本文關(guān)鍵詞：Wnt在宮頸癌發(fā)生發(fā)展中作用及表達(dá)調(diào)控機(jī)制的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的宮頸癌是嚴(yán)重威脅婦女生命安全的頭號惡性腫瘤,發(fā)病率較高,且呈逐年上升和低齡化趨勢。宮頸癌發(fā)病是一個緩慢的過程,從正常宮頸組織發(fā)展為宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變,再到宮頸癌需要數(shù)十年時間,早期診斷、早期治療是改善宮頸癌治療效果、生活質(zhì)量及死亡率的主要策略,也是降低宮頸癌死亡率的關(guān)鍵所在。在癌細(xì)胞調(diào)控及調(diào)節(jié)中會涉及多個信號通路,如Hedgehog、Notch和Wnt等。Wnt是一類發(fā)育相關(guān)的保守信號通路,對于平衡組織發(fā)育后的各個系統(tǒng)均具有重要功能。Wnt信號通路對于宮頸癌細(xì)胞的自我更新和分化的調(diào)控作用也會扮演重要角色。因此探究Wnt在宮頸癌發(fā)生發(fā)展中表達(dá)作用,同時研究Wnt上下游信號通路的傳導(dǎo)變化,對于宮頸癌的發(fā)生發(fā)展甚至轉(zhuǎn)移都有非常重要的作用,明確Wnt在宮頸癌發(fā)生發(fā)展中的作用機(jī)制,將為宮頸癌臨床治療提供治療靶點及治療策略提供理論依據(jù)。方法采用免疫組化方法檢測不同宮頸組織中Wnt-3a及β-catenin蛋白表達(dá),測定Wnt-3a陽性表達(dá)率和β-catenin蛋白異常表達(dá)率,并分析其與宮頸癌臨床分期和病理分級的相關(guān)性;其次采用RT-PCR測定四種人宮頸癌細(xì)胞Hela、C33A、Siha、Caski細(xì)胞中Wnt-3和β-catenin m RNA表達(dá)情況,四種宮頸癌細(xì)胞中均可見Wnt-3和β-catenin m RNA表達(dá),除C33A細(xì)胞中表達(dá)略低外,三種宮頸癌細(xì)胞Hela、Siha、Caski中Wnt-3和β-catenin m RNA表達(dá)均超過相對表達(dá)量1.0以上,提示W(wǎng)nt-3和β-catenin在宮頸癌細(xì)胞表達(dá)較高,這與人宮頸癌組織中免疫組化檢查結(jié)果一致。為了分析Wnt變化以及下游級聯(lián)通路的變化,將不同宮頸組織放入液氮研磨,進(jìn)行免疫印跡分析,分析不同宮頸組織中p-m TOR、p-STAT3和SOX2蛋白表達(dá)水平。結(jié)果1)正常宮頸組織中幾乎不表達(dá)Wnt-3a,Wnt-3a陽性表達(dá)定位于細(xì)胞漿中,宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變和宮頸鱗癌組織中可見細(xì)胞漿中表達(dá)的Wnt-3a蛋白黃色陽性表達(dá),Wnt-3a陽性表達(dá)率不是很高。正常宮頸組織、宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變和宮頸鱗癌組織中的Wnt-3a陽性表達(dá)率分別為10%(2/20)、35.0%(7/20)及50.0%(15/30)。正常宮頸組織中,β-catenin蛋白呈連續(xù)細(xì)胞膜表達(dá),其表達(dá)為棕黃色,主要分布在棘層與上皮基底層細(xì)胞膜上,細(xì)胞漿無著色;宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變和宮頸鱗癌組織中,細(xì)胞膜上β-catenin蛋白表達(dá)呈現(xiàn)不同程度缺失,甚至不表達(dá),β-catenin異常表達(dá)主要集中于細(xì)胞漿及細(xì)胞核中。正常宮頸組織、宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變和宮頸鱗癌組織中的β-catenin異常表達(dá)率分別為15.00%(3/20)、50.00%(10/20)及80.00%(24/30)。在30例宮頸癌標(biāo)本中,按FIGO標(biāo)準(zhǔn)分期,16例I期,8例II期,6例III期,Wnt-3a陽性表達(dá)率分別為43.75%(7/16)、50.00%(4/8)及66.67%(4/6),三組間比較和兩組間比較均不具顯著性差異,p0.05;β-catenin異常表達(dá)率分別為68.75%(11/16)、87.50%(7/8)及100.00%(6/6),可見隨著臨床分期的升高,β-catenin陽性表達(dá)逐漸升高,但三組間比較和兩組間比較均不具顯著性差異,p0.05。按病理分級11例G1級,14例G2級,5例G3級,Wnt-3a陽性表達(dá)率分別為45.45%(5/11)、42.86%(6/14)及80.00%(4/5),三組間比較和兩組間比較均不具顯著性差異,p0.05;β-catenin陽性表達(dá)率分別為63.64%(7/11)、85.71%(12/14)及100.00%(5/5),可見隨著宮頸癌病理分級的升高,β-catenin異常表達(dá)逐漸升高,但三組間比較和兩組間比較均不具顯著性差異,p0.05。2)四種宮頸癌細(xì)胞中均可見Wnt-3和β-catenin m RNA表達(dá),除C33A細(xì)胞中表達(dá)略低外,三種宮頸癌細(xì)胞Hela、Siha、Caski中Wnt-3和β-catenin m RNA表達(dá)均超過相對表達(dá)量1.0以上,提示W(wǎng)nt-3和β-catenin在宮頸癌細(xì)胞表達(dá)較高,這與人宮頸癌組織中免疫組化檢查結(jié)果一致。3)宮頸鱗癌組織中p-m TOR、p-STAT3和SOX2蛋白表達(dá)顯著高于正常宮頸上皮組織和宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變組織,而宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變組織p-m TOR、p-STAT3和SOX2蛋白表達(dá)則顯著高于正常宮頸上皮組織。結(jié)論研究結(jié)果表明Wnt信號通路表達(dá)的激活及β-catenin的異常表達(dá)與宮頸癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān),可以作為早期診斷宮頸癌的附加指標(biāo),而且Wnt活化和β-catenin異常表達(dá)可能與m TOR-STAT3信號通路的變化相關(guān),以m TOR-STAT3信號通路為關(guān)鍵靶點調(diào)控Wnt活化和β-catenin異常表達(dá),可以為宮頸癌治療、預(yù)防轉(zhuǎn)移等臨床治療提供治療靶點和治療措施。
【關(guān)鍵詞】：宮頸癌 Wnt β-catenin mTOR STAT3
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R737.33
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 第一章 引言10-13
• 第二章 實驗方法13-26
• 1 實驗材料13-19
• 1.1 組織樣本13
• 1.2 試劑13-15
• 1.3 儀器15-16
• 1.4 主要試劑的配制16-19
• 2 實驗方法19-26
• 2.1 細(xì)胞復(fù)蘇19
• 2.2 細(xì)胞培養(yǎng)19
• 2.3 細(xì)胞及病理標(biāo)本蛋白及RNA提取19-21
• 2.4 蛋白印跡分析21-23
• 2.5 實時熒光定量PCR檢測23-25
• 2.6 數(shù)據(jù)處理25-26
• 第三章 結(jié)果26-31
• 3.1 不同宮頸組織中Wnt-3a及 β-catenin蛋白表達(dá)26-28
• 3.2 宮頸癌細(xì)胞中Wnt-3a和 β-catenin mRNA表達(dá)分析28-29
• 3.3 不同宮頸組織中信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑變化29-31
• 第四章 討論31-35
• 參考文獻(xiàn)35-40
• 綜述40-46
• 參考文獻(xiàn)43-46

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 成夏炫;史麗云;張航;;Wnt信號通路與腫瘤藥物治療研究進(jìn)展[J];健康研究;2011年06期

  本文關(guān)鍵詞：Wnt在宮頸癌發(fā)生發(fā)展中作用及表達(dá)調(diào)控機(jī)制的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：258566