,選取對照組12例,增生期和分泌期各6例,采用蛋白質(zhì)印跡法(Western blot)定量檢測ERα、ERβ、AP-1和VEGF在異位內(nèi)膜、在位內(nèi)膜及正常內(nèi)膜組織中的表達(dá)量,并比較ERα、ERβ、AP-1和VEGF在不同組織中增生期和分泌期蛋白表達(dá)的差異。結(jié)果1.免疫組織化學(xué)染色結(jié)果1.1實驗組異位內(nèi)膜、在位內(nèi)膜和對照組正常內(nèi)膜組織均表達(dá)ERα,陽性率分別為48.0%,55.8%,37.3%,且腺上皮細(xì)胞和間質(zhì)細(xì)胞均有定位。實驗組內(nèi),在位內(nèi)膜ERα的表達(dá)高于異位內(nèi)膜,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(χ~2=4.812,P=0.0280.05);實驗組與對照組比較,異位內(nèi)膜ERα的表達(dá)高于正常內(nèi)膜,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(χ~2=8.990,P=0.0030.05),在位內(nèi)膜ERα的表達(dá)高于正常內(nèi)膜,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(χ~2=26.281,P0.001)。1.2實驗組異位內(nèi)膜、在位內(nèi)膜和對照組正常內(nèi)膜組織均表達(dá)ERβ,陽性率分別為55.0%,50.2%,33.2%,且腺上皮細(xì)胞和間質(zhì)細(xì)胞均有定位。實驗組內(nèi),異位內(nèi)膜ERβ的表達(dá)與在位內(nèi)膜比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(χ~2=1.801,P=0.179);實驗組與對照組比較,異位內(nèi)膜ERβ的表達(dá)高于正常內(nèi)膜,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(χ~2=36.831,P0.001),在位內(nèi)膜ERβ的表達(dá)高于正常內(nèi)膜,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(χ~2=22.809,P0.001)。1.3轉(zhuǎn)錄因子AP-1的主要組成成分是c-Jun蛋白,本實驗用c-Jun代表AP-1在組織中的表達(dá)。實驗組異位內(nèi)膜、在位內(nèi)膜和對照組正常內(nèi)膜組織均表達(dá)c-Jun,陽性率分別為88.5%,86.8%,79.5%,且腺上皮細(xì)胞和間質(zhì)細(xì)胞均有定位。實驗組內(nèi),異位內(nèi)膜c-Jun的表達(dá)和在位內(nèi)膜比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(χ~2=0.565,P=0.452);實驗組與對照組比較,異位內(nèi)膜c-Jun的表達(dá)高于正常內(nèi)膜,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(χ~2=11.782,P=0.0010.05),在位內(nèi)膜c-Jun的表達(dá)高于正常內(nèi)膜,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(χ~2=7.325,P=0.0070.05)。1.4實驗組異位內(nèi)膜、在位內(nèi)膜和對照組正常內(nèi)膜組織均表達(dá)VEGF,陽性率分別為83.2%,81.2%,64.9%,且腺上皮細(xì)胞和間質(zhì)細(xì)胞均有定位。實驗組內(nèi),異位內(nèi)膜VEGF的表達(dá)與在位內(nèi)膜比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(χ~2=0.548,P=0.4590.05);實驗組與對照組比較,異位內(nèi)膜VEGF的表達(dá)高于正常內(nèi)膜,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(χ~2=34.124,P0.001),在位內(nèi)膜VEGF的表達(dá)高于正常內(nèi)膜,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(χ~2=26.415,P0.001)。2.Western blot結(jié)果2.1實驗組異位內(nèi)膜和在位內(nèi)膜ERαIOD值分別為(593.92±8.14)、(623.46±13.19),均高于對照組正常內(nèi)膜的IOD值(455.13±18.86),差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(t=33.098,P0.05;t=35.829,P0.05);實驗組內(nèi),在位內(nèi)膜ERαIOD值高于異位內(nèi)膜,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(t=9.337,P0.05)。對照組正常內(nèi)膜ERα表達(dá)強度具有周期性特點,且增生期(469.92±11.29)高于分泌期(440.33±11.80),差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(t=6.277,P0.05);而實驗組均無此周期性變化特點:異位內(nèi)膜(增生期:595.17±7.64,分泌期:592.67±8.78;t=0.745,P=0.464),在位內(nèi)膜(增生期:625.17±12.86,分泌期:621.75±13.86;t=0.626,P=0.538)。2.2實驗組異位內(nèi)膜和在位內(nèi)膜ERβIOD值分別為(645.21±8.86)、(642.83±6.86),均高于對照組正常內(nèi)膜的IOD值(438.21±31.25),差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(t=38.134,P0.05;t=38.567,P0.05);實驗組內(nèi),異位內(nèi)膜與在位內(nèi)膜ERβIOD值比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(t=1.038,P=0.305)。對照組正常內(nèi)膜ERβ表達(dá)強度具有周期性變化特點,且增生期(460.17±10.07)高于分泌期(417.58±14.64),差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(t=8.300,P0.05);而實驗組均無此周期性變化特點:異位內(nèi)膜(增生期:646.08±10.58,分泌期:644.33±7.11;t=0.476,P=0.639),在位內(nèi)膜(增生期:643.08±7.49,分泌期:642.58±6.50;t=0.175,P=0.863)。2.3實驗組異位內(nèi)膜和在位內(nèi)膜IOD值的ERβ/ERα比值分別為(1.087±0.231)、(1.032±0.258),均高于對照組正常內(nèi)膜(0.964±0.349),差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(t=14.347,P0.05;t=7.606,P0.05);實驗組內(nèi),異位內(nèi)膜IOD值的ERβ/ERα比值(1.087±0.231)高于在位內(nèi)膜(1.032±0.258),差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(t=7.786,P0.05)。2.4實驗組異位內(nèi)膜和在位內(nèi)膜c-Jun IOD值分別為(622.29±9.02)、(618.70±9.79),均高于對照組正常內(nèi)膜的IOD值(428.58±14.86),差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(t=28.22,P0.05;t=51.56,P0.05);實驗組內(nèi),異位內(nèi)膜與在位內(nèi)膜c-Jun IOD值比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(t=1.310,P=0.197)。對照組正常內(nèi)膜c-Jun表達(dá)強度具有周期性變化特點,且增生期(439.25±12.05)高于分泌期(417.92±8.25),差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(t=53.59,P0.05);而實驗組均無此周期性變化特點:異位內(nèi)膜(增生期:625.00±10.41,分泌期:619.58±6.78;t=1.511,P=0.145),在位內(nèi)膜(增生期:621.83±9.01,分泌期:616.92±10.97;t=1.199,P=0.243)。2.5異位內(nèi)膜IOD值的ERβ/ERα值和c-Jun IOD值呈現(xiàn)負(fù)相關(guān),具有統(tǒng)計學(xué)意義(r=-0.555,P0.05),而在位內(nèi)膜IOD值的ERβ/ERα值和c-Jun IOD值的相關(guān)性(r=-0.008),正常內(nèi)膜IOD值的ERβ/ERα值和c-Jun IOD值的相關(guān)性(r=0.233),均無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.971,P=0.274)。2.6實驗組異位內(nèi)膜和在位內(nèi)膜VEGF IOD值分別為(613.21±9.62)、(612.14±8.50),均高于對照組正常內(nèi)膜的IOD值(430.67±22.39),差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(t=36.70,P0.05;t=37.12,P0.05)。實驗組內(nèi),異位內(nèi)膜與在位內(nèi)膜ERβIOD值比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(t=0.413,P=0.618)。對照組正常內(nèi)膜VEGF表達(dá)強度具有周期性變化特點,且增生期(449.92±10.87)高于分泌期(411.42±11.02),差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(t=8.616,P0.05);而實驗組均無此周期性變化特點:異位內(nèi)膜(增生期:615.75±8.80,分泌期:610.67±10.10;t=1.314,P=0.202),在位內(nèi)膜(增生期:613.75±9.23,分泌期:610.50±7.75;t=0.934,P=0.360)。2.7 IOD值的ERβ/ERα比值和VEGF IOD值的相關(guān)性在異位內(nèi)膜(r=-0.225)、在位內(nèi)膜(r=0.127)和正常內(nèi)膜(r=0.327),均無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.292,P=0.553,P=0.119)。結(jié)論1.EMT患者在位內(nèi)膜中,ERα高表達(dá);異位內(nèi)膜中,ERβ的作用高于ERα。2.EMT患者的異位內(nèi)膜和在位內(nèi)膜中,AP-1和VEGF均高表達(dá),且ERβ和ERα的比值與AP-1呈負(fù)相關(guān),AP-1和VEGF在EMT的發(fā)展中起重要作用。3.正常內(nèi)膜中ERα、ERβ、AP-1和VEGF表達(dá)強度呈現(xiàn)周期性特點,且增生期高于分泌期;而EMT異位內(nèi)膜和在位內(nèi)膜,這些蛋白的表達(dá)強度均無此周期性變化,提示EMT內(nèi)膜細(xì)胞的生物學(xué)行為發(fā)生改變。
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R711.71

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2604896