【摘要】：目的:肥胖和高血糖不但與I型子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生和發(fā)展密切相關(guān),而且與子宮內(nèi)膜癌的高病死率相關(guān)。肥胖伴有糖代謝異常的子宮內(nèi)膜癌患者的化療效果差。高糖下子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞通過調(diào)節(jié)AMPK/mTOR/S6信號(hào)通路而促進(jìn)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞的生長(zhǎng)和增殖。二甲雙胍作用于AMPK靶點(diǎn)而激活A(yù)MPK信號(hào)通路,從而發(fā)揮抗腫瘤的作用。另外,二甲雙胍可以提高化療藥物順鉑的抗腫瘤的能力,與單用順鉑相比,二甲雙胍聯(lián)合順鉑具有協(xié)同抗腫瘤的效應(yīng)。因此,在本研究中,我們應(yīng)用已建立的子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系(HEC-1-B、Ishikawa),探討體外不同葡萄糖濃度培養(yǎng)條件下應(yīng)用二甲雙胍、順鉑以及二甲雙胍與順鉑聯(lián)合抗腫瘤機(jī)制。方法:體外通過不同糖濃度(低糖:5.5mmol/L、高糖:25.5mmol/L)培養(yǎng)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系HEC-1-B和Ishikawa,分別用不同濃度的二甲雙胍、順鉑以及二者聯(lián)合作用于兩種細(xì)胞,使用CCK-8法評(píng)價(jià)不同糖濃度下以上三種藥物對(duì)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞增殖抑制的影響;使用PI染色法和Annexin V/PI法檢測(cè)不同糖濃度下二甲雙胍、順鉑以及二甲雙胍聯(lián)合順鉑對(duì)兩種子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞周期和凋亡的影響;通過Western蛋白印跡實(shí)驗(yàn)檢測(cè)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞在不同糖濃度環(huán)境下,應(yīng)用以上藥物干預(yù),觀察AMPK/mTOR/S6信號(hào)通路相關(guān)蛋白的變化,并檢測(cè)細(xì)胞周期蛋白cyclinD1以及細(xì)胞抗凋亡蛋白MCL-1的變化,以明確在高糖環(huán)境下應(yīng)用二甲雙胍、順鉑以及二甲雙胍聯(lián)合順鉑對(duì)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞生長(zhǎng)代謝的干預(yù)效果及其機(jī)制。結(jié)果:不同糖濃度下,二甲雙胍、順鉑以及二甲雙胍聯(lián)合順鉑對(duì)HEC-1-B和Ishikawa細(xì)胞增殖抑制呈劑量依賴式。二甲雙胍、順鉑和二者聯(lián)合分別通過G0/G1期、G2/M期和S期阻滯Ishikawa和HEC-1-B細(xì)胞增殖。Western蛋白印跡實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,隨著藥物濃度增高,HEC-1-B和Ishikawa細(xì)胞cyclinD1、MCL-1、p-S6表達(dá)下降,p-AMPK表達(dá)增強(qiáng)。另外,在藥物濃度相同時(shí),高糖濃度上調(diào)p-AMPK以及下調(diào)cyclinD1、MCL-1、p-S6能力顯著低于低糖。結(jié)論:二甲雙胍、順鉑以及二甲雙胍聯(lián)合順鉑均抑制子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞的增殖抑制,而且二甲雙胍與順鉑聯(lián)合應(yīng)用可以增加順鉑誘導(dǎo)的AMPK活化,抑制AMPK/mTOR/S6信號(hào)通路的表達(dá),并且通過阻滯細(xì)胞周期的S期、誘導(dǎo)凋亡增強(qiáng)順鉑的抗腫瘤作用。在高糖濃度時(shí),二甲雙胍、順鉑以及二甲雙胍聯(lián)合順鉑對(duì)HEC-1-B和Ishikawa細(xì)胞的增殖抑制作用低于低糖。通過應(yīng)用AMPK激動(dòng)劑二甲雙胍降低血糖的同時(shí)靶向干預(yù)以上信號(hào)通路,同時(shí)聯(lián)合化療藥物順鉑產(chǎn)生協(xié)同作用,提高化療療效,為糖代謝異常的子宮內(nèi)膜癌患者的個(gè)體化治療提供新的思路。
【圖文】：

體外不同糖濃度下順鉑聯(lián)合二甲雙胍對(duì)子宮內(nèi)膜癌治療效果的評(píng)估對(duì)細(xì)胞增殖的抑制作用更顯著（P < 0.001）。而且二甲雙胍與順鉑的聯(lián)合應(yīng)用對(duì)細(xì)胞的增殖抑制率高于單用順鉑和二甲雙胍。以上結(jié)果表明二甲雙胍可以增加順鉑對(duì)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞的增殖抑制作用，而且高糖濃度可以影響順鉑、二甲雙胍及順鉑聯(lián)合甲雙胍對(duì)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞的敏感性。

21圖 2 HG：高糖（High Glucose） LG：低糖（Low Glucose） M：二甲雙胍（ Metformin） C：順鉑（Cisplatin）。應(yīng)用二甲雙胍、順鉑以及二甲雙胍與順鉑聯(lián)合作用于子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系 HEC-1-B 和Ishikawa 細(xì)胞，使每種藥物所處的糖濃度為 25.5 mmol/L 和 5.5mmol/L，培養(yǎng) 48h 后，Annexin V/PI染色法,圖 A、B、C 結(jié)果顯示：①三組藥物均以劑量依賴的方式引起子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞凋亡（*P < 0.05）；②藥物在低糖環(huán)境中誘導(dǎo)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞凋亡的作用顯著增加（*P < 0.05）。圖 D、E、F 為 western blot結(jié)果：①糖濃度相同時(shí)，隨著藥物濃度增高，，MCL-1 表達(dá)降低。②藥物濃度相同時(shí)，高糖可以增加MCL-1 的表達(dá)。β-actin 作為內(nèi)參。
【學(xué)位授予單位】：濟(jì)南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R737.33

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本文編號(hào)：2597189