【摘要】：研究背景卵巢儲備功能低下(decreasing ovarian reserve,DOR)是指由于卵巢內(nèi)儲存的可募集的卵泡數(shù)目減少或卵母細胞質(zhì)量下降,從而導致月經(jīng)稀發(fā)以及經(jīng)量減少、卵巢早衰或過早絕經(jīng),最終導致生育能力下降甚至不孕的現(xiàn)象。影響DOR發(fā)生的原因及機制有很多,包括基因、年齡、激素水平波動等。國內(nèi)外學者的研究結(jié)果普遍呈現(xiàn)出隨著女性年齡的增長,其卵巢的儲備功能也受到了一定的影響呈現(xiàn)功能逐漸減弱的趨勢的特點。DOR為無排卵性不孕的常見原因之一,在對此不孕癥患者行控制性超促排卵(Controlled ovarian hyperstimulation,COH)時,呈現(xiàn)出卵巢反應低下、卵子品質(zhì)降低、獲卵數(shù)減少、受精率不高、優(yōu)質(zhì)胚胎數(shù)量減少及妊娠率下降等現(xiàn)象。對不孕癥婦女采取COH進行卵巢刺激的研究中,卵巢低反應發(fā)生率約9%-24%。此外,由于卵巢反應低下導致5%-18%的IVF周期取消率。隨著對DOR患者研究越來越深入,對其治療取得了較大進展,包括促排卵方案的改變、預治療的藥物的應用等。其中對預治療藥物的應用研究多樣,例如脫氫表雄酮(Dehydroepiandrosterone,DHEA)、生長激素、輔酶Q10、中藥驗方等等。DHEA是近年來應用于治療DOR患者較為廣泛的雄激素,其作用機制以及應用都受到了世界范圍內(nèi)的密切關(guān)注。研究顯示,對DOR患者采用低劑量的雄激素,對于患者卵泡儲備的募集并進入其生長發(fā)育區(qū)域有促進作用,并且在雄激素的作用下,竇前卵泡及竇卵泡上的雄激素受體發(fā)揮促進作用,使得卵泡膜間質(zhì)細胞及顆粒細胞的增生,從而減少卵泡的凋亡和閉鎖等,這些機制的改變能夠改善卵巢的反應性。近年來,對DHEA的研究不斷深入,DHEA的生理及病理活性得到進一步闡明,如調(diào)節(jié)糖尿病,抗癌、增強免疫力和延緩衰老等生理及病理活性被越來越多的研究證實。同樣地,DHEA在輔助生殖方面的研究也隨著研究技術(shù)的發(fā)展不斷深入。對DHEA治療的有效性尚存爭議。此外DHEA對卵巢的作用機制,其對卵泡募集的影響原理還不明確。本研究主要分兩部分,首先從臨床觀察DHEA對行IVF-ET的DOR不孕患者治療結(jié)局的影響,接著在建立動物模型的基礎(chǔ)上研究DHEA預處理對DOR小鼠模型性激素及卵巢組織的改變,從而探討DHEA對卵巢的作用機理。第一部分 脫氫表雄酮對行IVF-ET的卵巢儲備功能低下不孕患者治療結(jié)局的臨床研究目的:本研究分別通過對卵巢儲備功能低下的不孕癥患者進行DHEA預處理,分析基礎(chǔ)卵巢激素以及胚胎質(zhì)量從而探討DHEA對卵巢儲備功能的作用影響。方法:回顧性分析2015年1月至2015年9月在中山市博愛醫(yī)院生殖中心接受治療的卵巢儲備功能下降患者169例,根據(jù)周期超促排卵前(COH)是否接受輔助治療,將患者分為DHEA治療組(n=89)和對照組(n=80),DHEA治療組均有1次IVF-ET失敗經(jīng)歷。DHEA治療前、后IVF周期相關(guān)指標行自身對照比較,并分別與同期對照組比較。研究組患者再次接受體外受精/卵胞漿內(nèi)單精子注射(IVF/ICSI)治療治療前口服DHEA25mg每三次輔助治療,療程為3個月;對照組患者IVF/ICSI-ET周期前未使用輔助治療。比較兩組患者的一般情況(年齡、不孕年限、基礎(chǔ)激素水平、竇卵泡計數(shù)等)、超促排卵情況(總量、使用天數(shù)、hCG日E2水平、獲卵數(shù)、胚胎發(fā)育(受精數(shù)、卵裂數(shù)、優(yōu)質(zhì)胚胎數(shù)、受精率、卵裂率、優(yōu)質(zhì)胚胎率等)及臨床治療結(jié)局(胚胎種植率、臨床妊娠率、流產(chǎn)率及周期取消率)。結(jié)果:兩組年齡、不育年限、BMI和不孕原因比較,差異均無統(tǒng)計學意義。DHEA治療組治療前、后BMI、基礎(chǔ)LH、基礎(chǔ)E2、基礎(chǔ)T比較,差異均無統(tǒng)計學意義;DHEA治療組治療前、后AFC、AMH比較,DHEA治療組治療后基礎(chǔ)FSH、AMH與對照組比較,差異均有統(tǒng)計學意義(P0.05)。DHEA治療組治療前、后和對照組Gn總劑量、Gn使用天數(shù)、hCG日E2之間比較,差異均無統(tǒng)計學意義;DHEA治療組治療后獲卵數(shù)較治療前升高,差異有統(tǒng)計學意義;DHEA治療組治療前、后優(yōu)質(zhì)胚胎數(shù)比較,以及分別與對照組比較,差異均有統(tǒng)計學意義(P0.05)。DHEA治療組治療前、后和對照組受精率、周期取消率之間比較,差異均無統(tǒng)計學意義;DHEA治療組治療后卵裂率、臨床妊娠率較治療前組及對照組升高,差異有統(tǒng)計學意義;DHEA治療組治療后流產(chǎn)率、多胎妊娠率、活產(chǎn)率與對照組比較,差異均無統(tǒng)計學意義(P0.05)。結(jié)論:DHEA可以改善重復周期的DOR患者卵巢反應性,提高優(yōu)質(zhì)胚胎的數(shù)量,改善妊娠結(jié)局。第二部分DOR模型小鼠的建立及評價目的:為了進一步研究DHEA對卵巢的影響,本章主要實驗目的為構(gòu)建DOR模型小鼠。方法:建模組先分別給10只小鼠腹腔注射5IU孕馬血清;注射54h后,對小鼠行腹腔注射5IU絨毛膜促性腺激素;注射19h后,再行腹腔注射25IU前列腺F2α。3次注射為1個完整的超排周期,12h后開始下一個周期,共進行10個周期。同時,試驗期間每晚21:00至次日上午9:00將建模組的小鼠放入臭氧接觸箱中,保持臭氧接觸箱中心臭氧濃度不變,穩(wěn)定在2.8 mg/m3左右。對照組為10只小鼠先腹腔注射生理鹽水(與5IUPMSG等體積),54h后給予生理鹽水(與5 IUHCG等體積)腹腔注射,19h后再行生理鹽水(與25IUPGF2α等體積)腹腔注射。1個完整的超排周期要行使3次腹腔注射才算完成,12 h后則開始進行下一個超排周期,總共進行10個周期,常規(guī)飼養(yǎng),每日清晨定時記錄雌鼠動情周期的變化情況。結(jié)果:與對照組比較,建模組的每低倍鏡視野卵泡計數(shù)較對照組降低,且始基卵泡比例減少至18.99%,而對照組的始基卵泡占27.75%,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。對照組血清FSH、LH較建模組顯著升高(1.27±0.37vs41.46±1.53IU/L,289.13± 23.64vs728.36 ± 25.90ng/L),差異有統(tǒng)計學意義。對照組血清 E2、AMH、INHB 較建模組顯著降低(16.45±0.57vs13.45±0.39ng/L,12.02±2.53vs2.8±1.13ng/L,23.45±1.12vs10.18±0.57 ng/L),差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。結(jié)論:造模后的小鼠出現(xiàn)卵巢儲備下降即確定成功建立DOR模型。第三部分脫氫表雄酮對DOR模型小鼠激素及卵巢影響的研究目的:探討脫氫表雄酮對卵巢儲備功能低下(DOR)小鼠激素及卵巢的影響。方法:連續(xù)序貫腹腔注射孕馬血清(PMSG),人絨毛膜促性腺激素(HCG),前列腺素F2α(PGF2α)產(chǎn)生連續(xù)超數(shù)排卵,再結(jié)合臭氧吸入構(gòu)建DOR模型。將小鼠隨機分為正常組、DOR模型組、和脫氫表雄酮(DHEA)治療組,每組10只。DHEA組給予0.4mg/0.3ml DHEA灌胃,而正常組與模型組均給予相同劑量生理鹽水灌胃21天。采用ELISA法檢測血清雌二醇(E2)、孕酮(P)和抗苗勒氏管激素(AMH)等水平以及通過Real time-PCR檢測FSH受體mRNA的變化,同時通過HE染色結(jié)合顯微鏡觀察卵巢內(nèi)各級卵泡數(shù)目及占比。結(jié)果:與模型組比較,DHEA治療組血清E2、P及AMH水平均明顯升高,且卵巢平均每低倍視野卵泡數(shù)量增加;同時DHEA給藥能夠降低由于DOR過程導致的FSH受體表達量上調(diào)。結(jié)論:DHEA能改善雌性DOR小鼠激素與相應受體表達,增加竇卵泡比例,但不能增加始基卵泡數(shù)目而改善卵巢功能。
【圖文】：

邐博士學位論文邐逡逑材料：采用耐受臭氧的亞克力材料及無毒粘合劑進行臭氧接觸箱的制作；逡逑所需設(shè)備：定時開關(guān)、臭氧發(fā)生器、臭氧濃度檢測儀以及小型可調(diào)轉(zhuǎn)速換氣扇各１逡逑個；逡逑其他部件：合頁２個，導線所需若干米，螺釘若干個，５０邋ｃｍ長３號硅膠管一根；逡逑外形尺寸：１００＊５０＊８０邋（長＊寬＊高，ｃｍ）。逡逑具體的臭氧接觸箱布局如下圖所示：逡逑

為了進一步觀察，臭氧接觸法對小鼠基本情況的影響，我們繼續(xù)考察了該過逡逑程對小鼠體重的影響，通過連續(xù)觀察對照組小鼠與ＤＯＲ建模組小鼠體重，我們發(fā)逡逑現(xiàn)該建模方法對小鼠體重無明顯影響，具體的體重變化見圖２－３：逡逑各組小鼠體重變化統(tǒng)計逡逑２７．００逡逑２６．５０邐■逡逑ＩＳ逡逑＾邋２４．００邋Ｖ邐Ｖ－一￥逡逑２３．５０逡逑２３．００逡逑２２．５０逡逑１２３４５６７８９邐１０逡逑＋建模組對照組逡逑圖２－３．ＤＯＲ建模過程對小鼠體重的影響逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋２－３．邋Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ邋ｏｆ邋ＤＯＲ邋ｐｒｏｃｅｓｓ邋ｏｎ邋ｔｈｅ邋ｗｅｉｇｈｔ邋ｏｆｍｉｅ逡逑２．３．２造模方法對小鼠卵巢始基卵泡池影響逡逑根據(jù)各級卵泡的ＨＥ染色及顯微特征（圖２－４）對各級卵泡計數(shù)統(tǒng)計，結(jié)果顯逡逑示低倍鏡下平均每視野卵泡計數(shù)建模組９．０８±４．９４個，對照組５．５０±２．６個，差異逡逑有統(tǒng)計學意義。建模組的始基卵泡比例減少至１８．９９％，而對照組的始基卵泡占逡逑２７．７５％，差異有統(tǒng)計學意義（圖２－５）。逡逑３７逡逑
【學位授予單位】：南方醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R714.8

【參考文獻】

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1 蔡品均;黃文玲;金哲;李玲;林佳靜;;補腎調(diào)肝法對自身免疫性卵巢早衰小鼠卵巢促卵泡生成素受體mRNA表達的影響[J];疑難病雜志;2010年03期

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本文編號：2589041