【摘要】：目的：本實驗通過沉默Twist基因表達，分析宮頸癌Caski細胞中Bcl-2蛋白的表達及化療敏感性的影響。 方法：通過生物信息學方法分析針對干擾Twist基因表達的載體序列，證實Twist基因干擾序列已經(jīng)構(gòu)建成功；利用脂質(zhì)體lipofectamin2000將重組干擾載體轉(zhuǎn)染至宮頸癌Caski細胞，建立穩(wěn)定低表達Twist基因的重組細胞系；RT-PCR檢測各組細胞系中Twist基因的mRNA表達水平；不同濃度的紫杉醇處理低表達Twist基因的重組細胞系48h后，MTT檢測細胞生長抑制率，篩選出最佳抑制濃度；Western blot檢測低表達Twist基因的重組細胞系中Bcl-2蛋白的表達情況。 結(jié)果： 1.成功構(gòu)建低表達Twist基因的重組細胞系Caski-Twist-shRNA。 2.四個不同干擾載體轉(zhuǎn)染組中，四組細胞Twist-mRNA表達均下降，轉(zhuǎn)染組2Twist-mRNA表達下降最明顯，與其它三組相比，差異有顯著性（P0.05），表明轉(zhuǎn)染組2的轉(zhuǎn)染率最高；4個轉(zhuǎn)染組與未轉(zhuǎn)染組或空白載體轉(zhuǎn)染組相比，其Twist-mRNA表達下降，差異有顯著性（P0.05）；未轉(zhuǎn)染組和空白載體轉(zhuǎn)染組比較無顯著性差異（P0.05）。 3.隨著紫杉醇濃度的增加，三組細胞的生長抑制率也相應增加，且轉(zhuǎn)染組細胞的生存率均低于未轉(zhuǎn)染組或空白載體轉(zhuǎn)染組，未轉(zhuǎn)染組、空白載體轉(zhuǎn)染組和實驗組的IC50值分別為5.86μM、1.06μM和6.80μM；轉(zhuǎn)染組的IC50值較空白載體轉(zhuǎn)染組或未轉(zhuǎn)染組明顯增高（P0.05）。 4. Caski-Twist-shRNA中Bcl-2蛋白表達明顯下調(diào)，，與未轉(zhuǎn)染組或空白載體轉(zhuǎn)染組比較，差異有顯著性意義（P0.05），空白載體轉(zhuǎn)染組與未轉(zhuǎn)染組蛋白表達無明顯差異（P0.05）。 結(jié)論： 1.Twist基因表達下調(diào)，宮頸癌Caski細胞對紫杉醇敏感性增強。 2.Twist基因表達降低，導致Caski細胞對紫杉醇敏感性增加，可能與Bcl-2的下調(diào)有關(guān)。
【圖文】：

Twist-shRNA3:GATCC-GGTACATCGACTTCCTCTA-TTCAAGAGA-TAGAGGAAGTCGATGTACC- TTTTTTTwist-shRNA4:GATCC-CCTCTGCATTCTGATAGAA-TTCAAGAGA-TTCTATCAGAATGCAGAGG-TTTTTT

TCC-CCTCTGCATTCTGATAGAA-TTCAAG-TTTTTT圖 1 真核載體及 4 個干擾序列的測序結(jié)果質(zhì)粒通過電泳跑膠能清楚看到各組質(zhì)粒呈馬蹄狀
【學位授予單位】：南華大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R737.33

【參考文獻】

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本文編號：2573310