【摘要】：目的：本實(shí)驗(yàn)通過(guò)沉默Twist基因表達(dá)，分析宮頸癌Caski細(xì)胞中Bcl-2蛋白的表達(dá)及化療敏感性的影響。 方法：通過(guò)生物信息學(xué)方法分析針對(duì)干擾Twist基因表達(dá)的載體序列，證實(shí)Twist基因干擾序列已經(jīng)構(gòu)建成功；利用脂質(zhì)體lipofectamin2000將重組干擾載體轉(zhuǎn)染至宮頸癌Caski細(xì)胞，建立穩(wěn)定低表達(dá)Twist基因的重組細(xì)胞系；RT-PCR檢測(cè)各組細(xì)胞系中Twist基因的mRNA表達(dá)水平；不同濃度的紫杉醇處理低表達(dá)Twist基因的重組細(xì)胞系48h后，MTT檢測(cè)細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率，篩選出最佳抑制濃度；Western blot檢測(cè)低表達(dá)Twist基因的重組細(xì)胞系中Bcl-2蛋白的表達(dá)情況。 結(jié)果： 1.成功構(gòu)建低表達(dá)Twist基因的重組細(xì)胞系Caski-Twist-shRNA。 2.四個(gè)不同干擾載體轉(zhuǎn)染組中，四組細(xì)胞Twist-mRNA表達(dá)均下降，轉(zhuǎn)染組2Twist-mRNA表達(dá)下降最明顯，與其它三組相比，差異有顯著性（P0.05），表明轉(zhuǎn)染組2的轉(zhuǎn)染率最高；4個(gè)轉(zhuǎn)染組與未轉(zhuǎn)染組或空白載體轉(zhuǎn)染組相比，其Twist-mRNA表達(dá)下降，差異有顯著性（P0.05）；未轉(zhuǎn)染組和空白載體轉(zhuǎn)染組比較無(wú)顯著性差異（P0.05）。 3.隨著紫杉醇濃度的增加，三組細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制率也相應(yīng)增加，且轉(zhuǎn)染組細(xì)胞的生存率均低于未轉(zhuǎn)染組或空白載體轉(zhuǎn)染組，未轉(zhuǎn)染組、空白載體轉(zhuǎn)染組和實(shí)驗(yàn)組的IC50值分別為5.86μM、1.06μM和6.80μM；轉(zhuǎn)染組的IC50值較空白載體轉(zhuǎn)染組或未轉(zhuǎn)染組明顯增高（P0.05）。 4. Caski-Twist-shRNA中Bcl-2蛋白表達(dá)明顯下調(diào)，，與未轉(zhuǎn)染組或空白載體轉(zhuǎn)染組比較，差異有顯著性意義（P0.05），空白載體轉(zhuǎn)染組與未轉(zhuǎn)染組蛋白表達(dá)無(wú)明顯差異（P0.05）。 結(jié)論： 1.Twist基因表達(dá)下調(diào)，宮頸癌Caski細(xì)胞對(duì)紫杉醇敏感性增強(qiáng)。 2.Twist基因表達(dá)降低，導(dǎo)致Caski細(xì)胞對(duì)紫杉醇敏感性增加，可能與Bcl-2的下調(diào)有關(guān)。
【圖文】：

Twist-shRNA3:GATCC-GGTACATCGACTTCCTCTA-TTCAAGAGA-TAGAGGAAGTCGATGTACC- TTTTTTTwist-shRNA4:GATCC-CCTCTGCATTCTGATAGAA-TTCAAGAGA-TTCTATCAGAATGCAGAGG-TTTTTT

TCC-CCTCTGCATTCTGATAGAA-TTCAAG-TTTTTT圖 1 真核載體及 4 個(gè)干擾序列的測(cè)序結(jié)果質(zhì)粒通過(guò)電泳跑膠能清楚看到各組質(zhì)粒呈馬蹄狀
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R737.33

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2573310