【摘要】：卵巢惡性腫瘤的死亡率在婦科惡性腫瘤中最高，卵巢癌術(shù)后治療最主要的輔助治療手段是化療，可用如順鉑、阿霉素等藥物，，但用藥一段時(shí)間后腫瘤就會(huì)產(chǎn)生耐藥性，導(dǎo)致化療失敗。有研究表明GSTP與腫瘤耐藥密切相關(guān)，而其他同工酶與耐藥性聯(lián)系報(bào)道較少。 EAD是本實(shí)驗(yàn)室合成的芳香酰胺類GSTM高選擇性潛抑制劑，BPD是針對(duì)GSTM和GSTA都有效的低選擇性GST潛抑制劑，本文研究了二者對(duì)常見卵巢癌耐藥細(xì)胞的增敏作用及機(jī)理。 本課題首先對(duì)SKOV3、SKOV3/DDP，COC1、COC1/DDP及人體正常細(xì)胞LO2和HEK293的GSTM、GSTA的表達(dá)進(jìn)行了檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)不同細(xì)胞株GSTM、GSTA的表達(dá)量及比活具有明顯差異，耐藥細(xì)胞株的GSTM、GSTA表達(dá)量及比活明顯高于非耐藥細(xì)胞株和人體正常細(xì)胞株。由此我們推測(cè)GSTM、GSTA與SKOV3、COC1耐藥相關(guān)。 經(jīng)測(cè)定發(fā)現(xiàn)EAD/BPD都具有逆轉(zhuǎn)GSTM和GSTA介導(dǎo)的SKOV3、COC1耐藥作用。以下研究探討了EAD/BPD對(duì)SKOV3/DDP、COC1/DDP順鉑耐藥性的逆轉(zhuǎn)作用，以及EAD/BPD使SKOV3/DDP、COC1/DDP細(xì)胞對(duì)DDP增敏的效應(yīng)。 本實(shí)驗(yàn)用siRNA分別使SKOV3/DDP、COC1/DDP中的GSTM或GSTA沉默，結(jié)果顯示SKOV3/DDP、COC1/DDP對(duì)順鉑敏感性增加。 （1）CCK法檢測(cè)不同濃度EAD/BPD協(xié)同不同濃度DDP對(duì)SKOV3/DDP、COC1/DDP的耐藥逆轉(zhuǎn)作用，測(cè)定逆轉(zhuǎn)率。（2）流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)不同處理后細(xì)胞凋亡情況。（3）Western-blot檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)Caspase-3、Bcl-xl、bak、bax和Bcl-2的表達(dá)水平是否上調(diào)或下調(diào)。結(jié)果表明，一定濃度EAD或BPD分別作用后，SKOV3/DDP和COC1/DDP細(xì)胞對(duì)DDP敏感性增加，DDP的IC50可降低到不耐藥細(xì)胞的水平，這種逆轉(zhuǎn)作用隨著抑制劑濃度的增大而增強(qiáng)；流式細(xì)胞術(shù)同樣可以證明抑制劑具有逆轉(zhuǎn)作用，同時(shí)證明具有明顯逆轉(zhuǎn)作用的濃度抑制劑對(duì)細(xì)胞沒有明顯毒性；Western-blot檢測(cè)顯示抑制劑與低濃度的DDP協(xié)同作用于耐藥細(xì)胞時(shí)，caspase-3及其底物PARP活化，bcl-2家族中促凋亡蛋白表達(dá)上調(diào)，而抑制凋亡成員表達(dá)下調(diào)。 綜上所述，GSTM與GSTA高表達(dá)與卵巢癌SKOV3和COC1細(xì)胞獲得順鉑耐藥性有密切關(guān)系；EAD/BPD都能特異并有效提高COC1/DDP和SKOV3/DDP細(xì)胞株對(duì)順鉑的敏感性，提高化療藥物治療水平，為研究腫瘤藥物增敏劑提供參考。
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R737.31

【參考文獻(xiàn)】

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1 李春民;趙桂森;;以谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶為靶點(diǎn)的抗腫瘤藥物研究進(jìn)展[J];中國(guó)藥學(xué)雜志;2006年14期

本文編號(hào)：2586124